رويكردي نوين به
و اهميت آن در تشخيصهاي افتراقي بخش دوم
بخش دوم مقاله علی ملكي ( کارشناس ارشد هماتولوژی ،مدیریت درمان سازمان تامین اجتماعی کرمانشاه )
دکتر سعید کاویانی ( PhDهماتولوژی ،عضو هیئت علمی گروه هماتولوژی دانشگاه تربیت مدرس )
گسترة خوني در آنميهاي ماكروسيتيك
در تشخيص افتراقي آنميهاي ماكروسيتيك ،اسمير خوني اهميت خاصی دارد .در كمبود اسيد فوليك و كوباالمين (ويتامين )B12در اسمير خون محیطی سلولهای ماكروسيت ،ماكرواوالوسيت و نوتروفيلهاي هيپرسگمانته مشاهده ميشوند (شكل .)3Aدر موارد شديدتر آنمي ،ممكن است پويي كيلوسيتوز مشخص همراه با سلولهاي قطره اشكي و قطعات گلبولهاي قرمز نيز مشاهده شوند .اگرچه امروزه اين آنميها براساس سنجش اسيد فوليك يا كوباالمين تشخيص داده ميشوند اما ارزيابي گستره خوني به دو دليل همچنان با اهميت قلمداد ميشود .نخست آنكه با اين آزمايش امکان يك تشخيص اوليه سريع و شروع درمان مناسب در بيماران آنميك تا زمان انجام آزمايشهاي اختصاصيتر فراهم ميگردد ،دوم آنکه گاهي برخي بيماران عليرغم شواهد باليني حاكي از كمبود ويتامين ،B12داراي نتايج سنجش طبيعی ميباشند. اين ناهمخواني ناشي از آن است كه در روش اندازهگيري مذكور اغلب كوباالمين متصل به هاپتوكورينها اندازهگيري ميشود در
حاليكه ويتامين B12عملكردي (كه متصل به ترانس كوباالمين IIاست) به ميزان خيلي كمي در اين روش شركت ميكند .به همين شكل گاهي كمبود حاد اسيد فوليك در بيماراني كه داراي ميزان طبيعي فوالت تام در گلبولهاي قرمز هستند ،رخ ميدهد. بيماريهاي كبدي و افراط در نوشيدن الكل از جمله عوامل معمول ماكروسيتوز به شمار ميروند .در بیشتر اين موارد گلبولهاي قرمز بيمار نسبت به ماكرواوالوسيتها ،كرويتر هستند و نيز سلولهاي تارگت و استوماتوسيت ميتوانند حضور داشته باشند اما نوتروفيلهاي هيپرسگمانته مشاهده نميشوند. يكي از عوامل مهم ماكروسيتوز در بيماران سالخورده، سندرمهاي ميلوديسپالستيك ( )MDSهستند .در اين حالت نماي گسترة خوني كه ممكن است از نظر تشخيصي مهم باشد شامل نوتروفيلهاي هيپوگرانوله و هيپولوبوله (شكل ،)3B سلولهاي بالست (شكل ،)3Bپالكتهاي بسيار درشت يا هيپوگرانوله ،اجسام پاپن هايمر (شكل )3Cو حضور جمعيت 5
اندكي از سلولهاي هيپوكروم ميكروسيتيك كه منجر به نماي دي مورفيك (دوريختی) در اسمير ميشوند (شكل )3C ميباشد .همچنين ماکروسيتهاي آنميهاي ديس اريتروپوئيتيك مادرزادي ( )CDAدر همراهي با پويي كيلوسيتوز مشخص ،يك
نماي خوني ويژه را به اسمير خوني ميدهند (شكل .)3Dشايان ذكر است در ماكروسيتوز ناشي از هموليز حاد يا از دست دادن اخير خون ،گستره خون يك پلي كرومازي را نشان ميدهد كه از شمارش افزايش يافته رتیكولوسيتها ناشي ميشود.
شکل 3
تغییرات گلبولهای قرمز در انواع مختلف آنميهاي ماکروسیتیک. پانل Aگستره خونی را در آنمی پرنشیوز
نشان ميدهد که در آن آنیزوسیتوز،
ماکروسیتوز
ونوتروفیلهای
هیپرسگمانته
دیده ميشود .پانل Bگستره خونی در
سندرم میلودیسپالستیک نشان ميدهد که در آن یک بالست (نوک پیکان) و دو نوتروفیل هیپولوبوله (یکی از آنها دو هسته ای شده)
دیده ميشود .پانل Cگستره خونی در
سندرم میلودیسپالستیک نشان ميدهد که در
آن آنیزوسیتوز ،پویی کیلوسیتوز ،ماکروسیتها، استوماتوسیتها و یک اریتروسیت واجد اجسام پاپن هایمر (نوک پیکان) دیده ميشود. چنانچه مشاهده ميشود گستره نمای
دیمورفیک داشته و در آن ماکروسیتهای بخوبی هموگلوبینه شده و میکروسیتهای
هیپوکرومیک هر دو مشاهده ميشوند .پانل
Dآنمی دیس اریتروپوئیتیک مادرزادی نوع 1را نشان ميدهد که در آن آنیزوسیتوز، پویی کیلوسیتوز و تعدادی ماکروسیت
مشاهده ميشود.
گسترة خوني در آنميهاي ميكروسيتيك
عموم ًا در تشخيص افتراقي آنميهاي ميكروسيتيك ،بررسي گسترة خوني داراي اهميت كمتري نسبت به آنميهاي ماكروسيتيك است .غالب ًا امكان تشخيص زمانی فراهم ميگردد كه انديسهاي گلبولهاي قرمز و سطح فريتين سرم به همراه شاخصهاي التهاب در زمينهاي از نمايههاي باليني تفسير شوند. مواردي همچون حضور اجسام پاپن هايمر و دي مورفيسم گلبولهاي قرمز در آنميهاي سيدروبالستيك و بازوفيلي منقوط در مسموميت با سرب (شكل )4Aو برخي انواع تاالسميها داراي اهميت تشخيصي ميباشند. 6
گسترة خوني در تاالسمي و هموگلوبينوپاتي
گسترة خون محيطي در تشخيص اوليه و افتراقي بيماري سلول داسي سودمند بوده و بهويژه هنگامي كه پاسخهاي مربوط به الكتروفورز هموگلوبين بيمار و كروماتوگرافي مايع با فشار باال ( )HPLCدر همان لحظه در دسترس نباشند ،اين آزمايش ميتواند بسیار کمک کننده باشد .افرادي كه براي هموگلوبين Sهموزيگوس هستند ( )HbSSبه كمخوني سلول داسي مبتال ميباشند .با اين حال افرادي كه هتروزيگوسيته دوگانه براي هموگلوبين S , Cدارند ( ،)HbSCداراي سطح طبيعي هموگلوبين در خون ميباشند .چنانچه در اين افراد گسترة خون محيطي مورد ارزيابي قرار نگيرد ،تشخيص آنها ممكن است با صفت سلولي داسی ( )Traitاشتباه شود .در اين حالت توجه به نماي گسترة خوني ،سطح هموگلوبين و نتايج آزمون حالليت ،غالب ًا به يك تشخيص صحيح منتهي ميشود (شكل 4Bو .)4Cدر
گسترة خوني افراد هتروزيگوس دوگانه در غالب موارد سلولهاي هدف فراوان ،سلولهاي منقبض شده غيرمنظم ،سلولهاي قايقيشكل و سلولهاي تاخورده ( )Foldedمشاهده ميشود اما تعداد سلولهاي داسيشكل كالسيک اندك است .همچنين در اين افراد غالب ًا سلولهاي پويي كيلوسيت تيپيك هموگلوبين SC ديده ميشود .اين سلولها تنها هنگامي که هموگلوبين S , C هر دو حضور دارند ،شكل ميگيرند .گفتنيست در پارهاي موارد در اسمير خوني يك فرد هتروزيگوت دوگانه تنها سلولهاي هدف
و سلولهاي منقبض شده نامنظم يافت ميشود .اين حالت قابل تشخيص از بيماري هموگلوبين Cهموزيگوس ( )HbCCنبوده و نياز به انجام آزمون حالليت جهت تفكيك اين دو ميباشد. ارزيابي گسترة خوني همچنين در تشخيص اوليه يك هموگلوبين ناپايدار داراي اهميت ميباشد .اين حالت معمو ًال با سلولهاي منقبض شده نامنظم و ماكروسيتوز همراه است (شكل )4و گاهي ترومبوسيتوپني نيز آنرا همراهي ميكند.
شکل 4
تغییرات گلبولهای قرمز در مسمومیت با سرب و هموگلوبینوپاتیها.
پانل Aگلبولهای قرمز حاوی بازوفیلی
منقوط را در نتیجه مسمومیت با سرب
نشان ميدهد .پانل Bگستره خونی را در
آنمی سلول داسی نشان ميدهد که در
آن یک گلبول قرمز هسته دار (پیکان تیره)، یک سلول داسی (پیکان سفید) و یک سلول
قایقی شکل (نوک پیکان) دیده ميشوند .پانل Cگستره خونی را در بیماری HbSCنشان ميدهد که در آن سلولهای تارگت ،سلولهای منقبض شده نامنظم و پویی کیلوسیت
( HbSCپیکانها) دیده ميشوند .پانل D
هتروزیگوسیتی در هموگلوبین هامراسمیت
(یک هموگلوبین ناپایدار) بهمراه ،سلولهای منقبض شده نامنظم را نشان ميدهد.
گسترة خوني در موارد ترومبوسيتوپني و ترومبوسيتوز
به هنگام برخورد با ترومبوسيتوپني (در پاسخ حاصل از آناليزرهاي هماتولوژي) الزم است جهت تأييد ترومبوسيتوپني و نيز تشخيص احتمالي عامل زمينهاي آن ،گسترة خوني بيمار مورد ارزيابي قرار گيرد .مواردي همچون وجود لختههاي ريز در نمونه، تودههاي پالكتي (شكل .)5Aاقماري شدن پالكتها (شكل )5Bو يا پالكتهاي غيرطبيعي بزرگ ميتوانند باعث كاهش كاذب در شمارش اتوماتيك پالكتها شوند .مشاهدة رشتههاي فيبرين در گسترة خوني (شكل )5Cنشان ميدهد كه احتما ًال ترومبوسيتوپني كاذب ميباشد .از جمله عوامل زمينهاي كه ممكن است با بررسي گسترة خوني آشكار شوند ميتوان به آنومالي مي
هگلين (شكل )5Dترومبوپاتيهاي ميكروآنژيوپاتيك ،لوسميها و لنفومها اشاره نمود. همچنين شمارشهاي باالي پالكت نيز بايستي از طريق بررسي ميكروسكوپي گسترة خوني بيمار مورد تأييد قرار گيرند. افزايش كاذب شمارش اتوماتيك پالكتها ممكن است در نتيجه شمارش ذرات ديگري به عنوان پالكت رخ دهد كه از جمله آنها ميتوان به قطعات گلبولهاي قرمز ،قطعات سيتوپالسمي حاصل از سلولهاي لوسميك و قارچها اشاره نمود. در موارد ترومبوسيتوپني همچنين ارزيابي گسترة خوني از نظر رديابي شواهدي دال بر اختالل ميلوپروليفراتيو از اهميت بااليي 7
برخوردار است .پالكتهاي غول آسا و افزايش تعداد سلولهاي بازوفيل از جملة اين شواهد هستند كه مورد دوم يعني افزايش تعداد بازوفيلهاي خون غالب ًا به شكل قابل اعتمادي توسط آناليزرهاي هماتولوژي تشخيص داده نميشوند .همچنين مواردی از بهبود ناگهاني در شمارش پالكتها بايستي با ارزيابي ميكروسكوپي گسترة خوني تأييد شود .زيرا چنين بهبود دور از انتظاري ميتواند كاذب و ناشي از عوامل ذكر شده در فوق باشد. گاهي در ارزيابيهاي مورفولوژيك پالكتها از روي گسترة خوني نكات تشخيصي باارزشي حاصل ميشود .براي نمونه، كاهش پالكتها همراه با اندازه بزرگ و افزايش چگالي آنها بيانگر از بين رفتن اين سلولهاي در خون محيطي است .اندازه كوچك همراه با ترومبوسيتوپني در سندرم ويسكوت آيدريج يافت ميشود .خاكستري شدن پالكتهاي با ترومبوسيتوپني همراه با فيبروز مغز استخوان در سندرم پالكتهاي خاكستري مشاهده ميشود. گسترة خوني در موارد لوسمي ،لنفوم و نارسايي مغز استخوان
شکل 5
نمای گستره خونی در ترومبوسیتوپنی و خطاهای شمارش اتوماتیک پالکتها .پانل .Aتوده های
بزرگ پالکتی که منجر به کاهش کاذب شمارش پالکتها شده اند .پانل Bپدیده اقماری شدن پالکتها را نشان ميدهد. در پانل Cرشته های فیبرینی در گستره خونی مشاهده ميشود .پانل D آنومالی می هگلین را نشان ميدهد (پالکتهای بزرگ بهمراه یک نوتروفیل واجد انکلوزیون) . .در پانل Eگستره خونی حاوی کاندیدا گالبراتا را نشان ميدهد که باعث افزایش غیرمنتظره شمارش پالکتی ميشوند.
8
هنگامي كه در شمارش اتوماتيك بيماري يك لكوسيتوز، لنفوسيتوز و يا منوسيتوز توصيف نشده مشاهده شود و يا سيستمهاي هشدار دهندة آناليزر حضور سلولهاي بالست را اعالن نمايند ،بررسي گسترة خوني بيمار ضروري ميباشد. در پارهاي از موارد بسته به نوع دستگاه ،هشدار اعالن شده براي لنفوسيتهاي آتيپيك يا واريانت ميتواند حاكي از حضور سلولهاي بالست باشد .شمارشهاي پايين سلولي نيز همانند شمارشهاي باال ،از جمله انديكاسيونهاي بررسي گستره خوني هستند زيرا اين موارد ميتوانند حاكي از آنمي آپالستيك ،لوسمي حاد ،لوسمي سلول مويي و يا انفيلتراسيون سلولهاي بدخيم غيرهماتوپوئيتيك به مغز استخوان باشند .در ارتباط با لوسميها و لنفومها ارزيابي ميكروسكوپي گسترة خوني ميتواند به يك تشخيص قطعي منتهي شود و يا اينكه با مطرح كردن طيفي از تشخيصهاي احتمالي ،به عنوان رهنمودي کارآمد جهت انجام تستهاي اضافي و يا گزينش پانلهاي مناسب آنتيبادي در ايمونوفنوتايپينگ فلوسيتومتري عمل كند .در دو حالت لنفوم بوركيت (شكل )6Aو لوسمي پروميلوسيتيك حاد (شكل )6B بررسي گسترة خوني ميتواند زمينه را براي تشخيص سريع و درمان اختصاصي فراهم آورد.
گسترة خوني و پاسخهاي كاذب احتمالي در روشهاي اتوماتيك
بررسي گسترة خوني زماني كه آناليزر هماتولوژي يك پاسخ غيرمحتمل را به دست ميدهد ضرورت تام دارد .چنين پاسخهايي ميتوانند در موارد مختلف و گوناگوني حاصل شوند از جمله حرارت ديدن و يا منجمد شدن اتفاقي نمونة خون ،هيپرليپیدمي، آگلوتينينهاي سرد ،كرايوگلبولينمي (شكل ،)6Cحضور باكتري و يا قارچ در خون و . ...همچنين نتايج كاذب ممكن است از
ويژگيهاي غيرمعمول سلولهاي خوني و يا پالسما ناشي شوند. به عنوان مثال هنگامي كه آناليزر از واكنش پراكسيداز جهت شناسايي و شمارش افتراقي گلبولهاي سفيد استفاده ميكند، چنانچه نوتروفيلهاي بيمار واجد كمبود ميلوپراكسيداز باشند، شاهد يك نوتروپني كاذب خواهيم بود (شكل .)-حالتهاي ديگري كه ميتوانند باعث شمارشهاي كاذب در روشهاي اتوماتيك شوند شامل تودهاي شدن نوتروفيلها يا پالكتها، اقماري شدن پالكتها و ...ميباشند.
شکل 6
حاالت متفرقه ای که اسمیر خونی می تواند ارزش تشخیصی داشته باشد.
پانل Aلنفوم بورکیت را با سه سلول لنفومایی واکوئوله نشان ميدهد .در پانل B لوسمی پرومیلوسیتیک هیپوگرانوالر همراه با دو پرومیلوسیت لوسمیک دو لوبه مشاهده ميشود .پانل Cرسوب کرایوگلبولینها را در گستره خونی یک فرد مبتال به ویروس هپاتیت Cنشان ميدهد .پانل Dسلولهای تارگت (پیکان کوتاه) ،آکانتوسیتها (پیکان بلند) و یک جسم هاول ژولی (نوک پیکان) را نشان ميدهد که همگی جزو نمای هیپواسپلنیسم به شمار رفته و در اسمیر یک فرد مبتال به آنمی فقر آهن و آتروفی اسپلنیک ناشی از بیماری سیلیاک دیده ميشوند.
گسترة خوني و تشخيصهاي غيرمترقبه
گاهي ارزيابي ميكروسكوپي گسترة خوني ممكن است به يك تشخيص اتفاقي و غيرمترقبه و در عين حال بسيار حياتي براي بيمار منتهي شود .پارهاي از اين تشخيصهاي اتفاقي در جدول 2ذكر شدهاند .يك مثال در اين زمينه رديابي ويژگيهاي يك هيپواسپلنيم غيرمنتظره است (شكل .)6Dكه ميتواند حاكي از مواردي نظير بيطحالي مادرزادي ،آتروفي طحال ،جايگيري آميلوئيد در طحال ،انفيلتراسيون سلولهاي نئوپالستيك در طحال (مث ً ال در لوسمي ،لنفوم يا كارسينوما) ،انفراكشن قبلي طحال يا حتي يك اسپلنكتومي كه بيمار از آن آگاهي ندارد ،باشد .در تمامي موارد ذكر شده بيمار در معرض عوارض هيپواسپلنيسم قرار دارد.
از جمله يافتههاي گسترة خون محيطي در حالت هيپواسپلنيسم ميتوان به وجود سلولهاي هدف ،آکانتوسيت ،اجسام هاول ژولي و ...اشاره نمود. حالت عكس زمانيست كه گسترة خون محيطي فاقد نماي مربتط با هيپواسپلنيسم مورد انتظار باشد (مث ً ال در بيمار تحت جراحي اسپلنكتومي جهت درمان پورپوراي ترومبوسيتوپنيك). اين حالت ميتواند حاكي از وجود يك باقيمانده واجد عملكرد از بافت طحال و يا وجود طحالهاي فرعي باشد كه ميتوانند عود مجدد بيماري را باعث شوند. 9
قطعات گلبولهای قرمز هیپواسپلنیسم کرایوگلبولینمی (ميتواند حاکی از عفونت ویروس هپاتیت Cیا نئوپالسم پالسماسل باشد گلبولهای قرمز آگلوتینه ( که ميتواند حاکی از آگلوتینینهای سرد باشد مانند آنچه که در عفونتهای مایکوپالسمایی ،منونوکلئوز عفونی و یا اختالالت لنفوپرولیفراتیو دیده ميشود) نمای دیسپالستیک تیپیک عفونت HIV مشاهده بالستهای لوسمیک یا سلولهای میلومایی و لنفومایی عفونتهای ناشی از ماالریا و یا دیگر انگلهای خونی (نظیر بابزیوز ،لیشمانیوز ،تریپانوزمیای آفریقایی ،بیماری شاگاس یا فیالریاز) عفونتهای قارچی (کاندیدیاز و هیستوپالسموز) باکتریها (تب راجعه ،Ehrlichosis ،عفونتهای مننگوکوکی یا پنوموکوکی) جدول .2یافتههای اتفاقی در گستره خون محیطی که ميتوانند ارزش تشخیصی داشته باشند
گستره خوني به عنوان بخشي از بايگاني پزشكي
گاهي گسترههاي خوني يك تشخيص اوليه و يا شواهي از يك تشخيص اختصاصي را مث ً ال در سندرمهاي ميلوديسپالستيك، لوسمي ،لنفوم و يا آنميهاي هموليتيك فراهم ميسازند .بنابراين در صورت امكان نگهداري طوالنيمدت اين گسترهها همانند آنچه كه در مورد برشهاي بافتي در تشخيصهاي هيستولوژيك صورت ميگيرد ،اهميت زيادي دارد .در برخي آزمايشگاهها تمامي گستردههاي خوني ارزيابي شده توسط هماتولوژيست آزمايشگاه و يا پاتولوژيست بايگاني ميشوند .در برخي آزمايشگاهها جهت تسهيل در اين امر ،تصويرهايي ديجيتالي از گسترهها تهيه و بايگاني ميشوند.
بحث و نتيجهگيري
حتي در عصر آناليزهاي مولكولي ،گسترههاي خون محيطي همچنان به عنوان يك روش تشخيصي سودمند و مهم به قوت خود باقي ماندهاند .بنابراین الزم است پزشكان معالج به هنگام وجود انديكاسيونهاي باليني در خواست بررسي گسترة خوني نمايند .همچنين پرسنل آزمايشگاه نيز هر زمان كه نتايج شمارش خوني ( )CBCبيمار حاكي از ضرورت ارزيابي اسمير خوني باشد بايستي اقدام به انجام اين آزمايش نمايند.
REFERENCES : 1. Case Records of the Massachusetts General Hospital (Case 30-2004). N Engl J Med 2004;351:1333-41. 2. Lesesve JF, Salignac S, Alla F, et al. Comparative evaluation of schistocyte counting by an automated method and by microscopic determination. Am J Clin Pathol 2004;121: 739-45. 3. Bain BJ. Heinz body haemolytic anaemia in Wilson’s disease. Br J Haematol 1999;104: 647. 4. Diggs LW, Bell A. Intraerythrocytic hemoglobin crystals in sickle cell-hemoglobin C disease. Blood 1965;25:218-23. 5. Bain BJ. Blood smear features of sickle cell-haemoglobin C disease. Br J Haematol 1993;83:516-8. 6. Latif S, Veillon DM, Brown D, et al. Spurious automated platelet count: enumeration of yeast forms as platelets by the Cell-DYN 4000. Am J Clin Pathol 2003;120: 882-5. 7. Arnold JA, Jowri Z, Bain BJ. Candida glabrata in a blood smear. Br J Haematol 1999; 104:1.
10
8. van der Meer W, MacKenzie MA, Dinnissen JW, de Keijzer MH. Pseudoplatelets: a retrospective study of their incidence and interference with platelet counting. J Clin Pathol 2003;56:772-4.
9. Kakkar N. Spurious rise in the automated platelet count because of bacteria. J Clin Pathol 2004;57:1096-7. 10. Shattil SJ. A (blood) smear campaign. Blood 2003;101:2453. 11. Abramson N. Inside blood: a picture (in the microscope) is worth a thousand words. Blood 2004;103:367- 8. 12. Luethi U, Risch L, Korte W, Bader M, Huber R. Telehematology: critical determinants for successful implementation. Blood 2004;103:486-8. 13. Bain BJ. Diagnosis from the Blood Smear. N Engl J Med 2005;353:498-507. 14. Henry J.Bernard. Clinical Diagnosis and Management by laboratory Methods.W.B.Saunders Co, 20th edition, 2001. 15. Bain Barbara j. Blood Cells , Apractical Guid.Blackwell Science ,4th edition, 2006.
بیماران و پزشکان، شرکت ها،نیازمندیهای آزمایشگاهیان آخرین اخبار انجمن های صنفی اطالعات در باره ی آزمایش ها آدرس و مشخصات آزمایشگاه های ایران بهترین مجله برای تبلیغ کاالهای آزمایشگاهی اولین مجله الکترونیک آزمایشگاهیان با تغییرات به روز
11