Ecoli Transformation

‫ﺗﺮارﯾﺨﺘﯽ ای‪.‬ﮐﻮﻻی ‪ E.coli‬ﺑﻪ روش ﺗﮑﺎﻧﻪ ﮔﺮﻣﺎﯾﯽ‬ ‫‪ -١‬ﺑﺎﮐﺘﺮی) ‪ ١٠٠‬ﻣﯿﮑﺮو ﻟﯿﺘﺮ( را در ﯾﺦ ﺑﮕﺬارﯾﺪ ﺗﺎ از ﺣﺎﻟﺖ اﻧﺠﻤﺎد ﺑﯿﺮون رود‪.‬‬ ‫‪ ۵ -٢‬ﻣﯿﮑﺮو ﻟﯿﺘﺮ ﭘﻼﺳﻤﯿﺪ دارای ژن ﻣﻮرد ﻧﻈﺮ را ﺑﻪ ﺑﺎﮐﺘﺮی درون ﻟﻮﻟﻪ ﻣﯿﮑﺮوﻓﯿﻮژ ) ای‪-‬‬ ‫ﻟﻮﻟﻪ( اﺿﺎﻓﻪ ﮐﻨﯿﺪ‪.‬‬ ‫‪ -٣‬ﺑﻪ ﻣﺪت ‪ ٢٠‬دﻗﯿﻘﻪ در ﯾﺦ ﻧﮕﮫﺪاری ﮐﻨﯿﺪ‪.‬‬ ‫‪ -۴‬در دﻣﺎی ‪ ۴٢‬درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﯿﮕﺮاد ﺑﻪ ﻣﺪت ‪ ٣٠‬ﺛﺎﻧﯿﻪ ﺑﻪ ﺑﺎﮐﺘﺮی ﺗﮑﺎﻧﻪ ﮔﺮﻣﺎﯾﯽ وارد ﮐﻨﯿﺪ‪.‬‬ ‫‪ -۵‬ﺑﺮای دﺳﺖ ﮐﻢ ‪ ۵‬دﻗﯿﻘﻪ ﺑﺎﮐﺘﺮی را در ﯾﺦ ﻧﮕﮫﺪارﯾﺪ‪.‬‬ ‫‪ ١٢۵ -۶‬ﻣﯿﮑﺮوﻟﯿﺘﺮ ﻣﺤﯿﻂ ال‪.‬ﺑﯽ )ﯾﺎ آر‪.‬ﺗﯽ‪.‬ﺳﻮک( ﺑﻪ آن ﺑﯿﺎﻓﺰاﯾﯿﺪ‪.‬‬ ‫‪ -٧‬ﺑﻪ ﻣﺪت ﯾﮏ ﺳﺎﻋﺖ در دﻣﺎی ‪ ٣٧‬درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﯿﮕﺮاد ﺗﮑﺎن ﺑﺪھﯿﺪ‪.‬‬ ‫‪ -٨‬ﺑﺎﮐﺘﺮی را روی ﻣﺤﯿﻂ ﺟﺎﻣﺪ ﻣﻮرد ﻧﻈﺮﺗﺎن در ﻇﺮف ﭘﺘﺮی ﭘﺨﺶ ﮐﻨﯿﺪ و در ﻃﻮل ﺷﺐ‬ ‫در دﻣﺎی ‪ ٣٧‬درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﯿﮕﺮاد ﻧﮕﮫﺪاری ﮐﻨﯿﺪ‪.‬‬ ‫‪ -٩‬ﻓﺮدا ﺻﺒﺢ ﮐﻠﻨﯽ ھﺎی ﺑﺎﮐﺘﺮی را ﺑﺮرﺳﯽ ﮐﻨﯿﺪ‪.‬‬ ‫‪ -١٠‬ﺗﻮﺟﻪ ﮐﻨﯿﺪ ﺑﺎﮐﺘﺮی ھﺎﯾﯽ ﮐﻪ ﭘﺲ از ﻣﺪﺗﯽ ﻃﻮﻻﻧﯽ رﺷﺪ ﻣﯽ ﮐﻨﻨﺪ ﻗﺎﺑﻞ اﻋﺘﻤﺎد‬ ‫ﻧﯿﺴﺘﻨﺪ ﯾﺎ اﮔﺮ دﯾﺮ ﺑﻪ ﺑﺎﮐﺘﺮﯾﮫﺎ ﺳﺮﮐﺸﯽ ﮐﻨﯿﺪ ﮐﻠﻨﯽ ھﺎی ﺑﺎﮐﺘﺮی ھﺎی ﺗﺮارﯾﺨﺖ ﺷﺪه ﭘﯿﺮ‬ ‫ﻣﯽ ﺷﻮﻧﺪ و اﻃﺮاف آﻧﮫﺎ ﮐﻠﻨﯽ ھﺎی ﻣﺎھﻮاره رﺷﺪ ﻣﯽ ﮐﻨﻨﺪ‪.‬‬ ‫ﺑﺎز ﮐﺮدن ﯾﺦ ﺑﺪون آﺳﯿﺐ رﺳﺎﻧﺪن ﺑﻪ ﺟﺎﻧﺪار ﯾﺎ ﺗﻮاﻟﯽ ﻧﻮﮐﻠﺌﻮﺗﯿﺪ ﯾﺨﺰده‪heat shock:‬‬ ‫ﺗﮑﺎﻧﻪ ﮔﺮﻣﺎﯾﯽ ‪heat shock:‬‬ ‫ﻃﻮل ﺷﺐ ‪O/N:‬‬

‫زﯾﺴﺖ ﺷﻨﺎس اﯾﺮاﻧﯽ ‪http://irbiologist.mihanblog.com‬‬