Tesis.comparacion De La Proteccion Inmunologica Conferida Por Dos Vacunas Inactivadas Contra La Enfermedad De Newcastle.

UNIVERSIDAD JUAREZ AUTONOMA DE TABASCO

UNIDAD SIERRA DIVISION CIENCIAS AGROPECUARIAS MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

COMPARACION DE LA PROTECCION INMUNOLOGICA CONFERIDA POR DOS TIPOS DE VACUNAS INACTIVADAS CONTRA LA ENFERMEDAD DE NEWCASTLE

T

E

S I S

QUE PARA OBTENER EL TITULO DE : MEDICO

VETERINARIO

ZOOTECNISTA

PRESENTA: RAUL ALEJANDRO KIM GOMEZ ASESOR: M.V.Z.,E.P.A. JOSE J. URRUTIA LOPEZ

VILLAHERMOSA,TAB.

1988

DEDICATORIAS

A MIS PADRES: Por todo el apoyo que me han brindado Para la culminación de mi carrera

A MIS HERMANOS(HAS): Con todo cariño .

A CATALINA: Con todo mi amor,por su apoyo y comprensión para la realizacion de este trabajo.

CONTENIDO

RESUMEN ……………………………………………………………………………….. 1

INTRODUCCION …………………………………………………………………………. 2

OBJETIVO…………………………………………………………………………………….6

MATERIAL Y METODOS ………………………………………………………………. 7

RESULTADOS ……………………………………………………………………………….10

DISCUSION …………………………………………………………………………………..16

CONCLUSION ……………………………………………………………………………… 19

BIBLIOGRAFIA …………………………………………………………………………….. 20

R E S U M E N

Se comparo la protección inmunológica conferida por dos tipos de vacunas inactivadas contra la enfermedad de Newcastle, una a base de virus inactivado emulsionado en aceite (VIEA),por vía subcutánea a los quince días de edad y la otra a base de virus inactivado adsorbido en hidróxido de aluminio(VIAHA),por vía subcutánea a los quince días de edad.Hubo diferencia altamente significativa entre los efectos de los tratamientos (P<0.01),obteniéndose con la primera (VIEA) altos niveles de anticuerpos inhibidores de la hemoaglutinación que persistieron hasta los 60 días de edad de las aves, y con la segunda (VIAHA) se obtuvieron niveles muy bajos de anticuerpos durante toda la fase experimental.

1

COMPARACION DE LA PROTECCION INMUNOLOGICA CONFERIDA POR DOS TIPOS DE VACUNAS INACTIVADAS CONTRA LA ENFERMEDAD DE NEWCASTLE.

INTRODUCCION

La enfermedad de Newcastle (ENC) es una infección viral altamente contagiosa que se caracteriza por producir trastornos respiratorios, digestivos y nerviosos a una gran cantidad de especies aviares (1,12,14).Kraneveld (1926),in formo de una infección altamente difusible y mortal de

las gallinas que pre

valecía en las indias orientales Holandesas. Doyle (1927) observo la enfermedad cerca de Newcastle-on-tyne,dio a esta enfermedad el nombre de esta localidad y demostró que era una entidad diferente de la peste aviar(1,6,7) La enfermedad fue reconocida y diagnosticada por primera vez en México

por Camargo y Téllez

Girón en 1946 (3).Desde 1948 en que Olvera (13) registro la muerte de 300 000 aves en el Distrito Federal, la enfermedad de Newcastle (ENC) ha sido un serio problema para la avicultura mexicana. La enfermedad de Newcastle afecta principalmente a las gallinas, pollos, pavos, además son susceptibles en mayor o menor grado otras aves domesticas y silvestres, así como ciertos mamíferos 2

--

incluyendo al hombre, en el que puede producir afecciones oculares (conjuntivitis) y cefalea intensa.El agente infeccioso causal de la enfermedad de Newcastle es un virus clasificado dentro de los paramyxovirus (1,6,7,8,10,12) pudiendo tener cuatro diferentes formas de presentación dependiendo del patotipo (1,7,8,12).La mayoría de los países del mundo en donde la enfermedad de Newcastle es enzootica entre ellos México, han adoptado la vacunación como el método básico para su control (1,15) Dado el carácter enzootico de la enfermedad en nuestro país, es vital tener programas de prevención y control con el objetivo de mantener un adecuado nivel inmunitario en las aves y evitar en lo posible el contacto con el virus a temprana edad. Para ello se necesita implantar medidas higiénico-sanitarias estrictas y programas de vacunación adecuados (9,12).La prevención

y control de la

enfermedad de Newcastle se lleva a cabo por medio de la vacunación de las aves con vacunas elaboradas con virus activo (vivo) y virus inactivado (muerto) (7,12).Las vacunas con virus activo se elaboran con cepas vacunales suaves ,tales como los virus tipo Hitchner: Cepa B1,Cepa La Sota (1).Las vacunas a virus vivo pueden causar reacciones respiratoria adversas, las cuales pueden aumentarse si se aplican en aves susceptibles o infectadas con mycoplasma (7,12,14).Este tipo de vacunas producen un bloqueo celular a nivel de la mucosa respiratoria que constituye la vía natural de entrada del virus (5).Las vacunas a -3

virus muerto

o inactivado generalmente no provocan reacción respiratoria

postvacunal (1,9,12). Si la mayor parte de las vacunas a virus vivo pueden ser administradas colectivamente, las vacunas a virus inactivado por lo contrario, deben ser aplicadas individualmente .Esta diferencia se debe al hecho que las vacunas a virus inactivado deben ser aplicadas por vía parenteral, mientras que las vacunas a virus vivo pueden ser administradas por vías diversas, tanto individual (instilación conjuntival, intranasal o intramuscular) como masiva (por aerosol o en el agua de bebida).(1,12,21).Como se menciono anteriormente las vacunas inactivadas requieren ser aplicadas por inyección, y mientras las vacunas adsorbidas en gel de hidróxido de aluminio pueden ser aplicadas con seguridad por vía intramuscular, las vacunas emulsionadas en aceite tienen que ser aplicadas por vía subcutánea para evitar la formación de abscesos (6). La vacunación simultanea con virus vivo y virus inactivado tiene por objeto provocar una respuesta inmune local con el primero, así como la producción de anticuerpos sistémicos con el segundo (5).Los anticuerpos locales protegen contra la implantación de la enfermedad, en tanto que los segundos lo hacen contra la infección

generalizada

(22).Se

han

usado

extensamente

formalina

y

betapropiolactona para la inactivación del virus de la enfermedad de Newcastle. El resultado de la inactivación es la ausencia de la multiplicación del antígeno -3

dentro del organismo (11). Para incrementar la respuesta inmune, las vacunas inactivadas usualmente tiene un adyuvante a base de hidróxido de aluminio o pueden estar en la forma de una emulsión producida por fluidos alantoideos y un aceite mineral (11).Estos adyuvantes utilizados en las vacunas inactivadas producen una liberación lenta del antígeno que tiene el efecto de provocar múltiples estímulos antigénicos por periodos que llegar a

alcanzar varias semanas (12,18).

5

OBJETIVO

El objetivo de este trabajo fue comparar la protección inmunológica conferida por dos tipos de vacunas inactivadas contra la enfermedad de Newcastle (Emulsionada en aceite vs Adsorbida en hidróxido de aluminio) en base a los títulos de anticuerpos conferidos, medidos por la prueba de inhibición de la hemoaglutinación (2).

6

MATERIAL Y METODOS

Se utilizaron 120 pollitos mixtos de engorda de un día de edad de una línea comercial, los cuales se alojaron en una nave construida con materiales propios de la región, con piso de cemento, ubicada en el km 5 de la carretera Vi llahermosa - Nacajuca .Durante la fase experimental las aves fueron alimentadas con alimento comercial y sometidas a las mismas condiciones de manejo. Fueron utilizadas dos vacunas comerciales contra la enfermedad de Newcastle, una a base de virus inactivado emulsionado en aceite*(VIEA) y la otra a base de virus inactivado adsorbida en hidróxido de aluminio**(VIAHA).Los pollos se dividieron en tres grupos de 40 animales cada uno. El diseño experimental fue completamente aleatorizado con dos tratamientos y un testigo y dos repeticiones por tratamiento.

* Lab. Pfizer **Lab Intervet

7

Se describen los tratamientos utilizados en este trabajo:

TRATAMIENTO No.1

Los pollos de este grupo fueron vacunados a los quince días de edad con virus inactivado emulsionado en aceite (VIEA) por vía subcutánea 0.5 ml a cada uno.

TRATAMIENTO No.2

Los pollos de este grupo se vacunaron a los quince días de edad con virus inacti vado adsorbido en hidróxido de aluminio (VIAHA) por vía subcutánea 0.5 ml a cada pollo.

TESTIGO

Los pollos de este grupo no fueron vacunados.

8

Posteriormente a la vacunación se sangraron por punción cardiaca 20 pollos de cada grupo a los 30,45 y 60 días de edad, con la finalidad de obtener suero para determinar los niveles de anticuerpos séricos contra la enfermedad de Newcastle. Los sueros que se obtuvieron se sometieron a la prueba de inhibición de la hemoaglutinación (HI). Para el análisis estadístico de los resultados se realizo la transformación raíz cuadrada y= √ x + 0.5 que permite utilizar la técnica de análisis de varianza en grupos de datos en los que se presentan observaciones con valor cero (16). Para la comparación de medias fue realizada la prueba de Tukey.

9

RESULTADOS

Los resultados de este trabajo fueron obtenidos en tres etapas: a los 30,45 y 60 días de edad de las aves. En la primera etapa a los 30 días de edad, según el análisis de varianza para los datos transformados (cuadro 1) existió diferencia altamente significativa (P < 0.01) entre los efectos de los tratamientos. En la grafica 1 se observa que en esta etapa el tratamiento 1 (VIEA) fue el que tuvo el mejor comportamiento, obteniéndose un mayor nivel de anticuerpos con respecto al tratamiento 2 (VIAHA) que mostro un nivel muy bajo de anticuerpos, comportándose estadísticamente igual al grupo testigo (P<0.05). El análisis de las medias para la prueba de tukey se muestra en el cuadro 2. En la segunda etapa a los 45 días de edad de las aves el cuadro 3 muestra el análisis de varianza para los datos transformados, en el cual puede observarse que existió diferencia altamente significativa (P< 0.01) entre los efectos de los tra mientos. En esta etapa (grafica 1) el tratamiento 1 (VIEA) mostro una buena respuesta inmunológica, alcanzando niveles mas altos de anticuerpos con los que se obtiene una mayor protección que la conferida por el tratamiento 2 (VIAHA),con el que se obtuvieron muy bajos niveles de anticuerpos, mostrando un comportami ento inferior al tratamiento 1 (VIEA).En el cuadro 4 se presentan los resultados de la comparación de medias por la prueba de Tukey. 10

En la tercera etapa a los 60 días de edad, el análisis de varianza para los datos transformados que se presenta el cuadro 5, muestra que en esta etapa hubo diferencia altamente significativa (P<0.01) entre los efectos de los tratamientos. En la grafica 1 se puede observar que en esta etapa con el tratamiento 1

(VIEA)

se alcanzaron niveles mas altos de anticuerpos con los que se obtiene adecuada protección, mostrando una respuesta inmunológica superior con respecto al tratamiento 2 (VIAHA) que mostro niveles de anticuerpos muy bajos durante toda la fase experimental, que no confieren suficiente protección. El análisis de las medias por la prueba de tukey se presenta en el cuadro 6.

CUADRO 1.Analisis de varianza para los datos transformados de los títulos de anticuerpos a los 30 días. -------------------------------------------------------------------------------------------------------------G.L. S.C. C.M. F. F.V. Tratamiento

2

8.3954

4.10

Error

57

11.7443

0.21

Total

59

20.1397

**Altamente significativo. (P<0.01)

11

20.37**

CUADRO 3.analisis de varianza para los datos transformados de los títulos de anticuerpos a los 45 días. F.V. Tratamiento

G.L.

S.C.

C.M.

2

27.9327

13.97

Error

57

6.5013

0.11

Total

59

34.4339

F. 122.45**

**Altamente significativo (P< 0.01)

CUADRO 5.Analisis de varianza para los datos transformados de los títulos de anticuerpos a los 60 días. F.V.

G.L.

S.C.

2

30.6533

Error

57

6.127

Total

59

39.7803

Tratamiento

**Altamente significativo (P<0.01)

12

C.M. 15.32 0.1074

F. 142.70**

CUADRO 2.Comparacion de las medias de tratamientos mediante la prueba de Tukey a los 30 días de edad.

Tratamiento

X Datos originales

X Datos transformados

1 VIEA

2.45

1.60ª

2 VIAHA

0.45

0.87b

3 Testigo

0.1

0.76b

Medias con distinta literal son diferentes estadísticamente (P< 0.05)

CUADRO 4.Comparacion de las medias de tratamiento mediante la prueba de Tukey a los 45 días de edad. -------------------------------------------------------------------------------------------------------------Tratamiento X Datos originales X Datos transformados -------------------------------------------------------------------------------------------------------------1 VIEA

5.2

2.35a

2 VIAHA

1.05

1.17b

3 Testigo

0.05

0.73c

Medias con distinta literal son diferentes estadísticamente (P< 0.05)

13

CUADRO 6.Comparacion de las medias de tratamientos mediante la prueba de Tukey a los 60 días de edad. Tratamiento

X Datos originales

X Datos transformados

1 VIEA

5.25

2.38a

2 VIAHA

1.0

1.11b

3 Testigo

0

0.70c

Medias con distinta literal son diferentes estadísticamente (P< 0.05)

14

Grafica No.1

*T.A. 6

VIEA

5 4 3 2 1

VIAHA TESTIGO 0

30

45

Días de edad.

*Títulos de Anticuerpos

15

60

DISCUSION

De las vacunas probadas, las de virus inactivado emulsionado en aceite (VIEA) demostró mayor efectividad, alcanzando mayores niveles de anticuerpos. Después de la vacunación, el titulo de anticuerpos fue aumentando lentamente a la primera valoración a los 30 días, y a los 45 días de edad se encontraron altos niveles de anticuerpos que presentaron una tendencia horizontal sin disminuir hasta los 60 días de edad de las aves que fue el tiempo de duración de este trabajo. Aguilera y Ortega (1) realizaron un trabajo en que vacunaron por diversas vías utilizadas con mayor frecuencia, al vacunar con virus inactivado emulsionado en aceite (VIEA) únicamente, por vía subcutánea, obtuvieron altos niveles de anticuerpos que persistieron por varias semanas, lo cual concuerda con los resultados obtenidos. En otro trabajo, Vega (20) utilizando virus inactivado emulsionado en aceite por vía subcutánea, encontró que el antígeno mantuvo un estimulo continuo durante 50 días. En el presente trabajo la vacuna inactivada emulsionada en aceite mantuvo un estimulo constante postvacunacion hasta los 60 días de edad de las aves que fue la duración del periodo experimental. Téllez Girón (18) en 1968,realizo un trabajo en que comparo una vacuna en base oleosa con respecto

16

a vacunas a base de virus vivo, vacuna inactivada simple y vacuna inactivada adsorbida en hidróxido de aluminio, los resultados que obtuvo demostraron que la vacuna emulsionada produjo una respuesta inmunológica elevada que perduraba por largo tiempo con respecto a las otras vacunas utilizadas. Lo que coincide con los resultados que obtuvimos al comparar la protección inmunológica conferida por la vacuna inactivada emulsionada en aceite contra la vacuna inactivada adsorbida en hidróxido de aluminio, obteniéndose una alta respuesta inmunológica con la primera. Según Garza (5),la prolongada permanencia del antígeno viral inactivado que se logra con el adyuvante emulsionado establece una solida base para lograr un estimulo mas prolongado de la vacuna por periodos que llegan a alcanzar varias semanas. Sin embargo es incapaz de estimular inmunidad en el epitelio respiratorio (9). Urrutia (19) en 1987 realizo un trabajo no publicado, utilizando virus inactivado adsorbido en hidróxido de aluminio en una vacuna triple aviar, encontró un titulo de HI de 2.36, esto nos indica que habría que realizar otros 17

trabajos con vacunas a virus muerto en hidróxido de aluminio, porque la cantidad de antígeno (18%) puede variar de una marca a otra, para determinar el verdadero valor de estos productos biológicos.

18

CONCLUSION

En base a los resultados obtenidos en esta prueba puede concluirse que con la vacuna a base de virus inactivado emulsionado en aceite (VIEA) contra la Enfermedad de Newcastle se obtiene un mayor nivel de anticuerpos inhibidores de la hemoaglutinación que persisten por varias semanas. Se recomienda al utilizar la vacuna inactivada emulsionada en aceite (VIEA) aplicar simultáneamente virus vivo por vía ocular, ya que la primera (VIEA) no protege la vía natural de entrada del virus.

19

BIBLIOGRAFIA 1.-Aguilera,R.M.,Ortega,s.t.(1983) Titulación de anticuerpos y su duración

contra

la enfermedad de Newcastle en pollos de engorda vacunados por diversas vías utilizadas en México. Avirama 3:4-35. 2.-Beard,C.W. (1980) Serologic procedures in: Isolation and identification of Avían pathogens.American association of avian patholigists,Departament of Veterinary microbiology,Texas A&M University,College Station,Texas. 3.-Campos,N.E.(1947)Enfermedad de Newcastle. Tesis de Licenciatura. Escuela nacional de Medicina Veterinaria y Zootecnia, UNAM, México, D.F. 4.-Dorn,P. (1973) Manual de Patología Aviar,Edit. Acribia, Zaragoza, España. 5.-Garza,R.J. (1976) Aspectos inmunológicos de la Enfermedad de Newcastle. Vet. Mex., UNAM, Vol. Vll No2. 6.-Gordon,R.F. (1983) Enfermedades de las aves. Edit. El Manual Moderno, México. 7.-Hanson,R.P. (1972) Newcastle Disease in:Disease of poultry,The Iowa State University Press,Ames,Iowa,USA. 8.-Lucio,M.B. (1976) Panorama de la Enfermedad de Newcastle en México. Vet. Mex., UNAM, Vol. Vll No2.

20

9.-Lozano,D.B. (1984) Brotes de la Enfermedad de Newcastle. Boletín técnico, Lab. Pfizer, S.A., Mexico. 10.-Lardizabal,P.G. (1981) Determinación de anticuerpos por el método de inhibición de la hemoaglutinación en pollos de engorda vacunados contra la en fermedad de Newcastle en el municipio de Veracruz, Ver. Tesis de Licenciatura, FMVZ-Universidad Veracruzana. 11.-Lancaster,J.E.,(1981) The control of Newcastle disease. World Poultry Sci ence Journal,Vol.37 No1. 12.-Mosqueda,T.A.;Lucio,M.B.;Cruz,C.J.S (1984)Enfermedades de las aves, tomo I Enfermedades infecciosas, SUA,FMVZ-UNAM. 13.-Olvera,H.E. (1948) Enfermedad de Newcastle. Tesis de licenciatura. Esc.Nal .de Med. Vet. Y Zoot. UNAM. 14.-Parada,A.J.,Tellez,G.A.,Green,M.J. (1977) Experiencias en México con una vacuna contra la enfermedad de Newcastle emulsionada en aceite. Memorias del congreso Latinoamericano de Avicultura. Caracas, Venezuela.15.-Perelman,A.B. (1976) Importancia de las cepas de desafío en la evaluación de las vacunas contra la enfermedad de Newcastle. Vet. Mex. UNAM, Vol. VII No2.

21

16.-Steel,G.D. y J.H. Torrie (1980) Bioestadística, Principios y procedimientos,1ª ed. En esp., Libros Mc Graw-Hill, México, D.F. 17.-Tellez,G.A. (1968) Experiencias con la vacuna Newcastle inactivada y emulsionada en aceite. Bol. Tec. Div. Vet., Lab. Pfizer, S.A., México. 18.-Tizard,I, (1984) Inmunología Veterinaria, Edit. Interamericana,2da. ed., México, D.F. 19.-Urrutia,L.J.J., (1988) Comunicación Personal. 20.-Vega,M.A. (1975) Estudio comparativo de varios programas de vacunación contra la enfermedad de Newcastle. Valoración de la inmunidad obtenida durante la vida comercial de las aves. Tesis de Licenciatura. Escuela de Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Querétaro. 21.-Eidson,C.S. and Kleven, S.H. (1976) A comparison of various routes of Newcastle disease vaccination at one day of age.Poultry Science 55:1778-1787. 22.-Levy,R.,G. Spira and Z. Zakay –Rones (1976) Newcastle disease virus pa thogenesis in the respiratory tract of local or systemic inmunized chickens. Avian Disease Vol. 19:4.

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