pengantar Timbal adalah logam lunak dan lunak dengan warna putih kebiruan, dan dapat masuk ke lingkungan kapan saja selama penambangan, peleburan, pemrosesan, penggunaan, daur ulang, atau pembuangan. Timbal terutama digunakan dalam baterai asam, selubung kabel, pigmen warna, aditif bensin, pipa distribusi air solder, glasir keramik, industri kertas, mesin cetak, dan industri perhiasan perak [1, 2]. Timbal hadir dalam makanan, minuman, tanah / debu, dan udara atmosfer diserap oleh saluran pencernaan (GIT). Logam dengan cepat diambil dalam darah dan jaringan lunak (paruh, 2836 hari) kemudian ke tulang (paruh 27 tahun). Timbal telah terbukti menyebabkan efek buruk pada beberapa organ dan sistem organ, termasuk sistem hematopoietik, saraf, ginjal, kardiovaskular, reproduksi, dan kekebalan tubuh, dan bersifat mutagenik pada tikus [1-3]. Efek biologis timbal tergantung pada tingkat dan lamanya paparan. Timbal menginduksi stres oksidatif dengan memproduksi radikal bebas dan menurunkan sistem pertahanan antioksidan. Radikal bebas dihasilkan dari endogen (mitokondria, mekanisme CytP450, dan peroksisom) dan sumber eksogen (xenobiotik dan reaksi kimia) [4, 5]. Timbal dapat merusak keseimbangan prooxidant / antioksidan. Ini menghasilkan radikal bebas yang berlebihan dan akhirnya stres oksidatif [6, 7]. Stres oksidatif merusak hampir setiap organ tubuh. Meskipun spesies oksigen reaktif (ROS) penting dalam proses pensinyalan, produksinya yang berlebihan menyebabkan kerusakan sel dan jaringan. ROS menyerang membran lipid, protein, dan asam nukleat [4, 8]. Mitokondria memanfaatkan O2 untuk menghasilkan H2O; Namun, pada saat yang sama, itu juga menghasilkan radikal seperti superoksida (O2 -), H2O2, dan hidroksil (OH-) [9]. Timbal memiliki kemampuan untuk mengikat enzim seperti superoksida dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx), katalase (CAT), dan dehidrogenase glukosa-6-fosfat [10]. GPx, SOD, dan CAT sangat rentan terhadap toksisitas timbal, karena fungsinya tergantung pada keberadaan logam, terutama seng, tembaga, dan selenium [11, 12]. CAT adalah enzim tetramerik yang mengandung heme yang memiliki peran antioksidan dan dipengaruhi secara negatif oleh timbal. Ini terlibat dalam degradasi hidrogen peroksida menjadi air [13-15]. Keseimbangan prooxidant / antioksidan yang terganggu menghasilkan pembentukan ROS yang berlebihan, yang menghasilkan kerusakan oksidatif pada jantung, hati, otak, ginjal, sistem reproduksi, dan eritrosit [16]. Laporan masa lalu dalam literatur jelas menunjukkan bahwa timbal menciptakan stres oksidatif dan mengubah status antioksidan populasi yang terpapar pada kadar timbal tinggi seperti pekerja pabrik baterai. Saat ini, industri manufaktur baterai mengambil semua tindakan pencegahan untuk mengurangi paparan timbal dan toksisitasnya. Oleh karena itu, kami telah merencanakan penelitian ini untuk melihat skenario saat ini kadar timbal darah (PbB) dan pengaruhnya terhadap parameter stres oksidatif, yaitu serum lipid peroksida (LP), dan parameter antioksidan, seperti RBC-SOD, RBCCAT, plasma ceruloplasmin (CP), dan serum nitrit, dari pekerja pabrik baterai di Maharashtra Barat, India. material dan metode Untuk penelitian ini, total 81 subjek laki-laki dimasukkan. 43 pekerja pembuatan baterai dari Maharashtra Barat, India, dengan usia antara 19 dan 42 tahun, dipilih sebagai kelompok studi dan dibandingkan dengan 38 subyek laki-laki sehat yang cocok dengan usia (kelompok kontrol). Semua subjek penelitian dan kelompok kontrol adalah non-alkohol dan non-perokok, hanya subjek pria sehat yang dimasukkan, dan mereka yang menjalani pengobatan untuk penyakit ringan dan berat dikeluarkan. Sebelum pengumpulan darah, subyek
penelitian dan kelompok kontrol diberitahu tentang tujuan penelitian dan bahaya kesehatan dari paparan timbal dan toksisitasnya, dan persetujuan tertulis diperoleh dari subyek kedua kelompok. Data demografis, pekerjaan, dan klinis dikumpulkan dengan menggunakan kuesioner dan wawancara. Sebagian besar pekerja pabrik baterai memiliki keluhan utama kehilangan nafsu makan, sakit perut yang intermiten, mual, diare, konstipasi, dan mialgia. Status sosial ekonomi semua subjek dari kedua kelompok adalah rata-rata. Asupan makanan dan kebiasaan makanan semua subjek adalah normal. Protokol eksperimental telah disetujui oleh Komite Protokol Institusional, dan izin etis diperoleh dari Komite Etik Institusional. Perawatan sepenuhnya sesuai dengan Deklarasi Helsinki tahun 1964 [17] dipraktikkan selama prosedur eksperimental. Sepuluh mililiter sampel darah diambil dengan menusuk vena antekubital; 4 mL darah dipindahkan dalam tabung yang berisi heparin, dan jumlah yang sama juga ditempatkan dalam tabung polos. Sisa 2 mL darah dikumpulkan dalam bulb EDTA untuk uji parameter biokimia yang termasuk dalam penelitian (Shimadzu UV-1800, spektrofotometer, Jepang). Semua parameter biokimia diukur dengan metode standar. Semua bahan kimia dan reagen yang digunakan diterima dari Sigma Aldrich Chemicals, Bangalore, India. Level PbB diestimasikan dengan menggunakan penganalisa timbal darah Lead Care II (Magellan Biosciences, Chelmsford, MA, USA). Sistem Lead Care II menggunakan teknik elektrokimia yang disebut voltametri pengupasan anodik untuk menentukan jumlah timbal dalam sampel darah. Darah bercampur dengan reagen pengobatan Lead Care, dan sel-sel darah merah (RBC) dilisiskan, yang melepaskan timbal yang terikat ke dinding RBC. Potensi negatif diterapkan pada sensor untuk mengakumulasi atom timbal pada elektroda uji. Potensi dibalik dengan cepat, melepaskan ion timbal. Arus yang dihasilkan berbanding lurus dengan jumlah timbal dalam sampel [18]. Peroksidasi lipid diukur secara spektrofotometri menggunakan metode Satoh [19]. Protein dalam serum diendapkan oleh asam triklorasetat, dan campuran dipanaskan dengan asam tiobarbiturat dalam 2 M natrium sulfat dalam bak air mendidih selama 30 menit. Kromogen yang dihasilkan diekstraksi dengan n-butil alkohol, dan absorbansi fase organik ditentukan pada panjang gelombang 530 nm. Nilai-nilai dinyatakan dalam nanomol per mililiter malondiadehyde menggunakan 1,1,3,3tetraethoxy propana sebagai standar [19]. Aktivitas RBC-SOD ditentukan oleh metode Marklund dan Marklund [20]. Anion superoksida terlibat dalam auto-oksidasi pirogalol pada pH basa (8,5). SOD menghambat auto-oksidasi pyrogallol, yang dapat ditentukan sebagai peningkatan absorbansi per 2 menit pada 420 nm pada spektrofotometer. Aktivitas SOD diukur sebagai unit per mililiter hemolisat. Satu unit SOD didefinisikan sebagai jumlah enzim yang dibutuhkan untuk menyebabkan 50% penghambatan oksidasi pirogalol [20]. RBC-CAT diukur dengan metode Aebi [21]. Sedimen eritrosit dibilas tiga sampai empat kali menggunakan 0,9% NaCl dan dilisiskan dalam 3 vol air dingin, diredistilasi dan dibiarkan dalam es selama 30 menit. Sampel tidak disentrifugasi sebelum pengukuran CAT. Hemolysate diencerkan 500 kali dengan buffer fosfat (60 mM) pada pH 7,4. Reaksi kinetik dilakukan dalam kuvet yang dicampur dengan 3,0 mL dapar fosfat, 10 μL hemolisat, dan 1,0 mL H2O2, dan absorbansi awal diukur segera pada λ 240 nm. Perubahan absorbansi kinetik diukur setiap 15 detik hingga 1 menit pada spektrofotometer Shimanzu UVVIS. Unit aktivitas CAT diekspresikan sebagai milimolar dekomposisi H2O2 / mg Hb / menit [21]. Plasma CP ditentukan oleh Ravin [22]. CP mengoksidasi p-phenylenediamine dengan adanya oksigen untuk membentuk produk teroksidasi berwarna ungu. Konsentrasi CP ditentukan dari laju oksidasi phenylenediamine pada 37 ° C dan pada pH 6.0, dan memiliki puncak penyerapan pada 530 nm [22, 23]. Serum nitric oxide (NO) ditentukan dengan metode reduksi kadmium. Serum dideproteinisasi dengan reagen Somogyi. Nitrat direduksi menjadi nitrit oleh Cd yang dilapisi Cu dalam buffer glisin
pada pH 9,7 yang ditentukan oleh diazotisasi sulfanilamide dan digabungkan ke naphthylethylene diamine, yang diukur pada 545 nm. [24]. Perbandingan statistik antara kontrol dan kelompok pekerja pembuatan baterai dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak InStat GraphPad. Analisis statistik antara kontrol dan kelompok pekerja pabrik baterai dilakukan dengan uji-t Student. Perbedaan rata-rata dianggap signifikan pada p <0,05. Kami juga telah menghitung persentase perubahan parameter biokimia dari pekerja pabrik baterai sehubungan dengan kelompok kontrol (Gambar 1).