Micro.docx

Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

Facultad de Ingeniería Química

Laboratorio de Microbiología General

Prácticas de Microbiología Equipo #1  Guerrero Cruz Tarcila  Lima Díaz Daniela Estefanía  García Monico Brenda Daniela

Benemérita Universidad Autónoma de Puebla Facultad de Ingeniería Química

Laboratorio de Microbiología General Práctica No.1 REGLAMENTO PARA INGRESAR AL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA 1. La hora de entrada tiene 10 minutos de tolerancia, después de ese tiempo, se tomará como retardo, cada retardo equivale a medio punto menos en la calificación final del laboratorio. 2. La asistencia deberá ser del 100 % 3. Entrar al laboratorio con la bata puesta y abotonada. 4. Colocar todo su material y ropas en los cajones de las mesas de trabajo o en las mesas laterales del laboratorio. 5. Lavarse las manos antes y después de iniciar la sesión práctica. 6. No comer ni fumar en el laboratorio, ni introducir ningún objeto en la boca. 7. Limpiar y desinfectar el área de trabajo antes y después de usar. 8. No pasear entre las mesas del laboratorio, el trabajo debe realizarse sentado. 9. Hablar solo lo necesario con los compañeros. 10. Antes de iniciar la práctica lea cuidadosamente las instrucciones, siga instrucciones del profesor, si no entiende pregunte. 11. El asa utilizada para el cultivo de microorganismos, debe de esterilizarse en la flama del mechero antes y después de su uso. 12. Informe al profesor de cualquier accidente que ocurra. 13. Todo el material que va a incubar o desechar, debe colocarse en el sitio indicado por el profesor. 14. Sea cuidadoso con el material y equipo que se le proporcione, el material de desecho no contaminado deposítelo en los botes de basura, el material contaminado no lo lave y deposítelo donde le indique el profesor. 15. Etiquete todo el material que se va a incubar, con los siguientes datos: grupo, sección, equipo, nombre del alumno y nombre del profesor. 16. Lávese las manos antes de salir del laboratorio.

Practica No. 2 “PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO”

Introducción Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Puesto que la diversidad metabólica de los microorganismos es enorme, la variedad de medios de cultivo es también muy grande. La mayoría de los medios de cultivo se comercializan en forma de liofilizados que es preciso rehidratar (Solano, 2005). La preparación de un medio de cultivo se reduce en general a pesar la cantidad de medio y re disolverla en agua destilada (libre de inhibidores del crecimiento) siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolábiles se esterilizan por filtración y se añaden al resto de los componentes previamente esterilizados en la autoclave. Los constituyentes habituales de los medios de cultivo son: 1. Agar. Se utiliza como agente solidificante. Es un polisacárido que se obtiene de ciertas algas marinas. Las bacterias no son capaces de degradarlo. 2. Azúcares. Son una fuente de carbono para los microorganismos. Los más empleados son la glucosa, la lactosa y la sacarosa. 3. Extractos. Son preparados de ciertos órganos o tejidos animales o vegetales obtenidos con agua y calor. Ej.: extracto de carne, de levadura. 4. Peptonas. Son proteínas hidrolizadas, se obtienen por digestión química o enzimática de proteínas animales o vegetales. 5. Sistemas amortiguadores. Son sales que se añaden al medio para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano.

6. Indicadores de pH. Son indicadores ácido-base que se añaden para detectar cambios de pH en el medio. 7. Agentes reductores. Sustancias que se añaden al medio para crear las condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios. Ej.: cisteína y tioglicolato. Tipos de medios de cultivo. POR SU CONSISTENCIA: a) Sólidos. Son aquellos que contienen un agente solidificante entre sus componentes, normalmente agar. b) Líquidos. Se denominan caldos y se preparan en tubos o Erlenmeyer. POR SU COMPOSICIÓN: a) Medios generales. Permiten el desarrollo de una gran variedad de microorganismos. b) Medios de enriquecimiento. Favorecen el crecimiento de un determinado grupo de microorganismos, sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del resto. c) Medios selectivos. Permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás. d) Medios diferenciales. Son aquellos en los que se pone de relieve alguna propiedad que un determinado tipo de microorganismos posee. Objetivo Conocer el procedimiento para la preparación de los distintos medios de cultivo para el aislamiento e identificación de microrganismos cepas.

Procedimiento

Preparación de BD BIOXON agar nutritivo

Suspender 23 g del polvo en 1 litro de agua purificada.

Mezclar perfecamente, calentar con agitación frecuentemente.

Hervir durante 1 a 2 minutos hasta disolución.

Esterilizar a 121°C durante 15 minutos.

Determinar la funcionalidad del medio del cultivo con microorganismos típicos.

Fin

Preparación de BD BIOXON agar nutritivo

Suspender 23 g del polvo en 1 litro de agua purificada.

Mezclar perfecamente, calentar con agitación frecuentemente.

Hervir durante 1 a 2 minutos hasta disolución.

Esterilizar a 121°C durante 15 minutos.

Determinar la funcionalidad del medio del cultivo con microorganismos típicos.

Fin

Resultados

Discusión de resultados Los medios de cultivo contienen los nutrientes necesarios para cultivar microorganismos, tales como bacterias, hongos y otros. Los microrganismos no pueden estudiarse solos debido a su tamaño, por lo que solo pueden estudiarse en poblaciones. Estos pueden ser sólidos, líquidos o semisólidos. (Alarcón, 2016). La preparación del medio de cultivo se reduce sencillamente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en agua destilada (libre de inhibidores del crecimiento) siguiendo las instrucciones del fabricante el cual indica la composición, la caducidad, y la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar e incluso como debe esterilizarse. (Solano, 2005). Las sustancias termolábiles, se esterilizan por filtración y se añaden al resto de los componentes después de que estos hayan sido previamente esterilizados en la autoclave y enfriados a temperatura ambiente ó a 40-50ºC si se trata de medios con agar. Antes de su esterilización los medios líquidos se reparten en los recipientes adecuados (tubos, matraces, etc.). Si es un medio sólido y se ha de distribuir en tubos o en matraces será necesario fundir el agar en baño María u horno microondas, una vez fundido y homogenizado, se distribuye en caliente a los tubos o matraces (no en placas Petri) se tapa y se esteriliza en la autoclave. Una vez finalizada la esterilización los medios se dejarán enfriar a temperatura ambiente y en el caso de medios sólidos contenidos en tubos deberán, en su caso, inclinarse para que al solidificarse adopten la forma de agar inclinado o pico de flauta(slant) si tal es su finalidad. 5 Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y estéril dentro de ellas y en un ambiente aséptico (por ejemplo, en la proximidad de la llama de un mechero Bunsen) es conveniente homogenizar el medio en el transcurso de la operación para evitar que el agar sedimente en el fondo del recipiente y no se distribuya por igual en todas las placas.

Conclusiones Al finalizar la práctica obtuvimos un buen agar sin ningún tipo de contaminación, debido a que seguimos cuidadosamente cada una de las instrucciones, cabe denotar que es de suma importancia pesar la cantidad de agar exacta para el volumen de agua determinada, al mismo tiempo tener mucho cuidado al momento de calentar el medio para disolver, así mismo el tiempo y presión de la esterilización sea la indicada, al igual de respetar el circulo de esterilidad al momento de vaciar.

Cuestionario 1. Diga usted que entiende por: Esterilización: Es la destrucción total de todos los microorganismos, incluso de las formas más resistentes como esporas bacterianas, virus no lipídicos y hongos. Con el uso de los procedimientos físicos o agentes químicos. Séptico: Presencia de microorganismos patógenos en los tejidos vivos. Antiséptico: Sustancias químicas que previenen el crecimiento o acción de los microorganismos ya sea destruyéndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad. Se refiere a sustancias que se aplican sobre el cuerpo. 2. Mencione 3 métodos de esterilización 

El aparato utilizado se llama autoclave (una olla que regula la presión interna y el tiempo). El calor en forma de vapor a saturación y a presión proporciona temperaturas superiores a las que se obtienen por ebullición.



Pasteurización: Es un proceso que reduce la población microbiana de un líquido. La leche, nata y ciertas bebidas alcohólicas (cerveza y vino), los jugos, se someten a tratamientos de calor controlado que sólo matan a ciertos tipos de microorganismos, pero no a todos.



Incineración: La destrucción de los microorganismos por combustión o cremación. En los laboratorios, las asas de siembra se calientan a la llama

de mecheros Bunsen. La incineración también se utiliza en la eliminación de residuos hospitalarios.

3. Defina que es un medio de enriquecido, selectivo y diferencial 

Medios de enriquecimiento. Favorecen el crecimiento de un determinado grupo de microorganismos, sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del resto.



Medios selectivos. Permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.



Medios diferenciales. Son aquellos en los que se pone de relieve alguna propiedad que un determinado tipo de microorganismos posee.

4. ¿Por qué se utilizan algodón para tapones? Cuando el medio se pone a calentar en la parrilla el agua empieza a ebullir y como consecuencia se empieza producir vapor y con el tapón de algodón evitaremos la perdida de líquido. 5. ¿Qué ventajas presenta el agar? La ventaja del agar es que permanece sólido a 37ºC, la mayoría de las bacterias no la degradan y además es trasparente, lo que facilita el examen de las colonias bacterianas. 6. ¿A quién se debe el empleo del agar en laboratorios? Robert Koch fue el primero que cultivó bacterias en medios sólidos. Primero empleó rebanadas de patata, pero se le contaminaban fácilmente con hongos ambientales. Luego empleó gelatina para solidificar los medios, pero algunos microorganismos son capaces de degradarla, se la comen. Aunque la idea de emplear agar la sugirió Angelina Fanny Eilshemius, la mujer de Walter Hesse, unos de los colaboradores de Koch. 7. ¿Qué alteraciones se presenta en los medios por exceso de esterilización? Dependiendo el medio serán las consecuencias, pero por lo general da como consecuencia la desnaturalización de algunas sustancias del medio y debido a esto la eficacia del medio puede verse afectada.

Bibliografía Solano Goñi C. (2005).Practicas de Microbiología General. Instituto de Agrobiotecnología

y

Recursos

Naturales.

UPNA/CSIC

.Recuperado

de:

http://www.unavarra.es/genmic/microgral/manual%20practicas%20micagral.pdf Alarcón, L. (2016). Manual de prácticas de Microbiología básica y Microbiología de alimentos. Programa de Nutrición.. Google Books. Recuperado el 24 Marzo 2016, de: https://books.google.com.mx/books?id=OykG04ClBUC&pg=PA19&lpg=PA19&dq=preparacion+de+medios+de+cultivo+en+m icrobiologia+discusion+de+resultados&source=bl&ots=j_PxMuHTjr&sig=bQwTY5R Hix3mmN7euB77NU6pC1Q&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwj_v5usmNPLAhUhnIMK HZvnAO4Q6AEIQjAG#v=onepage&q=preparacion%20de%20medios%20de%20c ultivo%20en%20microbiologia%20discusion%20de%20resultados&f=false López Goñi, I. (2016). Bacterias no cultivables: llevamos más de 120 años preparando mal los medios de cultivo. microBIO. Recuperado de http://microbioun.blogspot.mx/2014/12/bacterias-no-cultivables-llevamos-mas.html