TÉCNICAS LABORATORIAIS DE BIOLOGIA MITOSE OBJETIVO: Observar e identificar as diferentes fases da mitose em que se encontravam as células do meristema da cebola (Allium cepa)
INTRODUÇÃO A continuidade de uma espécie depende fundamentalmente do processo de multiplicação celular. No caso dos organismos unicelulares, a divisão da célula leva a um aumento do numero de indivíduos (reprodução assexuada) Nos organismos pluricelulares, a divisão celular produz um crescimento dos indivíduos pelo aumento dos números de células em seu corpo, ou os conduz a reparação de células perdidas, ou ainda, os capacita à reprodução da sua espécie através da formação de células reprodutoras (esporos e gametas). Essa multiplicação se deve ao diversos eventos sofridos pela célula, o qual denominamos ciclo celular e detalharemos a seguir, dando ênfase apenas sobre o que acontece com os cromossomos em cada fase, sem preocupação com os demais orgânulos. No ciclo de vida das células, chamado ciclo celular, devemos considerar dois momentos: a interfase e a mitose. Tanto a mitose quanto a interfase apresentam-se subdivididas em fases ou períodos, apenas por finalidade didática, porque todos os processos são contínuos. A fase mitótica é a fase do ciclo celular onde ocorrem duas divisões, a divisão do núcleo – mitose - e do citoplasma – citocinese. A mitose integra 4 subfases: prófase, metáfase, anáfase e telófase. A mitose consiste numa divisão dos cromossomos para uma divisão da célula, isto é, uma célula com certo numero de cromossomos se divide dando origem a duas células-filhas cujo material genético é idêntico ao da célula inicial. Todas estas fases se caracterizam por uns dados conjuntos de fenômenos: Interfase É na interfase que ocorre a duplicação dos cromossomos, antes de se inciar a divisão celular. A interfase compreende três subfases: G1: é o período que se segue a divisão celular e antecede a duplicação do DNA (G tem como significado Gap e o traduzimos como intervalo) S ou Sintético: fase da duplicação (síntese do DNA) G2: etapa final da interfase em que existe o dobro de material nuclear de G1, mas o numero de cromossomos ainda é o mesmo. Prófase (pro = antes) A prófase é a primeira fase da mitose. Nessa etapa, os cromossomos já duplicados começam a se espessar, tornando-se visíveis, os centríolos duplicados afastam-se, aparecendo entre eles as fibras do fuso mitótico; a carioteca se desintrega, e os cromossomos ficam livres no citoplasma.Cada cromossomo formado apresenta-se formado por duas cromátides, unidas pelo centrômero.
Metáfase (meta = depois) No citoplasma, durante a prófase, formam-se fibras de um sistema chamado mitótico. Cada cromossomo duplicado prende-se às fibras do fuso pelo centrômero. É a metáfase. Nessa fase os cromossomos chegaram ao máximo de seu espessamento e visibilidade; cada cromossomo prende-se a fibra do fuso, pelo seu centrômero, na região mediana da célula. Anáfase (Ana = para cima) Os centrômeros duplicam-se; as fibras do fuso se encurtam, levando cada cromátide a um dos pólos da célula. As duas cromátides separadas passam a ser chamadas cromossomos irmãos. Telófase (telo = final). Nesta fase os cromossomos tornam-se menos visíveis; formam-se as cariotecas em volta dos dois lotes de cromossomos; aparecem novamente os nucléolos; o citoplasma se divide por estrangulamento, nas células vegetais, aparecem algumas vesículas na região mediana da célula (fragmoplasto), nas quais acumula-se o material que formará a parede celular. Citocinese Terminada a mitose, vai ocorrer então a citocinese, que consiste na separação do citoplasma da célula-mãe, em duas partes iguais, originando assim as duas novas células.
MATERIAIS • • •
Microscópio óptico Preparação definitiva com células de um meristema cebola (Allium cepa) Papel toalha
REAGENTE •
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Óleo de imersão
METODOLOGIA Liga-se o microscópio e higieniza-se com papel toalha as lentes e objetivas Pega-se uma lamina com preparação de células da cebola Higieniza-se a lamina com papel toalha Observa-se a lamina definitiva ao microscópio óptico. Se necessário recorrese a objetiva de imersão. Coloca-se uma gota de óleo de imersão Observa-se a anota-se os resultados
RESULTADOS Fases da mitose em desenho e microscópio óptico respectivamente Prófase
Metáfase
Anáfase
Telófase
DISCUSSÃO DOS RESULTADOS A descrição do processo mitótico é indireta, baseando-se na observação de células mortas, convenientemente preparadas, mas a mitose tem duração variável de uma há algumas horas dependendo da espécie da célula e das condições do ambiente, podendo chegar mesmo a 24 horas de duração. Sendo que a temperatura ambiental pode acelerar, retardar ou mesmo bloquear o processo mitótico. A mitose caracteriza-se por: modificações nucleares (cariodierése) e por alternações citoplasmáticas (citodierése) (que ocorrem simultaneamente). A mitose em células animais é astral (há centríolos) e nos vegetais superiores é anastral (não se observa centríolos). Em tecidos que estão em crescimento verificam-se mitoses sucessivas. Ao analisarmos a preparação definitiva com células do meristema da cebola (Allium cepa) foi possível observar os diversos eventos ocorridos na mitose. Interfase: Na interfase não foi possível observar, mas nesta fase é possível observar o destaque do núcleo da célula com a cromatina dispersa. Prófase: nesta fase utilizando a objetiva 100x com óleo de imersão foi possível distinguir os seus cromossomos, apesar de ainda se encontrarem enrolados. O desaparecimento do nucléolo está relacionado ao fato de cessar a síntese de DNA nos cromossomos compensados. Sendo o nucléolo um local de síntese de RNAr, com a condensação dos cromossomos essa síntese cessa e o nucléolo desaparece. Metáfase: quando a célula encontrava-se em metáfase foi possível identificar a placa equatorial formada pelo fuso ligado ao fuso acromático. Durante a metáfase, nas células vegetais os cromossomos se dispõem em toda a região equatorial formando uma coroa. Anáfase: nesta fase foi possível observar os cromossomos ligados ao fuso acromático na sua ascensão aos pólos da célula, semelhantes aos dedos da mão. Telófase: nesta ultima fase da mitose foi possível observar 2 núcleos, com a cromatina dispersa de novo, de maneira que os cromossomos não eram perceptíveis. Citocinese: (vegetal) a citocinese não foi possível observar, mas algumas células encontravam-se na interfase, onde apenas se destacava o núcleo da célula com a cromatina dispersa. Na citocinese das células vegetais não ocorre invaginacao da membrana plasmática, e sim a formação centrifuga de uma placa celular, originada a partir de pequenas vesículas diferenciadas do complexo de Golgi, ricas em pectina. O conjunto dessas vesículas é denominado fragmoplasto. Essas vesículas se fundem
e seu conteúdo dá origem a lamela média, a seguir inicia-se a formação da parede celular.
CONCLUSÃO A partir desta prática experimental foi possível identificar as diferentes fases da mitose das células eucarióticas, que é um processo de extrema importância para os vegetais e animais, uma vez que lhe possibilita o seu crescimento e desenvolvimento. Repetindo-se desde o aparecimento da primeira célula eucariótica, e que permite a continuidade da vida na Terra, garantindo a estabilidade quantitativa e qualitativa do código genético dos eucariontes. De uma forma geral, podemos concluir que a mitose é um processo de divisão celular em que uma célula dá origem a duas células-filhas, geneticamente idênticas, que recebem o mesmo numero e tipo de cromossomos devido ao processo de replicação semiconservativa do DNA que ocorre durante a interfase e as demais fases da mitose. Em relação à planta analisada podemos observar que o meristema é de fato uma zona celular com uma invulgar freqüência de divisões celulares, visto que é uma zona de intenso crescimento da planta.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS •
DE ROBERTIS, Jr., Biologia Celular e Molecular, 14ª Edição, Buenos Aires, Liberias Yenny S.A., 2001, Direitos exclusivos para a língua portuguesa, Editora Guanabara, 2003, Rio de Janeiro.
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Vários Autores, Anglo Ensino Médio: apostila caderno 2, São Paulo, Editora e Gráfica Anglo LTDA MATRIZ, 2001.
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LOPES, Sonia, Bio Introdução à Origem da Vida e Biologia; Citologia; Reprodução e Embriologia; histologia Volume 1, 5ª edição, São Paulo, Editora Saraiva,1999.
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Trabalhos escolares, disponível em: http://www.notapositiva.com/trab_estudantes/trab_estudantes/biologia/biolog ia_trabalhos/mitose_da_cebola.htm, acessado 25/04/08 as 10:00hs.
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Portal de Pesquisas educacionais, disponível em http://www.coladaweb.com/biologia/ciclomitose.htm, acessado em 25/04/08 as 14:00 hs.
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BIOGEOnet, disponível em www.ese.ipvc.pt/~biogeonet/mit.htm, acessado em 25/04/08 as 16:00hs.