Immunologie B 320
Cellules T et immunité cellulaire Récepteur T (structure, diversité, répertoire) Antigènes de différenciation (CD4, CD8) Activation Cellules T auxiliaires et immunorégulation Lymphokines (interférons,TNF, IL1, IL2, IL4) et cytotoxicité Concept de déficit de l’immunité cellulaire PR Jean-François MOREAU, DR Julie DECHANET-MERVILLE, DR Jean-Luc TAUPIN CNRS-UMR, 5540, groupe cytokines et transplantation, université Bordeaux 2, 33076 Bordeaux Cedex.
Points Forts à comprendre • L’immunité cellulaire désigne la réponse immunitaire transférable par les seules cellules de l’immunité et dans notre cas par les seuls lymphocytes T. • Elle n’est que la traduction des diverses fonctions des lymphocytes T, ce qui inclut par une action indirecte sur les lymphocytes B le développement de l’immunité humorale désignant la part de la réponse immunitaire due aux immunoglobulines.
Cellules T et immunité cellulaire Le lymphocyte T reconnaît à la fois le peptide antigénique et la molécule HLA (pour human leucocyte antigen) dans laquelle le peptide est enchâssé. Cette reconnaissance est rendue possible par la présence à sa surface d’une molécule particulière appelée TCR (pour T cell receptor) ou récepteur à l’antigène. Le TCR est une molécule variable à l’intérieur d’un même individu, mais tous les TCR d’un même lymphocyte sont identiques. La spécificité du système immunitaire repose entièrement sur la spécificité moléculaire du TCR vis-à-vis du complexe HLA + peptide présent à la surface de la cellule présentatrice de l’antigène (APC). Ainsi, à la variabilité des antigènes parmi lesquels nous évoluons correspond une variabilité du TCR. Cette molécule n’est présente qu’à la surface du lymphocyte T, à l’exclusion de toute autre cellule de l’organisme. Cette entité membranaire
est en fait complexe et composée de plusieurs chaînes protéiques transmembranaires dont les chaînes du CD3. Les molécules du complexe TCR/CD3 à la surface du lymphocyte T sont les éléments clés de la reconnaissance spécifique de l’antigène, de l’activation et des fonctions lymphocytaires. Cependant, à côté de ce complexe, il existe d’autres molécules jouant un rôle dans la réponse fonctionnelle succédant à la reconnaissance antigénique, ce sont les molécules accessoires. La découverte progressive de ces différentes molécules présentes à la surface du lymphocyte T s’est faite grâce aux anticorps monoclonaux. Par leur propriété anticorps, ces outils servent à identifier les molécules à la surface des cellules, mais aussi peuvent servir de sondes pour l’étude du rôle de ces molécules. Initialement, les molécules de surface étaient appelées par le nom de l’anticorps la reconnaissant. Cependant, plusieurs laboratoires pouvaient parler de la même molécule, mais avoir isolé des anticorps différents et leur avoir donné des noms différents. Cela rendait les échanges difficiles. En 1980, une conférence internationale a homogénéisé la nomenclature en créant les CD, en français classe de différenciation ou, en anglais, les clusters of differentiation. Ils portent un numéro chronologique correspondant grossièrement à l’ordre de leur découverte. Un même numéro regroupe tous les anticorps reconnaissant une même structure moléculaire, quand bien même l’épitope reconnu est différent. Par extension, le nom de la molécule est le numéro de la classe de différenciation, précédé du sigle CD. C’est ainsi que l’on compte maintenant à peu près 200 classes de différenciation, débordant d’ailleurs le champ de l’immunologie. Les anciennes terminologies doivent être abandonnées, mais l’on retrouve encore parfois T3, T4 ou T8 pour CD3, CD4 ou CD8.
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Récepteur T Structure du récepteur T à l’antigène (TCR) Tout a commencé par la production au début des années 1980 d’anticorps capables de reconnaître des molécules présentes à la surface de certains lymphocytes T et qui pouvaient répondre à la définition de molécules spécifiques d’un clone cellulaire. Ces anticorps dénommés clonotypiques reconnaissaient une molécule hétérodimérique glycosylée dénommée alors chaînes α et β. Après digestion protéique et analyse des fragments obtenus, les molécules isolées de clones lymphocytaires T ayant des spécificités différentes se montrèrent particulièrement polymorphes, suggérant une nature proche de celles des immunoglobulines. Puis des approches de biologie moléculaire isolèrent les gènes codant ces polypeptides démontrant leur nature hétérogène. On connaît maintenant 4 chaînes qui s’associent 2 à 2. Sur la majorité des lymphocytes T (95 %) il s’agit de l’hétérodimère α/β, et sur moins de 5 % d’entre eux de l’hétérodimère γ/δ. La preuve définitive qu’il s’agit bien là de la structure moléculaire dictant la spécificité immunologique des lymphocytes T est apportée par les expériences de transfection d’acide désoxyribonucléique (ADN) codant ces protéines qui confèrent à la cellule transfectée la spécificité antigénique. Toutes les chaînes du TCR ont une structure primaire similaire avec un segment V, éventuellement un segment D dans le cas des chaînes β et δ seulement, un segment J et un segment constant C, ce qui les rend très similaires aux immunoglobulines dans leur architecture. Le poids moléculaire est d’environ 40 000 pour chaque chaîne. Au niveau protéique, la région constante pour les chaînes α est unique et il en existe aussi une unique mais différente pour les chaînes β. Elle comporte une région charnière avec une cystéine permettant un pont disulfure entre les 2 chaînes. Puis vient ensuite une région transmembranaire hydrophobe contenant des acides aminés chargés positivement permettant une interaction électrostatique avec les portions intramembranaires des molécules composant le CD3 qui sont chargées négativement (voir : Pour approfondir). Le segment intracytoplasmique est très court et ne permet pas en lui-même la transduction du signal. Dans la structure repliée telle qu’elle se présente dans l’espace, 4 régions en boucle sont importantes à considérer et se retrouvent voisines les unes des autres spatialement. Trois représentent les CDR (1, 2 et 3) ou complementary determining regions. Ce sont ces 6 boucles, 3 pour la chaîne α et 3 pour la chaîne β qui entrent en contact avec le peptide antigénique et les berges du sillon de la molécule du complexe majeur d’histocompatibilité (CMH). La 4e boucle située à l’extérieur des 3 autres représente la zone d’interaction avec les superantigènes. La portion variable de l’hétérodimère se comporte donc dans l’espace en gros comme un fragment F(ab) d’immunoglobuline. 2184
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Diversité du TCR et répertoire Pour simplifier le problème nous laisserons de côté les gènes codant les chaînes du TCR γ/δ qui sont organisés de façon similaire à ceux codant les chaînes α/β. Les gènes codant pour les chaînes α et β du TCR sont organisés comme ceux codant les immunoglobulines. Si l’on définit le lymphocyte T comme la cellule capable de reconnaître le peptide antigénique, il exprime donc, par définition, un TCR/CD3 fonctionnel en surface. Or ce TCR, par essence, est variable puisque telle la clé dans la serrure, un TCR doit être spécifique d’un antigène particulier. Il existe donc des caractéristiques uniques des gènes codant ces molécules afin de créer cette diversité moléculaire au niveau du génome des chordés. En effet, c’est le génome cellulaire lui-même qui est altéré dans le sens de la diversité, faisant presque de chaque lymphocyte T un lymphocyte T unique au niveau de son TCR (tous les TCR d’une même cellule étant parfaitement identiques). Comme les capacités du système sont très importantes pour générer cette diversité, il en résulte que statistiquement presque tous les lymphocytes expriment en surface des TCR différents.
1. Diversité combinatoire À quelques différences près l’organisation des gènes codant les chaînes α et β du TCR est similaire et composite. Elle suit en cela l’organisation en domaines que nous avons déjà décrite au niveau de la protéine. Ainsi chaque domaine est codé par un gène propre qui chacun, mis les uns à côté des autres lors d’un processus génétique appelé réarrangement, va donner le gène définitif codant une des chaînes du TCR. L’ensemble des gènes V, J et C codant pour la chaîne α sont sur le chromosome 14, alors que ceux codant pour les segments V, D, J, et C de la chaîne β sont sur le chromosome 7. Le gène codant la région constante est soit unique (chaînes α) soit double (chaînes β) et il code la portion constante extracytoplasmique de la molécule, une région charnière présentant le pont disulfure permettant l’hétérodimérisation des 2 chaînes, la région intramembranaire, et la région intracytoplasmique. Il existe aussi des gènes J au nombre d’une cinquantaine de gènes différents codant la région J α et une douzaine pour la région J β. Ils sont en général situés en amont des gènes C. Puis il existe des gènes D. Ils codent pour quelques acides aminés entre le domaine V et le domaine J. Il en existe 2 et seulement pour la chaîne β. Cependant ils peuvent être répétés et mis à l’envers lors du processus de réarrangement, ce qui augmente considérablement la possibilité de diversification de la protéine β finale. Les gènes V sont en général situés en amont des gènes J ou D quand ils existent, et sont au nombre d’une cinquantaine pour le locus β et pour le locus α. Un point important à considérer est le fait que le locus δ est entièrement compris entre les gènes J et les gènes V codant la chaîne α, ce qui fait que, comme nous allons le voir, lorsque le locus α se réarrange, il y a obligatoirement excision et perte définitive du locus δ, ce qui
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fait que les lymphocytes T ayant réarrangé les gènes α, ne peuvent exprimer l’hétérodimère γ/δ. Les mécanismes de réarrangement du TCR sont identiques à ceux qui se produisent dans le lymphocyte B pour la production des immunoglobulines. Ils sont sous le contrôle de l’accessibilité des régions à réarranger (acétylation et désacétylation des histones des nucléosomes) et sous le contrôle transcriptionnel et la production des enzymes de recombinaison (recombinases RAG-1 et 2) permettant le réarrangement ordonné. La génération des lymphocytes T est particulièrement complexe et ne sera pas abordée ici. Elle a lieu uniquement dans l’environnement thymique T. Nous prendrons pour exemple le réarrangement du locus β. Un élément Vβ et un Jβ vont être choisis au hasard et mis l’un à côté de l’autre grâce à des séquences nucléotidiques cibles et aux recombinases RAG-1 et 2 qui reconnaissent ces sites spécifiques sur l’ADN. La séquence d’ADN comprise entre ces 2 sites maintenant à proximité forme une boucle qui est alors excisée. Ce qui donne d’une part un morceau d’ADN circulaire qui est ensuite perdu, et le reste du génome avec les 2 gènes Vβ et Jβ l’un à côté de l’autre. Puis un gène C va être rattaché au tout, pour donner un gène fonctionnel β. Tout l’ADN qui existe entre les gènes qui sont choisis est définitivement perdu. Cependant le lymphocyte peut réarranger plusieurs fois, tant qu’il y a des gènes V disponibles en amont et des gènes J disponibles en aval. En fait, jusqu’à obtenir une protéine fonctionnelle, sans quoi, faute de recevoir des signaux de la part de ce récepteur, il meurt dans le thymus. La présence d’un TCR fonctionnel à la membrane du lymphocyte commande donc la génération de ces cellules. Un réarrangement fonctionnel d’un chromosome entraîne l’inactivation du réarrangement de l’autre, sauf pour le locus α. C’est l’exclusion allélique qui existe aussi avec la recombinaison des gènes des immunoglobulines et qui permet qu’une cellule n’exprime qu’une chaîne β, mais éventuellement 2 chaînes α, ce qui fait 2 TCR au plus à la surface, avec 2 possibilités de reconnaissance différente potentielle. La loterie combinatoire qui consiste à « choisir » parmi un très grand nombre de possibilités les différents segments requis pour aboutir au gène fonctionnel constitue la variabilité combinatoire.
2. Diversité jonctionnelle Comme nous l’avons mentionné au chapitre structure, les boucle protéiques CDR1, 2 et 3 sont importantes car ce sont elles qui contactent soit les bords du sillon pour les CDR1 et 2, soit le peptide antigénique pour le CDR3. Si dans l’espace ces 3 boucles sont les unes à côté des autres, au niveau du gène et donc de la structure primaire de la protéine, il en va différemment. Ainsi, c’est le segment J et éventuellement D qui codent le CDR3, alors que les CDR1 et 2 sont codés sur la portion V. Or au moment de la mise côte à côte des segments Jα et Vα ou Dβ-Jβ et Vβ et de leur « soudure », il existe des mécanismes enzymatiques qui vont exciser
au hasard un certain nombre de nucléotides de chaque extrémité en présence (V et J), puis en rajouter de nouveaux dans des proportions différentes. Ce qui fait que la jonction entre les segments V et J est particulièrement diverse et due au seul hasard. C’est la diversité jonctionnelle. L’ensemble des lymphocytes T d’un individu peut ainsi être considéré comme une collection de lymphocytes presque tous différents au niveau du TCR, et ayant chacun une capacité unique à reconnaître un antigène donné, ce qui constitue le « répertoire » d’un individu. Il faut bien réaliser que c’est le génome même de la cellule qu’il s’agit de modifier de façon aléatoire mais définitive (ce qui est unique parmi les cellules somatiques), la régulation de ces mécanismes étant heureusement puissante mais très complexe. Cela n’empêche pas que des « ratées » se produisent amenant des translocations anormales et variées à l’origine de tumeurs du système immunitaire. De la même façon, lorsqu’il existe des altérations intrinsèques de ces mécanismes comme dans certaines maladies congénitales, il y a un retentissement important de type déficits sur le système immunitaire avec des retombées carcinologiques.
Antigène de différenciation CD4 et CD8 Ce sont des glycoprotéines exprimées en général de façon mutuellement exclusives sur 2 sous-populations de lymphocytes T matures fonctionnellement différentes. Ces molécules facilitent l’interaction du lymphocyte T avec la cellule présentative de l’antigène ou dans le cas de lymphocytes T cytotoxiques avec la cible lors d’un contact secondaire. En se liant aux ligands invariables que représentent les domaines invariants des molécules du complexe majeur d’histocompatibilité sur les cellules présentatives de l’antigène, elles augmentent l’avidité du lymphocyte T vis-à-vis des cellules présentatives de l’antigène en complémentant l’affinité du TCR pour le CMH + peptide. CD4 et CD8 sont des molécules différentes, mais qui ont des fonctions similaires. Le rapport entre les cellules CD4+/CD8+ est de 2 chez un individu normal, mais les variations peuvent être assez larges.
CD4 C’est une glycoprotéine transmembranaire, monomérique, exprimée par les lymphocytes T périphériques et les thymocytes. Chez l’homme, elle est faiblement exprimée sur d’autres cellules de l’organisme dont les monocytes/macrophages et les cellules dendritiques. Elle est composée de 4 domaines de type immunoglobuline pour la partie extracellulaire, une portion transmembranaire, et une queue intracytoplasmique. Cette protéine est codée sur le chromosome 12. Cette molécule reconnaît et se lie par ses 2 domaines distaux avec la portion invariante proche de la membrane
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des molécules du CMH de classe II, et spécifiquement avec le domaine β 2 de la chaîne β. Elle stabilise ainsi l’interaction cellulaire entre lymphocyte T et cellules présentatrices de l’antigène lors de l’activation. Cette interaction qui est indépendante du peptide est donc particulièrement importante lorsque l’affinité du TCR pour le complexe MHC de classe II + peptide est naturellement faible. Dans ces cas, si l’on rajoute aux cellules un anti-CD4, on abroge l’activation du lymphocyte T car l’interaction CD4/CMH est annulée faute d’atteindre le seuil d’affinité nécessaire. L’activation du lymphocyte T repose sur l’activation de kinases intracytoplasmiques en cascade, ce qui aboutit à l’activation de facteurs de transcription régulant l’expression de certains gènes ou à la régulation du cycle cellulaire permettant ainsi à la cellule, par exemple, soit de sécréter des médiateurs, soit d’exprimer de nouvelles molécules à sa surface ou bien encore de se multiplier pour réaliser l’amplification clonale nécessaire à la réaction immunitaire. Le CD4 est associé par son segment intracytoplasmique à l’une de ces kinases qui, lorsqu’elles sont activées, permettent l’activation cellulaire (p56lck). Lors du rapprochement entre le lymphocyte T et la cellule présentatrice de l’antigène, le complexe TCR/CD3 se retrouve géographiquement associé au CD4 ou au CD8 sur la surface cellulaire, si bien que sous la membrane les kinases sont, elles aussi, regroupées dans un même lieu et peuvent donc interagir pour initier les premières phases de l’activation cellulaire. Enfin le CD4 est la molécule sur laquelle se fixe la gp120 du virus de l’immunodéficience humaine, permettant ainsi la pénétration de la capside virale à l’intérieur des cellules CD4+ après fusion de l’enveloppe et de la membrane de la cellule cible.
CD8 Il s’agit toujours d’un dimère, mais qui peut être variable dans sa composition car il existe 2 chaînes protéiques distinctes, α et β. Sur les lymphocytes T périphériques portant un TCR de type α/β, c’est l’hétérodimère CD8 α/β qui est présent. Les 2 chaînes sont liées par un pont disulfure. Par contre sur les lymphocytes T portant un TCR γ/δ, c’est un homodimère CD8 α/α qui est retrouvé. C’est aussi le cas pour les thymocytes et les cellules natural killer CD8+. La chaîne β n’est jamais exprimée seule. Lors d’un phénotypage des lymphocytes T, on emploie généralement un anticorps reconnaissant exclusivement la chaîne α. En pratique donc, la notion de CD8 équivaut à la chaîne α. À l’exception du virus de l’immunodéficience humaine (VIH), ce sont exactement les mêmes fonctions que pour le CD4, sauf que dans ce cas, la chaîne CD8 α se lie à la portion invariante de la chaîne lourde des MHC de classe I, c’est-à-dire au domaine α 3 proximal à la membrane. Il est bien clair que, comme dans le cas du CD4, le complexe TCR + CD3 et le CD8 se lient au même complexe MHC + peptide. En ce qui concerne l’activation cellulaire, l’hétérodimère CD8 est plus efficace que l’homodimère. 2186
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Molécules de costimulation ou coactivation Ce sont des molécules fondamentales pour une pleine et complète activation du lymphocyte T par le TCR, et donc l’antigène. Elles vont : abaisser le seuil de stimulation de la cellule par le peptide antigénique, permettre la prolifération clonale, inhiber des phénomènes de régulation négative, permettre la différenciation du lymphocyte T. Leur présence et leurs fonctions permettent d’expliquer la tolérance périphérique. En effet, si pour une quelconque raison, suite à une mise en jeu du TCR, les signaux de costimulation ne l’accompagnent pas, le lymphocyte T, au lieu de s’activer, est paralysé, il devient inactif. On parle alors d’anergie. Le lymphocyte T se doit donc d’interagir avec les « bonnes cellules » présentatrices de l’antigène, c’est-à-dire les cellules exprimant les ligands des récepteurs des signaux de costimulation présents sur sa membrane, pour l’initiation d’une réponse immunitaire active. En pratique, ce sont les cellules dendritiques et leurs dérivés, les monocytes/macrophages et leurs dérivés, les lymphocytes B, qui vont remplir ce rôle. Le nombre de ces molécules coactivatrices est grand, mais quelques-unes sont essentielles à connaître (voir : Pour approfondir 2).
Activation L’affinité avec laquelle le TCR α/β peut reconnaître un peptide antigénique lié à un MHC est faible, de l’ordre de 100 à 1 000 fois plus faible que celle d’un anticorps pour un antigène. D’autre part le CMH + peptide ne se comporte pas comme un aimant vis-à-vis du TCR. Mais cette interaction est la dernière phase moléculaire d’un enchaînement d’étapes complexes comprenant le rapprochement du lymphocyte T de la cellule présentatrice de l’antigène via les molécules d’adhésion, la création d’une interface membranaire entre les 2 cellules impliquant une réorganisation moléculaire importante des 2 membranes en contact aboutissant à ce que l’on appelle maintenant la « synapse immunologique » par analogie au système nerveux. Au cours de ces processus, les TCR d’une cellule vont migrer et se concentrer au site de contact entre les 2 cellules, permettant ainsi, en dépit de l’affinité intrinsèque faible et grâce à la loi d’action de masse, une interaction possible avec les CMH + peptides qui en font de même sur la cellule présentatrice de l’antigène. Cette interaction est labile avec des caractéristiques d’association et de dissociation variables d’un TCR à l’autre aboutissant, tant que la synapse existe, à une sorte de palpation du sillon du CMH et du peptide antigénique par les 2 CDR 1, les 2 CDR2, et les 2 CDR3 du TCR. Ce sont les caractéristiques subtiles de cette interaction qui permettent l’initiation de la cascade d’événements biochimiques à l’origine de l’activation cellulaire. Les caractéristiques d’interaction ne sont pas que le résultat du TCR interagissant avec le CMH + peptide. D’autres molécules participent à cette synapse dont le CD4 ou le CD8 comme
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nous allons le voir et ainsi se crée un système amplificateur des faibles différences d’affinité intrinsèques du TCR vis-à-vis du CMH + peptide. La subtilité de cette interaction explique aussi les multiples possibilités qui existent pour sa modulation, que ce soit avec des peptides antagonistes ou en empêchant la constitution de la synapse en agissant sur les molécules d’adhésion. Certaines molécules, appelées super antigènes, généralement des protéines bactériennes ou virales (toxines de streptocoques ou staphylocoques) ont la propriété de reconnaître à la fois un segment Vβ particulier (indépendamment du CDR1, 2 ou 3) et des molécules HLA de classe II réalisant ainsi un pont antigène-indépendant entre les lymphocytes T présentant ce Vβ particulier et les cellules présentatrices de l’antigène. Il en résulte qu’un nombre important de lymphocytes T (tous ceux utilisant le même segment V) vont être activés de façon simultanée pour aboutir entre autres à la libération massive de cytokines à l’origine de l’état de choc observé chez le patient. L’activation est le corollaire du contact antigénique, mais in vitro le peptide antigénique et la molécule CMH le portant ne sont pas toujours disponibles. Même si cela était, cela ne concernerait qu’un nombre infime de lymphocytes T pris dans le sang périphérique, ce qui rend de toute façon l’étude impossible. C’est pourquoi, les modèles d’activation in vitro reposent sur l’activation massive des lymphocytes T, indépendamment de l’antigène. Ils doivent donc concerner au minimum le TCR ou le CD3. Les lectines sont une classe de protéines qui ont la propriété de reconnaître relativement spécifiquement des sucres et de les lier. Comme la majorité des protéines membranaires sont glycosylées, elles vont pouvoir être reconnues par ces lectines. C’est le cas de la phytohémaglutinine ou PHA extraite d’un haricot, Phaseolus vulgaris. C’est la lectine la plus employée pour étudier l’activation des lymphocytes T humains. Elle peut se fixer sur le TCR, les protéines du CD3, et d’autres molécules. Comme la PHA est tétravalente, elle va pouvoir ponter les molécules reconnues à la surface du lymphocyte, ainsi activer les lymphocytes T indépendamment de l’antigène et donc remplacer la cellule présentatrice de l’antigène. Il existe toute une liste de lectines d’origine végétale capables d’activer les lymphocytes par ce mécanisme. Les anticorps monoclonaux, spécifiques soit du TCR ou des chaînes du CD3, peuvent aussi activer les lymphocytes T indépendamment de l’antigène. Par contre, comme il s’agit le plus souvent d’IgG, ils ne seront que divalents, ce qui limite leur pouvoir de mobilisation d’un grand nombre de molécules membranaires et ainsi leur effet activateur. C’est pourquoi ils sont peu efficaces en solution mais beaucoup plus lorsqu’ils sont fixés soit sur une cellule, soit sur une phase solide comme des billes de polystyrène par exemple. L’activation du lymphocyte T s’accompagne de modifications biochimiques du contenu cellulaire, dont l’apparition de produits de clivage des phospholipides mem-
branaires ou de flux calciques intracellulaires ou de l’extérieur vers l’intérieur du cytoplasme à travers des canaux calciques membranaires. Des composés chimiques sont capables de mimer ces effets et aboutissent aussi à l’activation cellulaire en court-circuitant la phase de reconnaissance antigénique. Ces composés ont été et restent très utiles pour disséquer les événements biochimiques à l’origine de l’activation. Ce sont, par exemple, les ionophores calciques qui provoquent une augmentation de la concentration intracellulaire de calcium (voir : Pour approfondir 3, 4).
Différenciation lymphocytaire T Jusqu’à présent nous avons considéré l’activation de lymphocytes T matures, mais la naissance de cette cellule passe aussi par de nombreuses étapes où les phénomènes d’activation cellulaire ou bien leur absence sont déterminants. Les cellules précurseurs du lymphocyte T sont encore mystérieuses, mais on sait qu’elles prennent naissance comme les autres cellules lymphoïdes dans le foie fœtal puis la moelle osseuse. Ces cellules n’expriment pas de TCR et les gènes les codant sont dans un état vierge comme on peut le constater dans n’importe quelle autre cellule de l’organisme. On appelle cet état l’état germinal. Elles sont donc au sens immunologique non fonctionnelles. Produites dans la moelle osseuse, elles vont migrer dans le thymus soit pour la première fois au cours de la vie fœtale, soit ensuite lors de l’enfance puis de la vie adulte. L’activité thymique diminue progressivement au cours de la vie sans jamais vraiment s’éteindre. Sous l’influence de cytokines produites dans l’environnement thymique comme l’interleukine 7 (IL7), ces cellules, dont les gènes codant le TCR sont à l’état germinal, vont proliférer. À ce stade, elles ne sont pas encore commises dans le lignage T, et peuvent engendrer des cellules NK, des lymphocytes B ou des lymphocytes T. Puis dans une étape ultérieure, les réarrangements des gènes codant les chaînes β, γ, et δ du TCR commencent à être détectés. De même détecte-t-on la présence de certaines sous-unités du CD3. C’est le point de non-retour pour la différenciation lymphocytaire T et l’arrêt de leur prolifération. Certaines de ces cellules vont pouvoir réarranger correctement leurs locus γ et δ pour produire un TCR γ/δ fonctionnel, tandis que d’autres ne vont réarranger correctement qu’un gène β et donc exprimer à leur membrane la chaîne β du TCR qui, associée avec une chaîne non variable de type α appelée pré-TCR α ou pTα ainsi qu’à certaines sousunités du CD3, va constituer un pré-TCR αβ. La majorité des cellules ne vont pas pouvoir réarranger correctement leurs gènes codant le TCR et vont mourir au cours de ce processus. Pour les survivantes γ/δ leur maturation est terminée. Pour les survivantes présentant un pré-TCR de type α/β, les réarrangements sur le locus β sont terminés et tandis qu’elles se mettent à exprimer le CD4 et le CD8 (doubles positives), le locus α commence ses réar-
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rangements. Cela s’accompagne à nouveau d’une prolifération. Puis ces thymocytes du stade doubles positifs vont successivement : réarranger leur locus α jusqu’à la mort ou exprimer un dimère α/β fonctionnel, puis subir la sélection positive consistant à ne sélectionner que les cellules ayant une certaine affinité pour le CMH, puis choisir leur destin en devenant soit CD4 soit CD8, pour enfin subir la sélection négative qui ne garde que les cellules portant un TCR incapable de s’activer au contact d’un CMH autologue, avant de sortir du thymus par les vaisseaux sanguins qui irriguent la jonction cortico-médullaire. La stringence importante de ce processus complexe fait que plus de 95 % des cellules du départ sont détruites avant d’être libérées dans la circulation. C’est un processus long de l’ordre d’un mois, incomplètement connu et géographiquement organisé. Les thymocytes doubles positifs sont localisés dans le cortex thymique en étroit contact avec les cellules épithéliales thymiques. La médullaire thymique ne contient que des cellules CD4 ou CD8. On voit ainsi que : – les mécanismes du réarrangement qui génèrent les TCR dans le thymus ne sont le fait que du hasard et sont identiques chez tout un chacun quel que soit son CMH ; – mais ce répertoire est ensuite affiné en fonction de 2 critères fondamentaux, qui sont : la nécessité absolue pour le TCR de reconnaître à la fois le peptide antigénique et les berges du sillon de la molécule de CMH qui le porte, c’est le but de la sélection positive, la nécessité absolue d’éliminer les TCR très autoréactifs pouvant causer la destruction de l’hôte qui le porte, c’est le but de la sélection négative. Il faut alors noter que c’est le CMH propre à chaque individu qui modèle le répertoire primitif, ce répertoire est en cela propre à chaque individu comme le sont ses haplotypes CMH. C’est le répertoire passé au crible de ces filtres qui va rester et constituer le système immunitaire de l’individu. Après activation, les lymphocytes T vont subir des processus divers de différenciation consistant en la transcription de certains gènes pour aboutir à exercer leurs fonctions cellulaires qui peuvent se subdiviser schématiquement en 2 grandes catégories recoupant exactement les anciennes dénominations de la réponse immunitaire à médiation cellulaire que sont l’hypersensibilité retardée et la réponse cytolytique.
Lymphocytes T auxiliaires Ils concernent principalement les lymphocytes T portant le marqueur CD4 et sont responsables de l’hypersensibilité retardée. Ces lymphocytes auxiliaires (helper) exercent leurs fonctions régulatrices de la réponse immunitaire cellulaire et humorale par le biais de molécules de surface comme le CD40-ligand ou le Fas-ligand mais aussi et surtout par des médiateurs solubles de nature glycoprotéiques appelés cytokines. Les cytokines ne sont pas 2188
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produites que par les seuls lymphocytes T, et représentent un système général de régulation des différentes cellules constitutives d’un groupe cellulaire ou de plusieurs groupes cellulaires entre eux, comme le font les hormones dans le système endocrinien. Le nombre des cytokines connues est de plusieurs centaines à l’heure actuelle et ne cesse de grandir. Ces modulateurs représentent des cibles thérapeutiques de choix en santé humaine, et les équivalents recombinants de certaines (interféron par exemple) sont déjà utilisés en thérapeutique. En ce qui concerne le lymphocyte T, il a été montré, d’abord chez la souris, que cette production de cytokines pouvait être un système d’identification phénotypique. Ainsi, il a été identifié au moins 2 classes de lymphocytes T sur leurs capacités à produire certaines cytokines et pas d’autres et ainsi influencer de façon différentielle la réponse immune. C’est la dichotomie T helper 1 (Th1)/T helper 2 (Th2). C’est l’équilibre entre ces 2 pôles de la réaction immunitaire qui va finalement faire basculer la réponse du côté cellulaire ou plutôt humoral (tableau).
TABLEAU Équilibre Th1/Th2 Cytokines
Lymphocytes CD4+ Th1
Lymphocytes CD4+ Th2
Interleukine 2 (IL2)
++
0
Interféron γ (IFNγ)
++
0
0
++
Interleukine 4 (IL4)
Interleukine 2 (IL2) C’est une glycoprotéine de 20 000 de poids moléculaire environ qui est produite par les lymphocytes T activés seulement. C’est le facteur de prolifération de ces mêmes lymphocytes T activés (para- et autocrinie). C’est un facteur à action locale, il n’est pas présent dans la circulation ou de toute façon sa demi-vie est très brève (lorsqu’on l’injecte à des fins thérapeutiques par exemple). L’activation lymphocytaire T induit aussi l’expression du récepteur de haute affinité pour cette molécule, ce qui permet après fixation de l’IL2 sur celui-ci la prolifération et donc l’amplification des clones réactifs sans laquelle il n’y a pas de réponse possible. Or, l’expression de ce récepteur est transitoire à la surface du lymphocyte permettant une régulation fine de l’amplification clonale. L’IL2 apparaît donc comme un
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important paramètre de la réponse T dépendante. Ce système IL2-IL2 récepteur permet une modulation thérapeutique de la réponse immune, soit en plus dans le cas des tumeurs (lymphokine activated killers ou tumor infiltrating lymphocytes), soit en moins dans le cas des greffes d’organes allogéniques (anticorps anti-récepteur IL2 pour contrôler la réponse immune et donc prévenir les rejets). Le récepteur est un complexe multimoléculaire. L’élément le plus inductible par l’antigène est la chaîne α ou p55 (55 000 de PM) encore appelé CD25. Ce CD25 est quasi absent des cellules au repos et isolé ne présente qu’une faible affinité pour l’IL2, en revanche une fois la cellule activée par l’antigène son expression est considérablement augmentée. Une seconde molécule, la chaîne β ou p75 est, elle, exprimée en quantité plus importante que le CD25 par les lymphocytes T au repos et son expression est augmentée après activation. Isolée, elle présente une affinité moyenne pour l’IL2. Un 3e composant, appelé chaîne γ est incapable de lier seul l’IL2 et n’a donc aucune affinité intrinsèque pour ce ligand. Comme la chaîne β, son expression membranaire est légèrement augmentée après activation. Il participe à la structure du récepteur en complémentant les 2 autres pour donner un récepteur de très haute affinité capable de transduire un signal à l’intérieur de la cellule. Il rend les cellules sensibles à de très faibles quantités d’IL2. La présence de ce récepteur de haute affinité à la surface du lymphocyte T activé est donc régulée par l’intense surexpression temporaire de la chaîne α. L’induction de la chaîne α se fait en quelques heures, mais diminue déjà 48 h après la stimulation. Ce système permet l’amplification rapide des cellules T spécifiques de l’antigène et le retour au repos de ces mêmes cellules après disparition de l’antigène puisque l’induction de la chaîne α est consécutive à la liaison du ligand antigénique. Certains déficits immunitaires combinés sévères affectant les lymphocytes T et B et liés au chromosome X, sont dus à l’absence totale ou fonctionnelle de la chaîne γ du récepteur à l’IL2 qui est commune à d’autres récepteurs pour d’autres cytokines (IL4, IL13, IL7 et IL9) et dont le gène se trouve sur le chromosome X.
Interféron γ (IFN γ) Il existe 2 types d’interférons sur la base de leurs effets biologiques. Le 1er type comporte 2 groupes différents : l’un, α, comprend une vingtaine de gènes différents, l’autre, β, n’est codé que par un gène. L’IFN α et l’IFN β ont des effets biologiques similaires, ce qui s’explique par le fait qu’ils interagissent avec le même récepteur à la surface des cellules. Ils sont produits par n’importe quelle cellule de l’organisme et l’inducteur le plus puissant en est l’infection virale d’une cellule. Cette propriété les fait utiliser en thérapeutique anti-infectieuse. Le second type est représenté par l’IFN γ, qui nous retiendra ici. Comme l’IL2, c’est un produit des cellules T CD4+ activées, mais aussi des CD8+ et des cellules non-T natural killer. Comme son nom l’indique, il a des actions similaires à celles des IFNα et β, comme le pouvoir anti-
viral et antiprolifératif, mais il possède un récepteur totalement différent des autres IFN et des actions spécifiques d’immunorégulation. Ainsi, c’est un activateur puissant des monocytes/macrophages leur permettant par exemple de détruire les bactéries endocytées. Il augmente l’expression des HLA de classe I et de classe II, augmentant ainsi les capacités de présentation antigénique au lymphocyte T et donc l’efficacité de la réaction immune. Il permet la différenciation des lymphocytes cytolytiques. Enfin, il permet la commutation isotypique vers certaines sous-classes d’IgG. Il inhibe la production d’IL4, et la différenciation des lymphocytes T en Th2, influençant ainsi le cours de la réponse immune vers une réponse de type cellulaire. La résultante de ces actions est une promotion de la réponse cellulaire et inflammatoire ainsi qu’une suppression des réactions allergiques (switch des Ig vers les IgG plutôt que vers les IgE).
Interleukine 4 (IL4) C’est la cytokine de régulation des réactions allergiques. Elle est nécessaire à la production des IgE et permet le switch des chaînes lourdes d’Ig vers cet isotype. Un déséquilibre de production en faveur de cette cytokine, au cours d’une réponse immune, serait responsable du développement des allergies. Elle inhibe l’activation des macrophages en interférant avec l’IL1 qui est une cytokine sécrétée par les cellules de l’immunité naturelle qui, elle, est activatrice de l’inflammation. C’est donc une cytokine anti-inflammatoire. C’est un facteur de croissance pour les mastocytes. Elle est nécessaire à la réponse antiparasitaire. Elle agit positivement sur le développement des cellules Th2 et bloque l’éclosion d’une réponse de type TH1.
TNF α ou facteur de nécrose tumorale (tumor necrosis factor) Il est produit par les cellules de l’immunité naturelle comme les macrophages mais aussi par le lymphocyte T après activation. C’est le principal médiateur de la réponse de l’hôte aux bactéries gram-négatives. Les lipopolysaccharides (LPS) présents à la surface de la paroi des bactéries gram-négatives stimulent les fonctions des phagocytes mononucléés, et il est reconnu que la sécrétion de TNF est l’un des principaux médiateurs de cet effet. La source majeure de TNF sera donc les phagocytes mononucléés activées. C’est un lien important entre les réponses immunitaires spécifiques et les réactions inflammatoires. Il présente des actions antitumorale, antivirale et antiparasitaire. Il agit par l’intermédiaire d’un récepteur dont les effets sur la cellule sont aussi l’induction de l’apoptose. Le résultat de son action est un effet pro-inflammatoire important dont les effets délétères in vivo peuvent être combattus soit par les corticoïdes, soit par des moyens spécifiques comme le récepteur soluble recombinant qui, en captant le TNF soluble, empêche sa liaison avec les récepteurs membranaires et l’activation cellulaire qui s’ensuit.
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Interleukine1 (IL1) Comme pour le TNF, la source majeure en est le macrophage activé, mais il est aussi produit par les cellules endothéliales, les astrocytes, et les kératinocytes. Il est synthétisé sous forme d’un précurseur inactif dans la cellule. Une protéase spécifique clive la molécule en 2 fragments dans le cytoplasme dont l’un seulement sera sécrété et actif. Il existe 2 formes (α et β) se fixant sur un même récepteur. Il joue un rôle essentiel dans la réaction inflammatoire et dans l’induction des réponses immunitaires spécifiques. Quand il est produit en grande quantité, il passe dans le sang et agit à distance. C’est ainsi qu’il augmente la température centrale par action directe sur l’hypothalamus, qu’il augmente la production des protéines de la phase aiguë de l’inflammation par action sur les hépatocytes, ce qui se traduit par une augmentation de la vitesse de sédimentation sanguine, qu’il induit une cachexie. Comme le TNF, c’est un puissant inducteur inflammatoire notamment en induisant la sécrétion d’autres cytokines par les cellules de l’immunité.
Cytotoxicité à médiation cellulaire Elle concerne principalement les lymphocytes T portant le marqueur CD8 qui sont responsables de l’immunité à médiation cellulaire antivirale. Ces cellules sont en effet capables de lyser des cellules infectées par un virus. Mais ces lymphocytes tueurs sont impliqués dans le rejet de greffe, les maladies auto-immunes et peuvent présenter une activité antitumorale. Ils reconnaissent des peptides étrangers dérivés de protéines intracellulaires et associés aux molécules HLA de classe I. La préférence qu’ont les cellules CD8+ à reconnaître des peptides présentés par les antigènes de classe I repose sur la liaison directe que la molécule CD8 peut avoir avec ces classes I. Les lymphocytes T CD8+ qui sortent du thymus ne sont pas doués de ce pouvoir cytolytique, même s’ils expriment un TCR fonctionnel et peuvent reconnaître un antigène. Par exemple dans le cas d’une greffe, très peu de lymphocytes T cytoxiques (CTL) spécifiques de l’allogreffe sont détectés dans le sang du receveur avant la greffe. En revanche, si les lymphocytes T sont préalablement cultivés pendant 7 à 10 jours, avec les leucocytes du donneur (culture mixte lymphocytaire), des CTL spécifiques du donneur sont facilement mis en évidence dans ces cultures. Il en va de même pour des cellules infectées par des virus. Ces cellules ont subi un processus de différenciation lors de la phase de culture. Cette différenciation nécessite 2 types de signaux pour se réaliser. L’un est la reconnaissance spécifique de l’antigène, l’autre est la présence de cytokines ; bien que l’on ne connaisse pas exactement les cytokines indispensables, l’IL2, l’IFN γ sont connus pour influencer ce phénomène au moins in vitro. Elles sont produites par les CD4+ ou bien par ces mêmes CD8+ (autocrinie). La fonction essentielle des lymphocytes T cytotoxiques est de lyser une cellule cible. En fait l’étape de différen2190
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ciation dont nous venons de parler est la période de mise en place de la machinerie nécessaire pour accomplir cette fonction. Ainsi, il apparaît dans le cytoplasme, près de la membrane, des granules contenant des protéines capables de perforer la membrane des cellules cibles (perforine), des enzymes de type sérine estérases, des protéoglycanes. La lyse est antigène spécifique et est restreinte par le complexe majeur d’histocompatibilité. Seules les cibles exprimant le même HLA de classe I et le même peptide antigénique associé que les cellules qui ont permis la différenciation des pré-CTL peuvent être reconnues. Un contact entre les 2 cellules (tueuse et cible) est indispensable pour obtenir une lyse. Les CTL eux-mêmes sont résistants à ce type de lyse et ne s’autodétruisent pas. Un CTL peut tuer séquentiellement plusieurs cibles. Il existe 4 étapes distinctes menant à la mort d’une cellule cible. La première consiste en la reconnaissance et la formation d’un conjugué entre les 2 cellules. Le CTL se lie à la cellule cible par son récepteur à l’antigène (TCR) spécifique de celui-ci, mais aussi par d’autres molécules via une liaison non spécifique (CD2/LFA3, CD8/HLA classe I, LFA-1/ICAM-1). Ces systèmes de type fermeture à glissière, bien que non spécifiques, sont importants à considérer car ils permettent le rapprochement transitoire et non spécifique de 2 cellules. Puis la liaison de plusieurs TCR sur le lymphocyte avec plusieurs HLA + peptide viral sur la cellule cible permet une activation du CTL qui ne peut être qu’antigène spécifique. Ce phénomène est donc exactement superposable à l’activation des CD4 + helper qui mène à la production de cytokines. Ici il va mener à la délivrance du « message lytique » à la cellule cible constituant la 3e étape. Deux types de mécanismes lytiques existent. Premièrement, les CTL sécrètent dans l’espace intercellulaire le contenu de leurs granules dont nous avons déjà parlé plus haut. La perforine, monomérique et inoffensive en tant que telle, va se polymériser au contact de la haute concentration extracellulaire de calcium dans la membrane de la cellule cible et y créer un canal perméable aux ions. Lorsqu’un nombre suffisant de ces pores existe, la cellule ne peut plus réguler ses échanges ioniques, elle gonfle et se lyse. C’est la nécrose cellulaire. Ce mécanisme de mort cellulaire est analogue à celui infligé par le complément. Les autres composants des granules ou bien protègent la cellule tueuse d’une lyse (protéoglycanes) ou bien sont aussi délétères pour la cellule cible (sérine estérases = granzymes). Dans le deuxième type, le mécanisme fait intervenir une fragmentation de l’ADN de la cellule cible. Il y a activation des enzymes intracellulaires responsables de ce phénomène par la mise en jeu de récepteurs membranaires particuliers comme l’antigène FAS ou CD95 présents à la surface de la cellule cible ou bien du système TNF/TNF récepteur. Ce mécanisme est totalement indépendant de l’exocytose des granules. Lorsque l’ADN est fragmenté le noyau se fragmente aussi, la membrane bourgeonne, et la cellule entière se réduit à quelques globules. C’est l’apoptose.
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Ces 2 mécanismes peuvent coexister et sont complémentaires. En ce qui concerne l’immunité à médiation cellulaire antivirale, ils n’ont pas les mêmes implications. On comprend aisément que le second mécanisme est mieux adapté à la défense antivirale, car dans ce cas l’ADN viral est lui aussi détruit et il y a un confinement des produits viraux assez long, évitant leur dissémination dans l’environnement extracellulaire. Par le même truchement, le premier est inflammatoire car il y a libération assez rapide d’enzymes dans le milieu extracellulaire, donc destruction locale. Enfin dans une ultime étape, une fois le mécanisme lytique commencé, le CTL se sépare physiquement de sa cible, qui va lentement mourir (1 à 2 h), alors qu’il est capable de recommencer plusieurs autres cycles lytiques de ce type qui durent à peu près une dizaine de minutes. Dans l’immunité à médiation cellulaire antivirale les CTL agissent à 2 niveaux. Premièrement par destruction des cellules infectées, ce qui réduit la diffusion du virus, et deuxièmement par la sécrétion d’interféron notamment γ qui active les macrophages, stimule la production d’anticorps neutralisants (IgG) l’infectivité du virus, et rend les cellules résistantes à l’infection virale.
Concept de déficit de l’immunité cellulaire De toutes les notions évoquées précédemment, il résulte que l’immunité à médiation cellulaire repose sur un édifice moléculaire particulièrement complexe et finement régulé. Il va de soi que si l’un des maillons de la chaîne des signaux générés au cours de la mise en place de la réaction est soit absent, soit incapable de remplir sa fonction, c’est l’ensemble du processus auquel il participe qui est en péril, nous parlerons alors de déficit immunitaire et dans le cas qui nous occupe de déficit de l’immunité cellulaire. Ces processus et leurs voies de régulation sont en général très redondants, ce qui fait que l’altération de l’un n’a pas nécessairement de répercussion tangible. Cette constatation amène à conclure que d’une certaine façon les situations de déficits immunitaires sont un continuum pouvant se situer à n’importe quel point entre la normalité objective (existe-t-elle ?) et la déficience totale et évidente, ce qui fait souvent parler de susceptibilité. Dans un certain nombre de cas une susceptibilité exacerbée d’un individu à un type d’infection par exemple n’est peut-être que la traduction de la présence d’un gène légèrement altéré dont le produit présente quand même un reliquat fonctionnel. Compte tenu des liens étroits qui existent entre les immunités humorale et cellulaire, un déficit massif de la seconde entraîne indirectement le déficit sévère de la première. Nous parlerons alors de déficits combinés. Le nombre de cibles moléculaires possibles pouvant être altérées étant très important, seuls un certain nombre de déficits sont aujourd’hui caractérisés au niveau moléculaire. Mais il ne faut pas penser uniquement aux déficits immunitaires cellulaires comme le résultat d’anomalies génétiques congénitales. Il existe aussi des causes acquises notamment infectieuses dont l’infection par le
virus de l’immunodéficience humaine de type 1 est la plus connue. Les phénotypes des déficits immunitaires sont assez polymorphes reflétant la complexité des phénomènes moléculaires en cause et leur évolution selon l’âge. Les mécanismes déficients ne sont pas toujours proprement « immunologiques », mais peuvent être plus généraux comme par exemple certaines maladies métaboliques congénitales s’accompagnant de manifestations immunologiques. Cependant, quelle qu’en soit la cause, la symptomatologie tourne toujours autour des manifestations infectieuses inhabituelles par leur ampleur, leur répétition ou leur persistance, alors que l’on constate habituellement une absence de ganglions lymphatiques ou de splénomégalie. Des états d’auto-immunité, des entéropathies, des anomalies hépatiques, des retards de croissance peuvent aussi être présents ou donner l’alerte. D’autres malformations peuvent aussi être présentes et évocatrices tout en étant plus évidentes à l’examen clinique direct. À un âge plus avancé ce sont des états tumoraux qui peuvent se manifester. La numération formule montrera les altérations numériques commandant l’analyse des marqueurs membranaires lymphocytaires, le dosage des immunoglobulines sériques. Un diagnostic précoce est essentiel et permet de diriger le patient vers les centres spécialisés pour une greffe de moelle osseuse ou le traitement de la cause infectieuse. Ce sont des maladies extrêmement graves mettant rapidement le pronostic vital en jeu, d’autant que les vaccinations avec des virus atténués ou le BCG (bacille bilié de Calmette et Guérin) peuvent être des modes de révélation de ces états. ■
Points Forts à retenir • Après activation, les lymphocytes T vont subir des processus divers de différenciation consistant en la transcription de certains gènes pour aboutir à exercer leurs fonctions cellulaires régulatrices de la réponse immunitaire cellulaire et humorale par le biais non seulement de molécules de surface, mais aussi de médiateurs solubles de nature glycoprotéiques appelés cytokines : IL2, IFNγ, IL4, TNF α, IL1. • La cytotoxicité à médiation cellulaire est l’une de ces fonctions et concerne plutôt les lymphocytes T portant le marqueur CD8. Ces cellules sont capables de lyser des cellules infectées par un virus soit par apoptose, soit par nécrose de la cellule cible. Mais ces lymphocytes tueurs sont impliqués dans le rejet de greffe, les maladies auto-immunes et peuvent présenter une activité antitumorale. Ils reconnaissent des peptides étrangers dérivés de protéines intracellulaires et associés aux molécules HLA de classe I. • Les cytokines quant à elles sont plutôt produites par les lymphocytes T portant le marqueur CD4 que l’on appelle aussi auxiliaires. Ils reconnaissent plutôt des peptides antigéniques dérivés de protéines exogènes et présentés par les molécules HLA de classe II.
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POUR APPROFONDIR 1 / Structure du CD3 L’addition d’un anti-TCR à une solution de protéines membranaires du lymphocyte T permet de purifier non seulement les 2 chaînes du TCR, mais aussi 4 autres chaînes différentes qui leurs sont associées et qui représentent le complexe CD3. Il y a la chaîne γ (PM = 20 000), la chaîne δ (PM = 25 000), la chaîne ε (PM = 20 000) et la chaîne ζ (PM = 16 000). Ces chaînes sont elles-mêmes associées en dimères. Ainsi au sein du complexe, la chaîne δ est-elle associée par un pont disulfure à la chaîne ε, tandis que la chaîne γ se retrouve associée aussi avec la chaîne ε. La chaîne ζ est quant à elle homodimérique là aussi par l’existence d’un pont disulfure interchaîne. L’arrangement combinatoire de ces dimères est complexe et peut varier d’une cellule à l’autre, mais en général on s’accorde à penser que le supercomplexe TCR/CD3 à la surface du lymphocyte T est de la nature suivante : [αβ]2 [γ/δε]2 [ζζ]4. Les chaînes constitutives du CD3 ne présentent pas de variabilité génétique et lors d’un phénotypage lymphocytaire on utilise, en général, un anticorps spécifique de la chaîne ε pour identifier le CD3, et donc le complexe TCR/CD3 et ainsi numérer les lymphocytes T puisque ces structures moléculaires ne se retrouvent qu’à la surface des lymphocytes T à l’exclusion de toutes les autres cellules de l’organisme. À la surface du lymphocyte T mature, le complexe TCR/CD3 est en principe indissociable, et lorsqu’une des chaînes est présente à la membrane, elles le sont toutes. L’expression à la membrane de ce complexe est coordonnée. Ainsi, la chaîne α du TCR s’associe avec le dimère CD3 δ et ε, tandis que la chaîne TCR β s’associe au dimère CD3 γ et ε. Les dimères ζ semblent quant à eux ne rejoindre le complexe qu’aux dernières étapes de sa maturation avant sa migration à la membrane. Comme c’est la chaîne ζ qui est limitante (à peu près exprimée à 10 % du niveau des autres), les protéines produites en excès sont rapidement détruites à l’intérieur de la cellule et jamais exportées en surface. Toutes les chaînes du CD3 présentent dans la portion intramembranaire un acide aminé chargé négativement complémentaire de la charge positive présente dans la portion intramembranaire des chaînes du TCR, ce qui stabilise leur agrégation. La portion intracytoplasmique de ces protéines comporte au moins 1 motif d’une vingtaine d’acides aminés particuliers comprenant toujours 2 tyrosines et des leucines capables de médier la transduction du signal par le jeu de phosphorylation de tyrosines (ITAM pour immunoreceptor tyrosine based activation motif). Ces motifs sont indispensables à l’activation cellulaire, et leur altération entraîne des modifications profondes de la fonction du lymphocyte T et des déficits immunitaires congénitaux sévères.
2 / Molécules co-activatrices Système CD28 Il s’agit d’un dimère d’une glycoprotéine transmembranaire exprimée par presque tous les lymphocytes T matures CD4, et 50 % des lymphocytes T CD8 matures. La structure primaire de cette molécule
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est conservée des oiseaux à l’homme, témoignant de son importance fonctionnelle. Son expression à la surface des cellules varie avec le niveau d’engagement avec ses ligands CD80 et CD86 qui sont des molécules membranaires présentes sur les cellules présentatrices de l’antigène comme les lymphocytes B. L’engagement du CD28 par ses ligands permet : l’augmentation très importante de la production de cytokines (IL2, IL4, GM-CSF, TNF, IFN γ par exemple), l’augmentation de l’expression des chaînes du récepteur à l’IL2, de diminuer le seuil d’activation du lymphocyte T, de prévenir la mort cellulaire programmée qui suit l’activation, la différenciation des Th1, la différenciation des lymphocytes T cytolytiques. L’inhibition de cette interaction va donc sévèrement altérer la réponse immunitaire et de façon durable ce que l’on désigne sous le nom d’anergie. Il existe une seconde molécule, homologue du CD28, qui est le CD152 (CTLA-4) exprimée à la surface du lymphocyte T activé seulement. Il est exprimé environ 10 fois moins que le CD28, mais la chose intéressante, c’est qu’il a la possibilité de lier les mêmes ligands (CD80 et 86) quoique avec une affinité 20 à 50 fois moindre, créant ainsi une compétition pour les ligands entre les 2 récepteurs. Simultanément à l’activation par le TCR, la liaison du CD28 avec ses ligands entraîne l’expression membranaire de CD152 dont l’essentiel est normalement intracellulaire. Le rôle du CD152 est inverse de celui du CD28 et il régule négativement l’activation cellulaire. L’inhibition de sa mise en jeu augmente la prolifération cellulaire, d’ailleurs les souris chez lesquelles les gènes codant CD152 sont inactivés, présentent une prolifération majeure et un syndrome auto-immun grave. De la même façon le CD28 a un rôle important dans la maturation des thymocytes. Enfin, l’inhibition de cette voie de costimulation permet d’envisager des applications thérapeutiques dans le domaine des transplantations pour prévenir le rejet. Inversement dans le cancer où l’on cherche à promouvoir une réponse immunitaire antitumorale, l’expression des ligands de CD28 à la surface des cellules tumorales favoriserait l’installation d’une immunité antitumorale. Système CD40/CD40-ligand Ce système moléculaire est surtout impliqué dans la génération de la réponse primaire et secondaire humorale. Le CD40-ligand (CD154) est exprimé par les lymphocytes T activés. Sa structure est voisine de celle du TNF, du CD95-ligand (Fas-ligand) qui sont d’importantes molécules régulatrices. Quant au CD40 qui est le récepteur au CD154, il est assez voisin du récepteur au TNF, du CD95 (Fas). Il est exprimé sur les cellules présentatrices de l’antigène que sont les cellules dendritiques, les monocytes/macrophages activés et les lymphocytes B. Il permet lorsqu’il a lié son ligand à la surface du lymphocyte T activé : la commutation isotypique des Ig chez les lymphocytes B activé, une augmentation de l’expression des ligands CD80 et 86 du CD28, la prolifération lymphocytaire B, la sécrétion de cytokines par les monocytes/macrophages activés et les cellules dendritiques (IL 12, IL 1).
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POUR APPROFONDIR (SUITE) Les 2 systèmes sont donc interconnectés et cette interconnexion permet de saisir leur importance dans le développement d’une réponse immunitaire dans sa globalité. CD2 La molécule CD2 est connue depuis très longtemps, puisque avant les anticorps monoclonaux, les lymphocytes T étaient identifiés grâce à leur faculté à s’associer à des hématies de mouton. Le lymphocyte T était ainsi entouré de globules rouges, et cette image bien visible au microscope était appelée rosette. Les cellules rosette de mouton positives étaient des lymphocytes T. Le CD2 est exprimé par les lymphocytes T et une partie des lymphocytes NK. C’est une molécule de coactivation qui possède plusieurs ligands assez ubiquitaires dont le CD58 ou LFA3 présents sur la cellule présentatrice de l’antigène.
3 / Marqueurs membranaires de l’activation lymphocytaire T Il s’agit de molécules dont l’expression membranaire est liée à l’activation, c’est-à-dire au contact antigénique. Molécules HLA de classe II Au repos, le lymphocyte T n’exprime que les molécules de classe I, comme toutes les cellules nucléées de l’organisme. Après activation il exprime les molécules de classe II dont les molécules D. Comme nous disposons d’anticorps monoclonaux spécifiques des portions invariables de ces molécules, nous pouvons mettre en évidence ces cellules et ainsi avoir une idée de l’état d’activation du système immunitaire. L’expression de classe II persiste plusieurs jours après l’activation. CD69 C’est une molécule de coactivation dont l’expression est décelée 2 ou 3 heures après activation. Cependant, elle ne persiste pas et disparaît rapidement. CD25 C’est la chaîne α du récepteur à l’interleukine 2 qui permet la formation du récepteur de haute affinité sur lequel vient se lier l’IL2, permettant la prolifération des lymphocytes T. Son expression nécessite une forte activation, et persiste pendant plusieurs jours.
4 / Transduction du signal Comme nous avons déjà eu l’occasion de le dire, le TCR pour ce qui concerne la spécificité de la reconnaissance, les différentes chaînes du CD3, les corécepteurs et les molécules de coactivation sont mobilisés dans le plan membranaire, lors du contact entre le lymphocyte T et la cellule présentatrice de l’antigène. Cette mobilisation
est hautement ordonnée dans le plan membranaire et constitue la synapse immunologique. Cette activation va avoir pour résultat d’induire la transcription d’une centaine de gènes jusqu’alors quiescents ou peu actifs. Mais entre l’accomplissement d’un programme de différenciation (par exemple en cellules cytolytiques capables de détruire des cellules infectées par un virus) ou la mise en route de la prolifération cellulaire, des intermédiaires moléculaires intracellulaires nombreux sont nécessaires. Quelques secondes après l’engagement du TCR et pendant les quelques heures qui suivent, on observe : des phosphorylations de protéines, une augmentation du calcium intracellulaire, une augmentation du pH intracellulaire, une perturbation de la concentration des nucléotides cycliques. Comme les portions intracytoplasmiques des protéines membranaires concernées par l’interaction avec la cellule présentatrice de l’antigène ne présentent aucune activité enzymatique, c’est par l’intermédiaire des séquences ITAM que va s’effectuer le couplage avec les kinases cellulaires et leur subséquente activation. Au cours de l’interaction TCR/CD3/CD4 ou CD8 avec leurs ligands présents sur la cellule présentatrice de l’antigène, la mobilisation du CD4 ou du CD8 auxquels est liée une tyrosine kinase appelée p56lck amène celle-ci à pouvoir phosphoryler les motifs ITAM portés par les portions intracytoplasmiques des différentes chaînes du CD3. Une fois ces tyrosines phosphorylées, d’autres kinases en les reconnaissant vont pouvoir être activées de proche en proche. C’est l’état de phosphorylation sur des tyrosines, des sérines ou des thréonines particulières de tous ces acteurs qui régule leur activité et leurs interactions. Cette cascade, très complexe, permet finalement la mise en jeu de facteurs de transcription régulant l’activité d’un ensemble de gènes et de protéines régulatrices permettant la différenciation et la prolifération. L’activité kinase au cours de ce processus est elle-même régulée négativement par des phosphorylations sur certaines de leurs propres tyrosines, et c’est précisément là que les phosphatases comme le CD45, qui est recruté au lieu de la synapse, vont paradoxalement pouvoir permettre la poursuite de l’activation et donc sa régulation, qui autrement s’éteindrait. L’augmentation du calcium intracellulaire n’est pas totalement comprise mais elle provient non seulement du flux d’ions calciques de l’extérieur vers l’intérieur cellulaire permis par un brusque changement de perméabilité membranaire mais aussi de l’ouverture de stocks intracellulaires de calcium. Cette augmentation du calcium intracellulaire va modifier un certain nombre de protéines à activité enzymatique calcium dépendante comme la calcineurine cible d’un immunosuppresseur très employé, qui est la ciclosporine A. Les changements de pH en modifiant le milieu vont affecter l’efficacité des enzymes intracellulaires. L’augmentation du pH intracellulaire est provoquée par une augmentation de l’activité du canal membranaire Na+/H+ due au clivage de certains phospholipides de la membrane par des phospholipases activées par la mobilisation du complexe TCR/CD3. En faisant varier la concentration intracellulaire en nucléotides cycliques, notamment celle de l’AMPc, la cellule module certaines
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