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Histología (anatomía microscópica) • Objetivo: Mediante el uso de técnicas microscópicas, comprender la micro-anatomía de células, tejidos y órganos, y correlacionar la estructura con su función. Técnicas de microscopía óptica más usadas: • Combinación de colorantes basófilos y acidófilos (por ej., Hematoxilina-Eosina, Tricrómico de Mallory) • Histoquímica (Fosfatasa ácida, PAS [ácido periódico-Schiff]) • Inmuno-histoquímica (uso de Ac contra estructuras específicas, conjugados con moléculas fluorescentes [IFD e IFI] o con enzimas) Microscopía electrónica de transmisión (MET) y de barrido (MEB)

Hematoxilina-Eosina: Técnica de coloración •Fijación de la muestra con Formalina (solución acuosa tamponada de formaldehído). Detiene el metabolismo y conserva la estructura del tejido (proteínas pero no lípidos ⇒ mal fijador de membranas). •Lavado y deshidratación (serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta el 100%). Extracción del alcohol con Xileno, luego inclusión de la muestra con parafina fundida (miscible en Xileno). Enfriamiento y endurecimiento de la parafina ⇒ Taco ⇒ cortes de 5-15 µ de espesor con micrótomo que se montan sobre portaobjetos. •Coloración con Hematoxilina: extracción de la parafina con Xileno, rehidratación del corte con soluciones alcohólicas de concentración decreciente, y tinción con solución acuosa de Hematoxilina. •Coloración con Eosina: deshidratación del corte con soluciones alcohólicas de concentración creciente, y tinción con solución alcohólica de Eosina. Lavado con Xileno, agregado de un líquido de montaje no acuoso, y cobertura con un cubre-objetos para lograr un preparado permanente.

Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloración La Eosina es un colorante ácido (predomina densidad de carga negativa), por lo cual se asocia y colorea a estructuras catiónicas del citoplasma y matriz extracelular, tales como: filamentos citoplasmáticos (como los de células musculares); membranas intracelulares; y fibras extracelulares (por sus aminoácidos básicos ionizados). La Hematoxilina se asocia con mordientes para actuar como un colorante básico, por lo cual se asocia y colorea estructuras aniónicas (que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados): •Heterocromatina y nucléolos •RNA ribosomal •Matriz extracelular (por los sulfato de los GAG)

Ácido periódico-Schiff (PAS): Fundamento El ácido periódico rompe la unión entre carbonos con hidroxilos adyacentes, y forma grupos aldehído. El reactivo de Schiff reacciona con los aldehídos para dar un color rojo púrpura intenso. La reacción de PAS tiñe carbohidratos, y se usa para detectar: •Gránulos de glucógeno •Moco en diversas células •Membrana basal de los epitelios •Fibras reticulares del tejido conjuntivo