Skripsi Dwi Nur Saktiani Pratiwi.docx

Skripsi

UJI EFEK ANTIPIRETIK DAN ANTIINFLAMASI EKSTRAK ETANOL BUAH WUALAE (Etlingera elatior (JACK) R.M. SMITH) TERHADAP MENCIT JANTAN (Mus musculus L.) GALUR BALB/C

Untuk memenuhi sebagian persyaratan Mencapai derajat sarjana (S-1)

Oleh : DWI NUR SAKTIANI PRATIWI S F1F1 13 143

PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS HALU OLEO KENDARI 2017

ii

PERNYATAAN Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan disuatu Perguruan Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.

Kendari, 23 Oktober 2017

Dwi Nur Saktiani Pratiwi S

iii

KATA PENGANTAR

Alhamdulillah, puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya sehingga penelitian dan penulisan hasil penelitian yang berjudul “UJI EFEK ANTIPIRETIK DAN ANTIINFLAMASI EKSTRAK ETANOL BUAH WUALAE (Etlingera elatior (JACK) R.M. SMITH) TERHADAP MENCIT JANTAN (Mus musculus L.) GALUR BALB/C” dapat terselesaikan. Sholawat dan salam senantiasa tercurahkan kepada baginda Nabi Muhammad SAW beserta keluarga, dan orangorang yang selalu istiqomah hingga akhir zaman kelak. Melalui kesempatan ini secara khusus penulis haturkan terima kasih yang tak terhingga kepada orang tua penulis, ayahanda SAHRUDDIN, S.Pi., M.Si dan ibunda SULHANA, Am.Keb yang telah membesarkan penulis dengan cara terbaik dan senantiasa memberikan motivasi, cinta dan doa yang tulus ikhlas kepada penulis, tak lupa pula penulis ucapkan terima kasih kepada saudarasaudara saya, kakak Dwi Nur Saktiana Pratiwi.S, Amd.Keb, adikku Muh. Asrhaf DwiYandar.S dan Marsya Zahra Putri Anayya.S, yang telah memberikan dukungan dan senyum penyemangat untuk penulis. Terima kasih pula kepada seluruh keluarga besar penulis yang telah memberikan doa dan dukungan kepada penulis demi terselesaikannya tugas akhir ini. Semoga Allah SWT selalu melindungi dan melimpahkan rahmat-Nya kepada mereka. Terima kasih penulis haturkan kepada Ibu Wahyuni, S.Si., M.Si., Apt. selaku Pembimbing I dan Ibu Fadhliyah Malik, S.Farm.,M.Farm., Apt. selaku iv

Pembimbing II, yang telah banyak mengorbankan waktu, tenaga dan pikiran dalam mengarahkan, membimbing penulis, memberikan pengetahuan, bantuan, kritik, saran dan juga semangat selama penelitian dan penyusunan tugas akhir ini. Penulis juga menyampaikan terima kasih kepada : 1.

Rektor Universitas Halu Oleo.

2.

Dekan Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo.

3.

Wakil Dekan I Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo.

4.

Wakil Dekan II Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo.

5.

Wakil Dekan III Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo.

6.

Ketua Jurusan Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo.

7.

Kepala Laboratorium Penelitian Farmasi Universitas Halu Oleo.

8.

Kepala Laboratorium Pendidikan Farmasi Universitas Halu Oleo.

9.

Bapak dan Ibu dewan penguji. Terima kasih untuk semua kritik, saran serta bantuan yang diberikan kepada penulis.

10. Seluruh Bapak/Ibu Dosen dan staf Program Studi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo. Terima Kasih atas ilmu dan pengalaman yang telah diberikan kepada penulis. 11. Sahabat-sahabat seperjuangan tercinta dalam menuntut ilmu dan tempat berbagi suka dan duka : Sisil, Listi, Ayukumala, Sasta, Puyan, Yuriko, Neglan, Anty, Nency, Sri, Nindy, Iga, Dila, Elsa, Sinar, Sarwati, Asty, Intan, Mike, kak Mintje, Agit, Imam, Arif, kak Fuad dan kak Igo terima kasih untuk semua bantuan dan kebersamaan yang tidak akan terlupakan.

v

12. Yang membantu dalam penelitian; Sisil, Yani, Listi, Ayukumala, Kak Edi Mursidi, S.Farm. Terima kasih banyak atas semua bantuan dan kerjasamanya. 13. Teman-teman sepenelitian Etlingera elatior corps terima kasih untuk semua bantuan, kerja sama dan dukungan dalam bentuk tenaga bahkan materi. 14. Teman-teman angkatan 2013 seperjuangan kelas A,B,C yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang telah bersama-sama melewati susah dan senang selama menempuh perkuliahan di Farmasi. 15. Seluruh pihak yang membantu dan tidak dapat disebutkan satu-persatu, terima kasih atas segala keikhlasannya dalam membantu peneliti. Mohon maaf atas hal-hal yang tidak berkenaan dari diri penulis, dan akhirnya penulis menyampaikan penghargaan yang setinggi-tingginya kepada semua pihak dan berharap tulisan ini dapat bermanfaat. Kendari, Oktober 2017

Penulis

vi

DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL ................................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN .................................................................................. ii PERNYATAAN ......................................................................................................... iii KATA PENGANTAR ............................................................................................... iv DAFTAR ISI ............................................................................................................. vii DAFTAR TABEL ..................................................................................................... ix DAFTAR GAMBAR .................................................................................................. x DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................. xi ARTI LAMBANG DAN SINGKATAN ................................................................. xii ABSTRAK ............................................................................................................... xiii ABSTRACK ............................................................................................................ xiv BAB I PENDAHULUAN ........................................................................................... 1 A. Latar Belakang ................................................................................................. 1 B. Rumusan Masalah ............................................................................................ 3 C. Tujuan Penelitian ............................................................................................. 4 D. Manfaat Penelitian ........................................................................................... 4 BAB II TINJAUAN PUSTAKA................................................................................ 5 A. Tumbuhan Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M Smith) ............................... 5 B. Metode Analisis Senyawa Bahan Alam ........................................................... 7 C. Demam ........................................................................................................... 11 D. Pengobatan Demam ....................................................................................... 15 E. Parasetamol (Golongan paraaminofenol) ...................................................... 15 F. Vaksin DPT (difteri-tetanus-pertussis) .......................................................... 17 G. Inflamasi ......................................................................................................... 18 H. Pengobatan Inflamasi ..................................................................................... 24 I. Natrium Diklofenak ....................................................................................... 27 J. Karagenan ...................................................................................................... 28 K. Mencit (Mus musculus L.).............................................................................. 30 L. Kerangka Konsep ........................................................................................... 32

vii

BAB III METODE PENELITIAN ......................................................................... 33 A. Waktu dan Tempat Penelitian ........................................................................ 33 B. Jenis Penelitian ............................................................................................... 33 C. Bahan Penelitian............................................................................................. 33 D. Alat Penelitian ................................................................................................ 33 E. Variabel .......................................................................................................... 34 F. Definisi Operasional....................................................................................... 34 G. Prosedur Penelitian......................................................................................... 35 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................ 46 A. Determinasi tanaman .................................................................................... 46 B. Penyiapan Sampel ......................................................................................... 46 C. Ekstraksi ........................................................................................................ 47 D. Skrining Fitokimia ........................................................................................ 48 E. Karakterisasi Ekstrak .................................................................................... 52 F. Pengujian Antipiretik .................................................................................... 54 G. Pengujian Antiinflamasi ................................................................................ 59 BAB V. PENUTUP ................................................................................................... 64 A. Kesimpulan .................................................................................................... 64 B. Saran ............................................................................................................... 64 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................... 65 LAMPIRAN .............................................................................................................. 70

viii

DAFTAR TABEL Nomor 1.

Teks Pengelompokkan hewan uji antipiretik

Halaman 41

2.

Pengelompokkan hewan uji antiinflamasi

43

3.

Hasil Skrining Fitokimia Buah Wualae

49

4.

Hasil Karakterisasi ekstrak

52

ix

DAFTAR GAMBAR Nomor

Teks

Halaman

1.

Tumbuhan Wualae

5

2.

Patofisiologi Demam

14

3.

Struktur Kimia Parasetamol

16

4.

Mekanisme inflamasi

23

5.

Klasifikasi obat Antiinflamasi Non Steroid

26

6.

Struktur Kimia Natrium Diklofenak

27

7.

Mencit

30

8.

Kerangka Konsep Penelitian

32

9.

Reaksi Hidrolisis Bismut

50

10.

Reaksi Uji Dragendorff

50

11.

Grafik Rata-Rata penurunan Suhu Rektal Mencit

56

pada Beberapa Titik waktu 12.

Grafik Rata-rata besar penurunan suhu Ekstrak

57

Etanol Buah wualae terhadap Mencit 13.

Grafik Rata-Rata penurunan Udem mencit pada

60

beberapa titik waktu 14.

Grafik Rata-rata persen hambat radang ekstrak

61

etanol buah wualae

x

DAFTAR LAMPIRAN

Nomor

Teks

Halaman

1.

Hasil Determinasi Tumbuhan

70

2.

Skema Alur Penelitian

71

3.

Perhitungan Rendamen Ekstrak

72

4.

Karakterisasi Ekstrak

73

5.

Pengelompokkan Hewan Uji

75

6.

Pembuatan Sediaan Pembanding

76

7.

Pembuatan Sediaan Uji

80

8.

Data suhu rektal mencit dan Data volume kaki

87

mencit 9.

Analisis Data Hasil Pengujian Antipiretik dan

96

Antiinflamasi 10.

Dokumentasi Penelitian

102

xi

ARTI LAMBANG DAN SINGKATAN %

: Persen

o

: Derajat Celcius

µL

: Mikroliter

AINS

: Anti Inflamasi Non Steroid

cc

: Centimeter cubic

cm

: Sentimeter

CMC

: Carboxyl Methyl Cellulose

COX

: Cyclooxygenase

DPT

: Difteri Pertusis Tetanus

FeCl3

: Besi (III) klorida

g

: gram

H0

: Hipotesis awal

H1

: Hipotesis kerja

H2SO4

: Asam Sulfat

HCl

: Asam klorida

i.p

: Intraperitoneal

KgBB

: Kilogram Berat Badan

m

: Meter

mg

: miligram

mL

: mililiter

SD

: Standar Deviasi

Sig

: Signifikan

SPSS

: Statistical Product and Service Solution

Vo

: Volume Awal

Vt

: Volume waktu

C

xii

UJI EFEK ANTIPIRETIK DAN ANTIINFLAMASI EKSTRAK ETANOL BUAH WUALAE (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) TERHADAP MENCIT JANTAN (Mus musculus L.) GALUR BALB/C

Dwi Nur Saktiani Pratiwi S F1F1 13 143 ABSTRAK Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith) secara empiris telah digunakan dalam pengobatan dan sebagai bahan pangan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek antipiretik dan antiinflamasi ekstrak etanol buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith) terhadap mencit jantan (Mus musculus L) galur Balb/c serta perbandingan efek ekstrak etanol buah Wualae dengan parasetamol sebagai antipiretik dan natrium diklofenak sebagai antiinflamasi. Ekstrak buah Wualae diperoleh dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Pengujian efek dilakukan pada mencit jantan dan dibagi menjadi 6 kelompok yaitu kontrol negatif (Na.CMC), kontrol positif, dan kelompok perlakuan (pemberian ekstrak buah Wualae 100 mg/KgBB, 200 mg/KgBB, 300 mg/KgBB, dan 400 mg/KgBB). Pengujian efek antipiretik menggunakan vaksin DPT (Difteri Pertusis Tetanus) dosis 0,1 cc secara intraperitoneal sebagai penginduksi demam dan parasetamol 500 mg sebagai kontrol positif. Pengukuran suhu dilakukan selama 3 jam dengan interval 30 menit. Pengujian aktivitas antiinflamasi menggunakan karagenan 1% secara subplantar pada telapak kaki mencit sebagai penginduksi udem dan natrium diklofenak 50 mg sebagai kontrol positif. Pengukuran volume telapak kaki dilakukan selama 6 jam dengan interval 1 jam. Analisis data dilakukan menggunakan analisis Kruskal Wallis dan dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney. Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak etanol buah Wualae positif mengandung alkaloid, flavonoid, tanin, dan terpenoid. Hasil uji efek menunjukkan bahwa ekstrak etanol buah Wualae dengan dosis 400 mg/KgBB memiliki efek antipiretik dan antiinflamasi terbesar dengan total penurunan suhu sebesar 1,237oC dan persen hambat radang sebesar 69,3%. Kata kunci: Antipiretik, Antiinflamasi, Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith.

xiii

ANTIPYRETIC AND ANTI-INFLAMMATORY EFFECTS OF ETHANOL EXTRACT FRUIT WUALAE (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) ON MALE MICE (Mus musculus L.) BALB/C

Dwi Nur Saktiani Pratiwi S F1F1 13 143 ABSTRACT Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith) empirically been used by people to treat diseases and as food. This research was carried to determine the activity of antipyretic and antiinflammatory of ethanol extracts fruit Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith) on male mice (Mus musculus L) Balb/c along with ratio the effects of ethanol extracts of fruit Wualae with paracetamol as a antipyretic and diclofenac sodium as a antiinflammatory. Ethanol extracts of fruit Wualae obtained by maceration method using ethanol 96%. Testing the activity carried on male mice and were divided into 6 groups: negative control (Na.CMC), positive control, and the treatment group (ethanol extracts of fruit Wualae 100 mg/KgBW, 200 mg/KgBW, 300 mg/KgBW, dan 400 mg/KgBW). Testing the antipyretic activity using DPT vaccine (Diphtheria Tetanus Pertussis) dose of 0.1 cc intraperitoneally as an inducer of fever and paracetamol 500 mg as a positive control. Temperature measurement is carried for 3 hours with a 30 minute interval. Testing the antiinflammatory activity using 1 % carrageenan in subplantar on the soles of mice as an inducer of edema and sodium diclofenac 50 mg as a positive control. Foot volume measurement conducted for 6 hours with intervals of 1 hour. Data analysis was performed using Kruskal Wallis statistical analysis and continued with Mann-Whitney test. The test results showed that the effects of ethanol extracts of fruit Wualae at dose of 400 mg/KgBW has antipyretic and anti-inflammatory effects of the largest with a total decrease of temperature of 1,237oC and the percent inhibition of inflammation of 69,3%. Keywords : Antipyretic, Antiinflammatory, Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith.

xiv

BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Tubuh kita mempunyai suatu sistem pertahanan untuk melawan bermacam-macam agen yang infeksius dan toksik, karena tubuh kita sepanjang waktu terpapar dengan berbagai bakteri, virus, jamur, parasit dan cedera jaringan. Sistem pertahanan ini terdiri atas leukosit darah (Sel darah putih) dan sel-sel jaringan yang berasal dari leukosit. Sel darah putih ini diangkut dalam darah menuju ke daerah yang terinfeksi atau cedera jaringan, bekerja dengan proses fagositosis, sehingga sel darah putih dapat menyediakan pertahanan yang cepat dan kuat terhadap agen-agen infeksius (Guyton dan Hall, 2007). Gejala yang terjadi akibat reaksi pertahanan tubuh terhadap infeksi atau cedera jaringan yaitu demam dan inflamasi, yang diawali dengan pelepasan sitokin yang memacu aktivitas mediator inflamasi, mediator ini bekerja akibat aktivitas enzim lipoksigenase dan siklooksigenase karena adanya suatu rangsangan dari luar (Tjay dan Kirana, 2007; Hastuti dkk, 2016). Antipiretik adalah obat yang bekerja untuk menurunkan suhu tubuh yang tinggi, secara selektif dapat mempengaruhi hipotalamus menyebabkan penurunan suhu tubuh ketika demam, bekerja dengan mencegah pembentukan prostaglandin dengan cara menghambat enzim siklooksigenase (Priyanto, 2010). Antiinflamasi merupakan obat yang menekan inflamasi, bekerja dengan mengikat enzim siklooksigenase dan lipoksigenase sehingga menghambat sintesis Prostaglandin dan leukotrien.

1

Hambatan tersebut menyebabkan permeabilitas membran menurun (mengurangi edema), dan nyeri berkurang (Priyanto, 2010). Obat-obatan golongan AINS umumnya memiliki efek samping pada gastrointestinal, seperti menyebabkan terjadinya iritasi lambung dan pendarahan, sehingga penggunaannya perlu disesuaikan dengan kondisi pasien (Priyanto, 2010). Penggunaan obat AINS dalam jumlah tinggi dapat menyebabkan tinnitus (dengungan pada telinga), penurunan pendengaran dan vertigo (Dhyantari dkk, 2015). Saat ini banyak dikembangkan alternatif suatu bahan herbal untuk pengobatan, seiring dengan perkembangan gaya hidup back to nature, bahan herbal semakin dibutuhkan keberadaannya dimasyarakat karena dianggap lebih aman (Adliani dkk, 2012), dan berkhasiat seperti pengobatan obat-obat sintetik (Moot dkk, 2013). Menurut Kusumawati dkk, (2016) salah satu tumbuhan yang dimanfaatkan sebagai tanaman obat tradisional adalah Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith yang merupakan salah satu jenis tanaman rempah-rempah asli indonesia yang termasuk dalam famili Zingiberaceae. Tanaman ini di pulau jawa dikenal dengan nama Kecombrang dan di Sulawesi tenggara dikenal dengan nama Wualae. Secara umum Etlingera elatior dimanfaatkan sebagai bahan makanan, selain sebagai bahan makanan Etlingera elatior banyak dimanfaatkan sebagai obat tradisional seperti obat demam, batuk, penyembuhan luka (Silalahi, 2016). Secara empiris buah Wualae telah dimanfaatkan oleh masyarakat di Kabupaten Kolaka Utara sebagai obat dalam pemulihan penyakit demam tifoid. Tanaman ini mengandung senyawa bioaktif seperti polifenol, alkaloid, flavonoid, saponin dan minyak atsiri

2

(Kusumawati dkk, 2016). Kandungan senyawa bioaktif yang diduga memiliki aktivitas sebagai antipiretik dan antiinflamasi yaitu flavonoid golongan kuersetin, yang bekerja dengan jalan menghambat biosintesis prostaglandin serta leukotrien, sehingga terjadi pemblokiran jalur siklooksigenase serta jalur lipoksigenase yang berefek pada penurunan inflamasi dan penurunan suhu tubuh (Putra dkk, 2015 ; Anggraeny dkk, 2016 ; Soemarie, 2016). Namun, belum ada pembuktian ilmiah bahwa buah Wualae memiliki aktivitas antipiretik dan antiinflamasi, sehingga peneliti tertarik melakukan penelitian untuk mengetahui efek antipiretik dan antiinflamasi ekstrak etanol buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith) terhadap mencit jantan galur Balb/c. B. Rumusan Masalah Berdasarkan uraian dalam latar belakang masalah di atas, masalah yang dikaji dalam penelitian ini adalah: 1. Kandungan metabolit sekunder apakah yang terdapat dalam ekstrak etanol buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) ? 2. Bagaimanakah efek antipiretik ekstrak etanol buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) terhadap mencit jantan galur Balb/c? 3. Bagaimanakah efek antiinflamasi ekstrak etanol buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) terhadap mencit jantan galur Balb/c?

3

C. Tujuan Penelitian Tujuan penelitian ini adalah: 1. Mengetahui kandungan metabolit sekunder yang terdapat dalam ekstrak etanol buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) 2. Mengetahui efek antipiretik ekstrak etanol buah Wualae (E. elatior (Jack) R.M.Smith) terhadap mencit jantan galur Balb/c. 3. Mengetahui efek antiinflamasi ekstrak etanol buah Wualae (E. elatior (Jack) R.M.Smith) terhadap mencit jantan galur Balb/c. D. Manfaat Penelitian Manfaat penelitian ini adalah : 1. Manfaat bagi peneliti, Menambah wawasan ilmu pengetahuan peneliti terutama dalam bidang farmakologi dan fitoterapi. 2. Manfaat bagi institusi, Sebagai salah satu sumber referensi mengenai efek antipiretik dan antiinflamasi ekstrak etanol buah Wualae (E. elatior (Jack) R.M.Smith.) terhadap mencit jantan galur Balb/c. 3. Manfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan, Sebagai salah satu sumbangan pemikiran mengenai adanya efek antipiretik dan antiinflamasi ekstrak etanol buah Wualae (E. elatior (Jack) R.M.Smith.) terhadap mencit jantan galur Balb/c. 4. Manfaat bagi masyarakat, Memberikan informasi ilmiah kepada masyarakat serta validasi terhadap tumbuhan Wualae (E. elatior (Jack) R.M Smith) sebagai pengobatan demam dan inflamasi.

4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA A. Tumbuhan Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M Smith) 1. Deskripsi Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) seperti jenis tanaman hias pisang-pisangan atau mirip sekali dengan tanaman lengkuas/laos. Jika batang sudah tua, bentuk tanamannya mirip jahe, dengan tinggi mencapai 5 m. Batangbatang semu bulat gilig, membesar di pangkalnya; tumbuh tegak, banyak, dan berdekat-dekatan. Rimpangnya tebal, kemerah-jambuan ketika masih muda. Daun 15-30 helai tersusun dalam dua baris, berseling, di batang semu, helaian daun lonjong, 20-90 cm x10-20 cm, dengan pangkal membulat, tepi bergelombang, dan ujung meruncing pendek (Angin dkk, 2015). Bunga berwarna merah, tumbuh diantara rumpun, tegak di atas batang yang panjangnya 0,8-2,2 menyerupai gada. Buah merupakan bagian bunga yang mengalami pendewasaan lebih lanjut, mirip nanas, berwarna merah muda. Wualae akan berbunga dan berbuah setelah berumur dua tahun (Kusumawati dkk, 2016).

(A)

(B)

Gambar 1. (A). Tumbuhan Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M Smith), (B). Buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M Smith) (Sumber : dokumentasi pribadi) 5

2. Klasifikasi Klasifikasi tumbuhan Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M Smith) adalah sebagai berikut (Angin dkk, 2015): Kingdom

: Plantae

Divisi

: Magnoliophyta

Kelas

: Liliopsida

Ordo

: Zingiberales

Famili

: Zingiberaceae

Genus

: Etlingera

Spesies

: Etlingera elatior (Jack) R.M Smith

3. Nama Daerah Wualae (Etlingera elatior) merupakan salah satu keluarga Zingiberacea yang asli Indonesia. Tanaman ini dikenal dengan berbagai nama antara lain “Wualae” di sulawesi tenggara, ”kencong” atau ”kincung” di Sumatra Utara, ”kecombrang” di Jawa, ”honje” di Sunda, ”bongkot” di Bali, ”sambuang” di Sumatra Barat dan ”bunga kantan” di Malaysia. Orang barat menyebut tanaman ini torch ginger atau torch lily karena bentuk bunganya yang mirip obor serta warnanya yang merah memukau. Beberapa orang juga menyebutnya dengan nama philippine waxflower atau porcelein rose mengacu pada keindahan bunganya (Sukandar dkk, 2010).

6

4. Kandungan kimia Bunga, batang, rimpang, dan daun Wualae mengandung senyawa bioaktif seperti polifenol, alkaloid, flavonoid, steroid, saponin dan minyak atsiri (Kusumawati dkk, 2016).

5. Aktivitas farmakologi Penelitian yang dilakukan oleh Silalahi (2016), Wualae (Etlingera elatior) banyak dimanfaatkan sebagai obat tradisional seperti obat demam, batuk, dan penyembuhan luka. Batang dari tanaman Wualae memiliki aktivitas sebagai analgetik dan antiinflamasi (Susilowati dkk, 2011). Bunga Wualae memiliki pengaruh terhadap penyembuhan luka (Sagala dkk, 2016), dan daun Wualae mengandung kadar fenolik yang tinggi, yang dapat digunakan sebagai antioksidan dan menghambat aktivitas tirosin (Angin dkk, 2015), serta daun Wualae memiliki Aktivitas antibakteri terhadap bakteri Bacillus cereus dan Escherichia coli (Kusumawati dkk, 2016). B. Metode Analisis Seyawa Bahan Alam 1. Metode Ekstraksi Ekstraksi adalah kegiatan penarikan senyawa kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair (Depkes RI, 2000). Ekstraksi mengikuti prinsip like dissolves like yang berarti bahwa senyawa polar akan mudah larut dalam pelarut polar, dan begitupun sebaliknya (Harborne, 1987). Secara teknis terdapat dua metode ekstraksi yaitu cara dingin dan cara panas. Metode ekstraksi yang termasuk kedalam ekstraksi cara dingin

7

adalah maserasi dan perkolasi, sedangkan yang termasuk ekstraksi cara panas yaitu refluks, soxhlet, digesti, infus, dan dekok (Depkes RI, 2000). Maserasi adalah proses penyarian simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokkan atau pengadukan pada temperatur ruangan (Depkes RI, 2000). Maserasi dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam pelarut, pelarut akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat-zat aktif sehingga zat aktif akan larut. Karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel, maka larutan yang pekat didesak keluar (Makalalag dkk, 2013). Keuntungan dari maserasi adalah pengerjaannya mudah dan peralatannya murah dan sederhana (Badan POM RI, 2013). Proses ekstraksi dapat melalui tahap : pembuatan serbuk, pemilihan cairan pelarut, pemekatan/penguapan, pengeringan ekstrak. Faktor utama pada pemilihan cairan pelarut yaitu selektivitas, ekonomis, ramah lingkungan, dan aman. Pada prinsipnya cairan pelarut harus memenuhi syarat kefarmasian atau dalam perdagangan dikenal dengan kelompok spesifikasi “pharmaceutical grade”. Hasil ekstraksi diperoleh ekstrak, ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair dibuat dengan menyari simplisia nabati atau hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa yang tersisa diperlakukan sedemikian rupa hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Depkes RI, 1995).

8

2. Skrining Fitokimia Senyawa metabolit sekunder merupakan senyawa bioaktif yang dapat digunakan dalam dunia pengobatan, sehingga untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder dilakukan uji skrining fitokimia (Makalalag dkk, 2015). Skrining

fitokimia

digunakan

untuk mendeteksi

senyawa

tumbuhan

berdasarkan golongannya (Yuda dkk, 2013). Pemeriksaan dilakukan pada senyawa metabolit sekunder yang memiliki khasiat bagi kesehatan seperti alkaloid, flavonoid, terpenoid, tanin dan saponin (Harborne, 1987). Skrining fitokimia secara kualitatif dilakukan dengan penambahan berbagai pereaksi tertentu ke dalam ekstrak tanaman sehingga menghasilkan warna larutan/endapan spesifik yang menandakan senyawa tertentu (Ginting dkk, 2012). 1) Alkaloid Alkaloid merupakan kelompok senyawa bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen, biasanya dalam gabungan sebagai bagian dari sistem siklik. Alkaloid kebanyakan berbentuk Kristal tetapi hanya sedikit yang berupa cairan pada suhu kamar. Banyak sekali alkaloid yang khas pada suatu suku tumbuhan, jadi nama alkaloid sering kali diturunkan dari sumber tumbuhan penghasilnya. Alkaloid sering bersifat racun bagi manusia dan banyak yang mempunyai kegiatan fisiologi yang menonjol, jadi digunakan secara luas dalam bidang pengobatan (Harborne, 1987). 2) Flavonoid Senyawa-senyawa flavonoid adalah senyawa-senyawa polifenol yang mempunyai 15 atom karbon, terdiri dari dua cincin benzen yang dihubungkan

9

menjadi satu oleh rantai linier yang terdiri dari tiga atom karbon (Djamal, 2012). Flavonoid umumnya terdapat dalam tumbuhan sebagai glikosida dan aglikon. Senyawa ini menghambat banyak reaksi oksidasi baik secara enzimatis maupun non enzimatis (Harborne, 1987). 3) Saponin Saponin adalah suatu glikosida yang larut dalam air dan mempunyai karakteristik dapat membentuk busa apabila dikocok. Berdasarkan strukturnya saponin akan memberikan reaksi warna yang karakteristik dengan pereaksi Liebermann-Buchard. Pengujian Senyawa ini secara sederhana dapat dilakukan dengan pengocokan, busa stabil setinggi satu sampai sepuluh sentimeter dalam sepuluh menit menandakan hasil positif dari senyawa saponin (Harborne, 1987). 4) Tanin Tanin terdapat luas dalam tanaman berpembuluh. Secara kimia terdapat dua jenis utama tanin yaitu tanin terkondensasi dan tanin terhidrolisis. Tanin dapat bereaksi dengan membentuk polimer yang tidak larut dalam air. Penentuan struktur kimia tanin masih sukar dilakukan karena kerumitan struktur belum dipahami sepenuhnya (Harborne, 1987). 5) Terpenoid Terpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari enam satuan isoprena dan secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon C-30 asiklik, yaitu skualena, senyawa ini tidak berwarna, berbentuk kristal, bertitik leleh tinggi dan bersifat optis aktif (Harborne, 1987).

10

C. Demam 1. Definisi Demam Demam pada umumnya suatu gejala dan bukan merupakan penyakit tersendiri,demam adalah suatu reaksi tangkis yang berguna dari tubuh terhadap infeksi. Demam terjadi saat suhu tubuh diatas normal, suhu tubuh meningkat melebihi suhu tubuh normal (36,5ºC-37,2ºC) (Setiati dkk, 2014). Pada suhu diatas 37ºC limfosit dan makrofag menjadi lebih aktif. Bila suhu melampaui 40-41ºC, barulah terjadi situasi kritis yang bisa menjadi fatal, karena tidak terkendalikan lagi oleh tubuh (Tjay dan Kirana, 2007). Demam terjadi akibat adanya infeksi atau peradangan sebagai respon masuknya mikroba, sel-sel fagositik tertentu (makrofag) mengeluarkan suatu bahan kimia yang dikenal sebagai pirogen endogen. Selain efek-efeknya dalam melawan infeksi, juga bekerja pada pusat termoregulasi hipotalamus untuk meningkatkan titik patokan (Set point) suhu dihipotalamus (Sherwood, 2014). Demam memiliki tiga fase klinis yaitu menggigil (chill), febris (fever) dan kemerahan (flush). Pada fase menggigil, temperatur inti tubuh naik menjangkau set point suhu baru dengan vasokonstriksi perifer untuk mengurangi pengeluaran panas dan peningkatan aktivitas otot (shivering) untuk meningkatkan produksi panas. Pada fase febris terjadi keseimbangan antara produksi dan kehilangan panas pada set point yang meningkat. Kulit teraba hangat, kemerahan, dan kering. Ketika set point kembali normal, hipotalamus akan menganggap bahwa suhu tubuh terlalu tinggi, sehingga tubuh mempersepsikan dirinya menjadi terlalu panas, sehingga mekanisme mengurangi panas dimulai melalui vasodilatasi

11

perifer dan berkeringat (diaphoresis) untuk mendinginkan tubuh (Corwin, 2009 ; Susanti dkk, 2012).

2. Tipe-tipe demam a. Demam septik: Tipe demam septik, suhu badan berangsur naik ke tingkat yang tinggi sekali pada malam hari dan turun kembali ke tingkat di atas normal pada pagi hari. Sering disertai keluhan menggigil dan berkeringat. Bila demam yang tinggi tersebut turun ke tingkat yang normal dinamakan juga demam hektik. b. Demam remiten: Tipe demam remiten, suhu badan dapat turun setiap hari tetapi tidak pernah mencapai suhu badan normal. Perbedaan suhu yang mungkin tercatat dapat mencapai dua derajat dan tidak sebesar perbedaan suhu yang dicatat pada demam septik. c. Demam intermiten: Tipe demam intermiten, suhu badan turun ke tingkat yang normal selama beberapa jam dalam satu hari. Bila demam seperti terjadi setiap dua hari sekali disebut tersiana dan bila terjadi dua hari bebas demam di antara dua serangan demam disebut kuartana. d. Demam kontinyu: Tipe demam kontinyu variasi suhu sepanjang hari tidak berbeda lebih dari satu derajat. Pada tingkat demam yang terus menerus tinggi sekali disebut hiperpereksia.

12

e. Demam siklik: Tipe demam siklik terjadi kenaikan suhu badan selama beberapa hari yang diikuti oleh periode bebas demam untuk beberapa hari yang kemudian diikuti lagi oleh kenaikan suhu seperti semula (Setiati dkk, 2014).

3. Mekanisme Demam Substansi yang menyebabkan demam disebut pirogen dan dapat berasal dari eksogen ataupun endogen. Pirogen eksogen adalah agen yang menimbul demam yang berasal dari eksternal. Sedangkan pirogen endogen yaitu zat yang menimbul demam yang dihasilkan oleh makrofag atau sel lainnya dalam respons terhadap infeksi atau terhadap peristiwa yang diinduksi imunitas yang dimediasi sel, termasuk interleukin-1 dan faktor nekrosis tumor. Demam timbul sebagai respon terhadap pembentukan sitokin, sitokin ini disebut pirogen endogen. Sumber utama pirogen endogen adalah fagosit mononuklear. Pirogen endogen menyebabkan demam dengan menghasilkan prostaglandin, yang meningkatkan titik patokan termoregulasi hipotalamu (Corwin, 2009). Sitokin pirogen dilepaskan oleh beberapa sel berbeda, termasuk monosit, makrofag, sel T helper dalam berespon terhadap infeksi atau cedera jaringan. Sitokin pirogen akan dialirkan oleh peredaran darah dari tempat terjadinya peradangan ke sistem saraf pusat. Sitokin pirogen akan berikatan dengan reseptor membran plasma. Sitokin ini yang memicu pelepasan asam arakidonat dari membran fosfolipid dengan bantuan enzim fosfolipase. Kemudian asam arakidonat selanjutnya dengan bantuan enzim siklooksigenase diubah menjadi prostaglandin. Adanya peningkatan prostaglandin terutama pada daerah preoptik 13

hipotalamus akan menyebabkan peningkatan suhu pada pusat termoregulasi di hipotalamus, sehingga tubuh akan mengikuti termostat untuk meningkatkan suhu sampai terjadi demam (Sherwood, 2014 ; Wiryawan dkk, 2015). Pirogen Endogen

Fagosit Mononuklear

Sitokin Pirogen

Berikatan dengan reseptor membran sel

Fosfolipid

Asam arakhidonat Enzim Lipooksigenase

Hidroperoksid

Enzim Siklooksigenase

Endoperoksid (PGG2/PGH)

Prostasiklin

Leukotrien Prostaglandin

Tromboksan Area Pre-optik Hypotalamus

Demam Gambar 2. Patofisiologi Demam (Wiryawan dkk, 2015)

14

D. Pengobatan Demam Antipiretik adalah obat yang menurunkan suhu tubuh yang tinggi. Suhu tubuh normal adalah 36,5-37,2ºC. Kebanyakan analgetik memberkan efek antipiretik, sebaliknya, antipiretik juga dapat mengurangi rasa sakit pada penderita. Setiap obat masing-masing memilkik efek yang dominan, misalnya parasetamol dan aspirin. Obat-obat tersebut efek antipiretiknya lebih besar dari pada analgetiknya. Antipiretik mencegah pembentukan prostaglandin dengan jalan menghambat enzim siklooksigenase. Hal ini mengakibatkan set point hipotalamus diatur kembali menjadi normal sehingga perintah memproduksi panas di atas normal dan pengurangan pengeluaran panas tidak ada lagi (Hastuti dkk, 2016). Obat analgesik-antipiretik yang biasa dipakai terdiri atas empat golongan yaitu

golongan

salisilat

(aspirin,

asetosal),

golongan

paraaminofenol

(parasetamol), golongan pirazolon (metamizol), dan golongan asam (asammefenamat). E. Parasetamol (Golongan paraaminofenol) Parasetamol atau asetaminofen merupakan derivat-asetanilidin metabolit dari fenasetin yang dahulu banyak digunakan sebagai analgetik (Tjay dan Kirana, 2007). Asetaminofen (parasetamol) mempunyai daya kerja analgesik, antipiretik, tidak mempunyai daya kerja anti radang dan tidak menyebabkan iritasi serta peradangan lambung. Hal ini disebabkan parasetamol bekerja pada tempat yang tidak terdapat peroksid sedangkan pada tempat inflamasi terdapat leukosit yang

15

melepaskan peroksid sehingga efek anti inflamasinya tidak bermakna (Setiabudy, 2009). OH

NHCOCH3

Gambar 3. Struktur Kimia Parasetamol (Ditjen POM, 1979)

Parasetamol bekerja dengan menekan efek dari pirogen endogen dengan jalan menghambat siklooksigenase sehingga konversi asam arakhidonat menjadi prostaglandin terganggu. Efek parasetamol langsung ke pusat pengaturan panas di hipotalamus sehingga terjadi vasodilatasi perifer, keluarnya keringat dan pembuangan panas (Moot dkk, 2013). Parasetamol menghambat siklooksigenase pusat lebih kuat dari pada aspirin, inilah yang menyebabkan parasetamol menjadi obat antipiretik yang kuat melalui efek pada pusat pengaturan panas (Setiabudy, 2009). Parasetamol tersedia sebagai obat tunggal, berbentuk tablet 500 mg. Parasetamol diabsorpsi cepat dan sempurna melalui saluran cerna. Konsentrasi tertinggi dalam plasma dicapai dalam waktu ½ jam dan masa paruh plasma antara 1-3 jam. Obat ini tersebar ke seluruh cairan tubuh. Dalam plasma, 25% parasetamol terikat dengan protein plasma. Obat ini dimetabolisme oleh enzim mikrosom hati (Setiabudy, 2009).

16

F. Vaksin DPT (difteri-tetanus-pertussis) Vaksin DPT (difteri-tetanus-pertussis) berperan menjadi pirogen eksogen, dengan adanya kuman yang masuk ke dalam tubuh maka termostat akan bereaksi meningkatkan suhu tubuh untuk melakukan pertahanan tubuh terhadap kuman (Wiryawan dkk, 2015). Keadaan demam dapat terjadi sebagai akibat pirogen terangkut ke dalam darah dan berkaitan dengan reseptor di dalam nukleus preoptik hypothalamic anterior, sehingga kadar prostaglandin meningkat dan mengakibatkan peningkatan hypothalamic set point (Styawan dan Hendra, 2015). Vaksin DPT (difteri-tetanus-pertussis) terdiri atas kuman difteri yang dilemahkan atau toksoid difteri (alamprecipitated toxoid), toksoid tetanus dan vaksin pertusis dengan menggunakan fraksi sel (seluler) yang berisi komponen spesifik dari Bordettella pertusis. Vaksin DPT (difteri-tetanus-pertussis) yang mengandung fraksi seluler Bordettella pertussis berperan sebagai pirogen eksogen terhadap tubuh sehingga terjadi mekanisme pembentukan antibodi terhadap kuman. Hal ini merangsang sitokin-sitokin yang bekerja sebagai mediator proses imun baik lokal maupun sistemik. Sitokin ini yang memicu pelepasan asam arakidonat dari membran fosfolipid dengan bantuan enzim fosfolipase. Kemudian asam arakidonat selanjutnya dengan bantuan enzim siklooksigenase diubah menjadi prostaglandin. Adanya peningkatan prostaglandin terutama pada daerah preoptik hipotalamus anterior akan menyebabkan peningkatan suhu pada pusat thermoregulasi di hipotalamus, sehingga tubuh akan mengikuti thermostat untuk meningkatkan suhu sampai terjadi demam (Wiryawan dkk, 2015).

17

G. Inflamasi 1. Definisi Inflamasi Inflamasi merupakan respon terhadap cedera jaringan akibat berbagai rangsangan yang merugikan (Hidayati dkk, 2008). Cedera jaringan terjadi, karena bakteri, bahan kimia, panas, atau fenomena lainnya, maka jaringan yang cedera itu akan melepaskan berbagai zat yang menimbulkan perubahan sekunder yang dramatis disekeliling jaringan yang tidak cedera, kompleks perubahan jaringan ini disebut peradangan (inflamasi) (Guyton dan Hall, 2007). Akan tetapi, peradangan sebenarnya merupakan fenomena yang menguntungkan dan defensif, yang menghasilkan netralisasi dan eliminasi agen penyerang, penghancuran jaringan nekrotik, dan terbentuknya keadaan yang diperlukan untuk perbaikan dan pemulihan (Price dan Wilson, 2005). Tubuh memiliki suatu sistem pertahanan untuk melawan bermacammacam agen yang infeksius dan toksik. Sistem ini terdiri atas leukosit darah (sel darah putih) dan sel-sel jaringan yang berasal dari leukosit. Leukosit merupakan unit sistem pertahanan tubuh yang penting. Leukosit sebagian dibentuk di sumsum tulang (granulosit dan monosit serta sedikit limfosit) dan sebagian lagi di jaringan limfe (limfosit dan sel-sel plasma). Setelah dibentuk, sel-sel ini diangkut dalam darah menuju ke berbagai bagian tubuh yang membutuhkannya. Sebagian besar sel darah putih diangkut secara khusus ke daerah yang terinfeksi dan mengalami peradangan serius, sehingga menyediakan pertahanan yang cepat dan kuat terhadap agen-agen infeksi (Guyton dan Hall, 2007).

18

Ada enam macam sel darah putih yang biasa ditemukan dalam darah. Keenam sel tersebut adalah netrofil polimorfonuklear, eosinofil polimorfonuklear, basofil polimorfonuklear, monosit, dan limfosit. Sel-sel ini bekerja bersama-sama melalui dua cara untuk mencegah penyakit ; (1) merusak bakteri atau virus yang menginvasi melalui proses fagositosis dan (2) dengan membentuk antibodi dan limfosit yang tersensitisasi, salah satu atau keduanya dapat menghancurkan atau membuat agen menjadi tidak aktif (Guyton dan Hall, 2007). Peradangan ditandai oleh (1) vasodilatasi pembuluh darah lokal yang mengakibatkan terjadinya aliran darah setempat yang berlebihan; (2) peningkatan permeabilitas kapiler, memungkinkan kebocoran cairan ke dalam ruang interstisial; (3) sering kali terjadi pembekuan cairan di dalam ruang interstisial yang disebabkan oleh fibrinogen dan protein lainnya yang bocor dari kapiler dalam jumlah besar; (4) migrasi sejumlah besar granulosit dan monosit ke dalam jaringan, dan (5) pembekakan sel jaringan. Beberapa dari sekian banyak produk jaringan yang menimbulkan reaksi ini adalah histamin, bradikinin, serotonin,dan prostaglandin (Guyton dan Hall, 2007). Inflamasi ditinjau dari waktu terjadinya, dibagi menjadi 2 yaitu, inflamasi akut adalah radang yang berlangsung relatif singkat dari beberapa menit sampai beberapa hari, dan ditandai dengan eksudasi cairan dan protein plasma terakumulasi leukosit neutrofilik yang menonjol. Inflamasi kronik adalah radang yang berlangsung lebih lama (berhari-hari sampai bertahun-tahun) dan ditandai proliferasi pembuluh darah dan pembentukan jaringan proliferasi (Kumar dkk, 2014).

19

2. Gejala Respon Inflamasi a. Kemerahan (Rubor) Rubor, atau kemerahan, biasanya merupakan hal pertama yang terlihat di daerah yang mengalami peradangan. Seiring dengan dimulainya reaksi peradangan, arteriol yang memasok daerah tersebut berdilatasi sehingga memungkinkan lebih banyak darah mengalir ke dalam mikrosirkulasi lokal. Kapiler-kapiler yang sebelumnya kosong, atau mungkin hanya sebagian meregang, secara cepat terisi penuh dengan darah. Keadaan ini, disebut hiperemia atau kongesti, menyebabkan kemerahan lokal pada peradangan akut. Tubuh mengontrol produksi hiperemia pada awal reaksi peradangan, baik secara neurologis maupun kimiawi melalui pelepasan zat-zat seperti histamin. b. Panas (Kalor) Kalor atau panas, terjadi bersamaan dengan kemerahan pada reaksi peradangan akut. Sebenarnya panas secara khas hanya merupakan reaksi peradangan yang terjadi pada permukaan tubuh, yang secara normal lebih dingin dari 37ºC yang merupakan suhu inti tubuh. Daerah peradangan di kulit menjadi lebih hangat dari sekelilingnya karena lebih banyak darah (pada suhu 37ºC) dialirkan dari dalam tubuh ke permukaan daerah yang terkena dibandingkan dengan ke daerah yang normal. Fenomena hangat lokal ini tidak tidak terlihat di daerah-daerah meradang yang terletak jauh di dalam tubuh, karena jaringanjaringan tersebut sudah memiliki suhu inti 37ºC dan hiperemia lokal tidak menimbulkan perbedaan.

20

c. Nyeri (Dolor) Dolor, atau nyeri, pada suatu reaksi peradangan tampaknya ditimbulkan dalam berbagai cara. Perubahan pH lokal atau konsentrasi lokal ion-ion tertentu dapat merangsang ujung-ujung saraf. Hal yang sama, pelepasan zat-zat kimia bioaktif lain dapat merangsang saraf. Selain itu, pembengkakan jaringan yang meradang menyebabkan peningkatan tekanan lokal yang tidak diragukan lagi dapat menimbulkan nyeri. d. Pembengkakan (Tumor) Aspek paling mencolok pada peradangan akut mungkin adalah tumor, atau pembengkakan lokal yang dihasilkan oleh cairan dan sel-sel yang berpindah dari aliran darah ke jaringan interstisial. Campuran cairan dan sel-sel ini yang tertimbun di daerah peradangan disebut eksudat. pada awal perjalanan reaksi peradangan, sebagian besar eksudat adalah cairan, seperti yang terlihat secara cepat di dalam lepuhan setelah luka bakar ringan pada kulit. Kemudian, sel-sel darah putih atau leukosit, meniggalkan aliran darah dan tertimbun sebagai bagian eksudat. e. Perubahan Fungsi (Fungsio Laesa) Gangguan fungsi yang diketahui merupakan konsekuensi dari suatu proses inflamasi. Gerakan yang terjadi pada daerah inflamasi, baik yang dilakukan secara sadar ataupun secara refleks akan mengalami hambatan oleh rasa sakit, pembengkakan yang hebat secara fisik mengakibatkan berkurangnya gerak jaringan (Price dan Wilson, 2005).

21

3. Mekanisme Inflamasi Fenomena inflamasi meliputi kerusakan mikrovaskular, meningkatnya permeabilitas kapiler dan migrasi leukosit ke jaringan radang. Selama berlangsungnya fenomena inflamasi banyak mediator kimiawi yang dilepaskan secara lokal antara lain histamin, serotonin, faktor kemotaktik, bradikinin, leukotrien dan prostaglandin (Setiabudy, 2009). Histamin terutama penting pada awal peradangan dan merupakan mediator utama, histamin yang mampu menghasilkan vasodilatasi dan peningkatan permeabilitas vaskular. Sejumlah besar histamin disimpan di dalam granula sel-sel jaringan ikat yang dikenal sebagai sel-sel mast, yang tersebar luas di dalam tubuh (histamin juga terdapat didalam basofil dan trombosit). Cedera fisik menyebabkan degranulasi sel mast dan pelepasan histamin (Price dan Wilson, 2005). Prostaglandin merupakan perantara peradangan, dihasilkan ketika membran sel mengalami kerusakan atau pecah dan dihasilkan dari asam arakidonat. Prostaglandin meningkatkan aliran ke tempat peradangan dan meningkatkan permeabilitas kapiler. Prostaglandin juga meningkatkan efek histamin yang menyebabkan demam ketika terjadi infeksi dan merangsang reseptor nyeri. Leukotrien merupakan produk hasil metabolisme asam arakidonat. Zat ini meningkatkan permeabilitas vaskular dan meningkatkan adhesi sel darah putih ke kapiler selama cedera atau infeksi (Corwin, 2009). Inflamasi dimulai dari stimulus yang akan mengakibatkan kerusakan sel, sebagai reaksi terhadap kerusakan sel maka sel tersebut akan melepaskan beberapa fosfolipid yang diantaranya adalah asam arakhidonat. Setelah asam arakidonat tersebut bebas akan diaktifkan oleh beberapa enzim, diantaranya

22

siklooksigenase dan lipoksigenase. Enzim tersebut merubah asam arakidonat ke dalam bentuk yang tidak stabil (hidroperoksid dan endoperoksid) yang selanjutnya dimetabolisme menjadi leukotrin, prostaglandin, prostasiklin, dan tromboksan. Bagian prostaglandin dan leukotrin bertanggung jawab terhadap gejala-gejala peradangan (Katzung, 2002). Trauma/luka pada sel Gangguan pada membran sel

Fosfolipid Enzim fosfolipase Asam Arakidonat Enzim siklooksigenase

Enzim lipoksigenase

Hidroperoksid

Leukotrien LTA

LTB4

Inflamasi

LTC4/LTD4/LTE4

- Vasokontriksi < - Meningkatkan hiperreaktivitas bronchi - Meningkatkan permeabilitas

Endoperoksid

Prostaglandin

Inflamasi

Tromboksan A2

- Vasokontriksi < - Hiperreaktivitas bronci < - Menstimulasi agregasi pelat darah (trombosit)

Prostasiklin

- Proteksi lambung - Meningkatkan vasodilatasi - antiagregasi

Gambar 4. Mekanisme inflamasi (Tjay dan Kirana, 2007)

23

H. Pengobatan Inflamasi Antiinflamasi merupakan obat yang bekerja melawan atau menekan proses peradangan (Dorland, 2011). Terdapat tiga mekanisme yang digunakan untuk menekan peradangan yaitu pertama penghambatan enzim siklooksigenase. Siklooksigenase mengkatalisa sintetis pembawa pesan kimia yang poten yang disebut prostaglandin, yang mengatur peradangan, suhu tubuh, analgesia, agregasi trombosit dan sejumlah proses lain. Mekanisme kedua untuk mengurangi peradangan melibatkan penghambatan fungsi-fungsi imun. Dalam proses peradangan, peran prostaglandin adalah untuk memanggil sistem imun. Infiltrasi jaringan lokal oleh sel imun dan pelepasan mediator kimia oleh sel-sel seperti itu menyebabkan gejala peradangan (panas, kemerahan, nyeri). Mekanisme ketiga untuk mengobati peradangan adalah mengantagonis efek kimia yang dilepaskan oleh sel-sel imun. Histamin, yang dilepaskan oleh sel mast dan basofil sebagai respon terhadap antigen, menyebabkan peradangan dan konstriksi bronkus dengan mengikat respon histamin pada sel-sel bronkus (Fridiana, 2012). Antiinflamasi bekerja mengikat enzim siklooksigenase dan lipoksigenase sehingga menghambat sintesis prostaglandin dan leukotrin. Hambatan tersebut antara lain menyebabkan stabilisasi sel meningkat, permeabilitas membran menurun (mengurangi udem), dan nyeri berkurang (Priyanto, 2008). Sampai beberapa tahun yang lalu, ada dua jalan untuk mengurangi peradangan secara farmakologi. Secara umum pengobatan inflamasi dibagi menjadi dua golongan besar, yaitu:

24

1. Antiinflamasi Non Steroid (AINS) Semua AINS bekerja mengikat enzim siklooksigenase (COX) yang berfungsi mengkonversi asam arakidonat menjadi prostaglandin, tromboksan dan prostasiklin

yang

akan

merangsang

timbulnya

tanda-tanda

inflamasi.

Prostaglandin disintesis dan dikeluarkan ketika dibutuhkan, Prostaglandin mempunyai waktu paru pendek sehingga efeknya cepat hilang. COX ada dua macam, yaitu COX1 dan COX2. COX 1 terdapat pada semua jaringan di lambung dan berfungsi melindungi mukosa. COX 2 terdapat di otak, ginjal, serta ditempat yang mengalami peradangan. AINS terbagi menjadi dua yaitu (Priyanto, 2008): a. AINS Non Selektif Non selektif berarti menghambat COX 1 dan COX 2 sehingga dapat menimbulkan iritasi lambung. Oleh karena itu, jika menggunakan obat golongan ini harus diminum setelah makan dan tidak digunakan pada orang yang menderita gastritis dan harus hati-hati pada lansia. b. AINS Selektif AINS selektif adalah yang hanya mengikat COX 2 sehingga tidak menimbulkan iritasi lambung (Priyanto, 2008).

25

AINS

AINS Non Selektif          

Aspirin Asam mefenamat Diklofenak Ibuprofen Ketoprofen Naproksen Indometasin Piroksikam dan Meloksikam Nabumeton Nimesulide

AINS Selektif  Generasi 1 : - Selekoksib - Refekoksib - Valdekoksib - Parekoksib - Eterikoksib  Generasi 2 : - lumirakoksib

Gambar 5. Klasifikasi obat Antiinflamasi Non Steroid (AINS)

2. Antiinflamasi steroid (Golongan Kortikosteroid) Antiinflamasi steroid golongan steroid bekerja dengan cara menghambat pelepasan prostaglandin melalui penghambatan metabolisme asam arakhidonat. Dalam klinik umumnya kortikosteroid dibedakan menjadi 2 golongan besar, yaitu glukokortikoid dan mineralokortikoid. Efek terapeutik glukokortikoid yang paling penting adalah kemampuannya untuk mengurangi respon peradangan secara dramatis. Efek ini didapat dari proses penurunan dan penghambatan limfosit serta makrofag secara tidak langsung yang menghambat pelepasan asam arakidonat, prekusor prostaglandin dan leukotrien (Fridiana, 2012). Kortikosteroid amat efektif tetapi sering kali mengakibatkan efek samping sehingga terapi perlu dihentikan dengan berangsur-angsur, kortikosteroid digunakan bila penyakit menjadi parah (exacerbatio), exaserbasi dapat diatasi dengan dosis rendah 26

prednison (serendah 10 mg) (Tjay dan Kirana, 2007). Obat-obat golongan kortikosteroid

yaitu

Metilprednisolon

Na

Prednison,

Metilprenidsolon,

suksinat,

Deksametason,

6-Metil

Prednisolon,

Deksametason

Asetat,

Deksametason Na-fosfat, Betametason, Betametason dipropionat, Betametason valerat, Triamsinolon, Triamsinolon asetonid, Triamsinolon diasetat, Parametason asetat, Flusinolon asetonid, Flumetason pivalat (Setiabudy, 2009). Setelah pemberian dosis tunggal glukokortikoid bekerja singkat dengan konsentrasi neutrofil meningkat yang menyebabkan pengurangan jumlah sel pada daerah peradangan (Fridiana, 2012). Dari kedua golongan antiinflamasi yang sering digunakan adalah AINS, karena golongan steroid dalam jangka panjang dapat menimbulkan efek samping (Priyanto, 2008). I. Natrium Diklofenak Diklofenak adalah suatu turunan asam fenilasetat yang merupakan inhibitor COX relatif non-selektif (Katzung, 2013). Termasuk kelompok preferential COX-2 inhibitor. Derivat-fenilasetat

ini

termasuk

AINS

(Anti

Inflamasi Non Steroid) yang terkuat daya anti radangnya dengan efek samping yang kurang kuat dibanding obat lainnya. Obat ini sering digunakan untuk segala macam nyeri (Tjay dan Kirana, 2007). CH2COOH

Cl

NH

Cl

Gambar 6. Struktur Kimia Natrium Diklofenak (Katzung, 2013). 27

Cara kerja AINS untuk sebagian besar berdasarkan hambatan sintesa prostagladin, dimana kedua jenis cyclooxygenase diblokir. AINS ideal hanya menghambat COX 2 (peradangan) dan tidak COX 1 (perlindungan mukosa lambung). Penghambatan COX 2 adalah AINS yang secara selektif menghambat enzim COX 2 serta prostaglandin. Enzim COX 1 tidak dihambat sehingga prostasiklin dengan efek protektif terhadap mukosa lambung tetap dibentuk. Karena itu, obat-obat ini yang dipasarkan sejak 1988 dianggap kurang toksik bagi lambung (Tjay dan Kirana, 2007). Absorpsi obat ini melalui saluran cerna berlangsung dengan cepat dan lengkap. Obat ini terikat 99% pada protein plasma dan mengalami efek metabolisme lintas pertama (first-pass) sebesar 40-50%, dan memiliki waktu paruh singkat yakni 1-3 jam (Setiabudy, 2009). J. Karagenan Karagenan merupakan polisakarida sulfat yang berasal dari tanaman Chondrus crispus. Karagenan merupakan suatu polisakarida sulfat bermolekul besar sebagai induktor inflamasi. Penggunaan karagenan sebagai penginduksi radang memiliki beberapa keuntungan antara lain tidak meninggalkan bekas, tidak menimbulkan kerusakan jaringan dan memberikan respon yang lebih peka terhadap obat antiinflamasi dibanding senyawa iritan lainnya (Fridiana, 2012), tidak bersifat antigenik dan tidak menimbulkan efek sistemik (Hidayati, 2008). Karagenan adalah polimer linear yang tersusun dari sekitar 25.000 turunan galaktosa yang strukturnya tergantung pada sumber dan kondisi ekstraksi. Karagenan dikelompokkan menjadi 3 kelompok utama yaitu kappa, iota, dan lambda karagenan. (1) Kappa karagenan berasal dari spesies Euchema cottonii, 28

Euchema striatum, Euchema speciosum. Bahan ini larut dalam air panas. Kappa karagenan mengekstraksi D-galaktosa yang mengandung 6 ester sulfat dan 3,6anhidro-D-galaktosa yang mengandung 2 ester sulfat. (2) Iota karagenan berasal dari Euchema spinosum, Euchema isiforme, dan Euchema uncinatum. Bahan ini larut dalam air dingin. Iota karagenan mengekstraksi D-galaktosa yang mengandung 4 ester sulfat dan 3,6-anhidro-D-galaktosa yang mengandung 2 ester sulfat. (3) Lambda karagenan berasal dari genus Chondrud

dan Gigartina.

Lambda karagenan larut dalam air dingin. Berbeda dengan kappa karagenan dan iota karagenan, lambda karagenan memiliki disulfat-D-Galaktosa (Lumbanraja, 2009). Lambda karagenan bila dibandingkan dengan karagenan yang lain memiliki kelebihan paling cepat menginduksi terjadinya inflamasi dan memiliki bentuk gel yang baik dan tidak keras (Rowe dkk, 2009). Edema buatan ditimbulkan dengan menginjeksikan karagenan 1% yang dilarutkan dalam larutan fisiologis, sebanyak 0,1 mL pada telapak kaki secara subplantar, pada dosis tersebut sudah dapat menimbulkan edema yang dapat teramati secara jelas (Hidayati, 2008). Edema didefinisikan sebagai cairan interstisial yang berlebihan. Edema dapat terlokalisir (seperti pada inflamasi setempat dan obstruksi) atau generalisata tertimbun dihampir semua jaringan tubuh (Price dan Wilson, 2005). Pada proses pembentukan edema, karagenan akan menginduksi cedera sel dengan dilepaskannya mediator yang mengawali proses inflamasi. Edema yang disebabkan oleh karagenan bisa bertahan selama 6 jam dan berangsur-angsur berkurang dalam waktu 24 jam. Edema yang terjadi akibat terlepasnya mediator

29

inflamasi seperti histamin, serotonin, bradikinin, prostaglandin. Setelah injeksi karagenan, terjadi respon yang menyebabkan edema yang terbagi dalam dua fase. Fase I berhubungan dengan pelepasan histamin dan serotonin. Antara fase I dan fase II, edema dipertahankan oleh bradikinin, fase II berhubungan dengan pelepasan prostaglandin (PG). Edema yang disebabkan oleh injeksi karagenan diperkuat oleh mediator inflamasi terutama Prostaglandin (PG), melalui peningkatan permeabilitas vaskuler. Jika permeabilitas kapiler meningkat akan mengakibatkan protein-protein plasma menuju ke jaringan yang luka sehingga terjadi edema (Sujono dkk, 2012). K. Mencit (Mus musculus L.) Mencit (Mus musculus L.) termasuk mamalia pengerat (rodensia), dan merupakan salah satu hewan percobaan yang sering digunakan dalam penelitian. Mencit dipilih sebagai hewan coba karena hewan ini yang cepat berkembang biak, relatif murah, mudah dipelihara dalam jumlah banyak, variasi genetiknya cukup besar serta sifat anatominya dan fisiologisnya terkarakteristik dengan baik (Akbar, 2010). Klasifikasi Mencit (Mus musculus L.) adalah sebagai berikut : (Akbar, 2010) Filum

: Chordata

Sub filum

: Vertebrata

Kelas

: Mammalia

Ordo

: Rodentia

Familia

: Muridae

Gambar 7. Mencit (Mus musculus L.) (Akbar, 2010).

30

Genus

: Mus

Species

: Mus musculus

Mencit (Mus musculus L.) memiliki ciri-ciri berupa bentuk tubuh kecil, berwarna putih, memiliki siklus estrus teratur yaitu 4-5 hari. Kondisi ruang untuk pemeliharaan mencit (Mus musculus L.) harus senantiasa bersih, kering dan jauh dari kebisingan. Suhu ruang pemeliharaan juga harus dijaga kisarannya antara 1819ºC serta kelembaban udara antara 30-70% (Akbar, 2010). Adapun karakteristik mencit meliputi (Kusumawanti dkk, 2004) : Berat badan

: Jantan 20-40 gram, Betina 18-35 gram

Lama hidup

: 1-3 tahun

Temperatur tubuh

: 36,5 ºC

Kebutuhan air

: add libitum

Kebutuhan makanan

: 4-5 (g/hari)

Puberitas

: 28-49 hari

Lama kebuntingan

: 17-21 hari

Mata membuka

: 12-13 hari

Tekanan darah

: Systolik : 133-160 mmHg Distolik : 102-110 mmHg

Frekuensi respirasi

: 163/menit

Glukosa

: 62,8-176 mg/dL

31

L. Kerangka Konsep

- Etlingera elatior banyak dimanfaatkan sebagai obat tradisional seperti obat demam, batuk, dan penyembuhan luka (Silalahi, 2016).

Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith)

Tanaman ini mengandung senyawa bioaktif polifenol, alkaloid, flavonoid, steroid, saponin dan minyak atsiri (Kusumawati dkk, 2016).

- Secara empiris buah Wualae telah dimanfaatkan oleh masyarakat di Kab. Kolaka Utara digunakan sebagai obat dalam pemulihan penyakit demam tifoid. Ekstrak buah Wualae

Skrining Fitokimia

Uji efek antipiretik dan antiinflamasi Metabolit Sekunder

Adanya penurunan suhu tubuh dan penurunan edema pada mencit

Keterangan: = variabel bebas

= variabel terikat

Gambar 8. Kerangka Konsep Penelitian

32

BAB III METODOLOGI PENELITIAN A. Waktu dan tempat penelitian Penelitian ini akan dilaksanakan pada bulan Mei - Oktober 2017 dan dilakukan di Laboratorium Penelitian Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo Kendari, Pusat Penelitian Biologi LIPI, Cibinong. B. Jenis penelitian Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental jenis pre post test only control group yang dilakukan di Laboratorium. C. Bahan penelitian Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu tanaman buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M Smith), Mencit jantan (Mus musculus L.), Natrium diklofenak (tablet), Parasetamol (tablet), Karagenan, Vaksin Difteri Pertusis Tetanus (DPT), Etanol 96%, Natrium Klorida 0,9% steril, natrium karboksimetil selulosa (Na-CMC), Kertas saring, aluminium foil, kapas, serta aquadest. D. Alat penelitian Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu penguap vakum/vacum rotary evaporator (Buchi®) R-210 Series, oven (Memmert®) UNE Series, water bath (Biocote®) SWB Series, desikator (Normax®) VHL Series, timbangan analitik (Vibra®) HTR Series, pencacah elektrik (Miyako®), kain hitam, gelas ukur (Pyrex®), gelas kimia (Pyrex®), pletysmometer modifikasi, kanula, spatula, 33

corong, pipet tetes, spidol, toples kaca, kandang hewan uji, spoit 1 ml (One Med®), termometer digital (TremoOne®), batang pengaduk, cawan porselin stopwatch, lumpang dan alu. E. Variabel Variabel dalam penelitian ini terbagi menjadi tiga yaitu variabel bebas variabel terikat, dan variabel terkendali 1. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah ekstrak buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith). 2. Variabel terikat dalam penelitian ini yaitu penurunan suhu tubuh dan penurunan edema pada mencit, serta kandungan metabolit sekunder ekstrak buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith). 3. Variabel terkendali dalam penelitian ini yaitu jenis kelamin mencit, berat badan, dan jenis makanan dan minuman. F. Definisi Operasional 1. Ekstrak etanol buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) adalah ekstrak yang diperoleh dari maserasi buah Wualae menggunakan pelarut etanol kemudian dipekatkan hingga diperoleh ekstrak kental buah Wualae. 2. Antipiretik adalah efek yang ditunjukkan dengan penurunan suhu rektal mencit jantan (Mus musculus L.) galur Balb/c yang diinduski dengan vaksin DPT. 3. Antiinflamasi adalah efek yang ditunjukkan dengan penurunan edema/ radang pada telapak kaki mencit jantan (Mus musculus L.) galur Balb/c sebagai hewan uji yang diinduksi dengan 1% Karagenan.

34

4. Mencit jantan adalah hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini dari Galur Balb/c. G. Prosedur penelitian 1. Pengambilan Sampel Sampel buah Wualae diambil di daerah Kelurahan Sambeani, Kecamatan Abuki, Kabupaten Konawe.

2. Determinasi Tanaman Bahan yang akan digunakan adalah buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith). Sebelum dilakukan penelitian terhadap tumbuhan, terlebih dahulu akan dideterminasi untuk mengidentifikasi jenis dan memastikan kebenaran simplisia. Determinasi dilakukan di laboratorium LIPI (Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia) Cibinong.

3. Penyiapan sampel Sampel buah Wualae diperoleh dari Kelurahan Sambeani, Kecamatan Abuki, Kabupaten Konawe. Sampel buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) dikumpulkan, dilakukan sortasi basah, pencucian, penirisan, perajangan,

pengeringan

dikeringkan

dibawah

sinar

matahari

ditutupi

menggunakan kain hitam, setelah kering dilakukan sortasi kering dan selanjutnya dihaluskan dengan pencacah elektrik menjadi serbuk simplisia.

35

4. Tahapan Ekstraksi Simplisia buah dimaserasi dengan etanol 96% selama 3 x 24 jam, kemudian disaring untuk mendapatkan filtrat dan residu. Filtrat yang diperoleh kemudian digabungkan dan dipekatkan menggunakan ratory vacum evaporator pada suhu tidak lebih dari 60ºC sehingga diperoleh ekstrak kental (Sharon dkk, 2013).

5. Skrining Fitokimia Skrining fitokimia dilakukan terhadap ekstrak kental yang telah diperoleh. Uji skrining fitokimia yang dilakukan meliputi uji alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, terpenoid (Djamal, 2012).

a. Identifikasi senyawa alkaloid Sebanyak 1 g ekstrak dimasukkan dalam tabung reaksi lalu dilarutkan dengan etanol. Kemudian diuji dengan perekasi Dragendorf. Hasil uji positif diperoleh bila terbentuk endapan coklat atau merah hingga jingga dengan pereaksi Dragendorf (Djamal, 2012). b. Identifikasi senyawa flavonoid Sebanyak 1 g ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian dilarutkan dengan etanol. Kemudian ditambahkan 0,5 ml HCL pekat dan beberapa butir logam magnesium. Terbentuk warna merah atau merah jingga menunjukkan adanya flavonoid (Djamal, 2012).

36

c. Identifikasi senyawa saponin Sebanyak 1 g ekstrak dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan air lalu dikocok vertikal selama 10 detik. Kemudian dibiarkan selama 10 detik. Pembentukan busa setinggi 1-10 cm yang stabil selama tidak kurang dari 10 menit, menunjukkan adanya saponin (Djamal, 2012).

d. Identifikasi senyawa tanin Sebanyak 1 g ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi lalu dilarutkan dengan etanol. Kemudian ditambahkan larutan FeCl3 1%. Golongan tanin positif bila terbentuk warna hijau ungu atau kehitaman (Djamal, 2012). e. Identifikasi senyawa terpenoid Uji terpenoid dilakukan dengan reaksi Lieberman-Buchard. Sebanyak 1 g ekstrak dilarutkan dengan etanol, kemudian ditambahkan 0,5 ml asam asetat anhidrat, selanjutnya ditambahkan 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung. Terbentuknya warna merah menunjukkan adanya terpenoid (Djamal, 2012).

6. Karakterisasi Ekstrak 1) Parameter nonspesifik ekstrak a. Penetapan kadar air (Depkes RI, 2000) Cawan porselen kosong dikeringkan di dalam tanur selama 30 menit pada suhu 500oC. Selanjutnya dimasukkan ke dalam desikator yang berisi gel silika pendingin selama 15 menit. Cawan porselen ditimbang hingga diperoleh berat konstan. Sebanyak 2 g ekstrak dimasukkan ke dalam cawan yang telah diketahui beratnya, kemudian dikeringkan dalam oven selama 6 jam dengan suhu 10037

102oC lalu ditimbang hingga berat konstan. Selanjutnya cawan porselen berisi sampel dimasukkan ke dalam desikator selama 15 menit atau hingga dingin, lalu ditimbang hingga diperoleh berat kostan. Apabila belum diperoleh berat yang konstan maka perlu dilakukan pengeringan kembali di dalam oven. Penentuan kadar air menggunakan perhitungan sebagai berikut: Kadar air ( %)=

A-B A

x100%………….Persamaan (1)

Keterangan : A = berat sampel awal (g) B = berat sampel setelah dikeringkan (g)

b. Penetapan kadar abu (Depkes RI, 2000) Cawan porselen kosong yang beratnya telah dikonstankan, sebanyak 0,5 g ekstrak dimasukkan dalam cawan, kemudian dipijarkan di dalam tanur pada suhu 900°C sampai menjadi abu, didinginkan dan ditimbang hingga diperoleh bobot yang tetap dan stabil. Kadar abu dihitung dengan rumus: Kadar abu (%)=

B-C A

x100%…….. Persamaan (2)

Keterangan: A = berat ekstrak sebelum diabukan (g) B = berat ekstrak ditambah cawan sesudah diabukan (g) C = berat cawan kosong (g)

38

2) Parameter spesifik ekstrak a. Penetapan kadar sari larut dalam air (Depkes RI, 2000) Sebanyak 5 g ekstrak dimasukkan ke dalam labu bersumbat, kemudian ditambahkan dengan 100 mL air-kloroform (dicampurkan 2,5 mL kloroform dengan air secukupnya hingga 100 mL, dikocok hingga larut) sambil dikocok berkali-kali selama 6 jam pertama kemudian dibiarkan selama 18 jam. Filtrat disaring, sebanyak 20 mL filtrat dimasukkan ke dalam cawan dangkal beralas datar yang telah ditara lalu diuapkan hingga kering, dan sisa penguapan dipanaskan pada suhu 105°C hingga bobot tetap. Kadar sari larut air dihitung terhadap bahan yang dikeringkan di udara. Kadar ekstrak yang larut dalam air (atas dasar cuplikan kering). Kadar sari larut air dihitung dengan rumus: Persen berat =

W1- W2 W

x 100% ………. Persamaan (3)

Keterangan : W1

= berat cawan dan isinya (g)

W2

= berat cawan kosong dalam (g)

W

= berat cuplikan kering untuk pengujian dalam (g)

b. Penetapan kadar sari larut dalam etanol (Depkes RI, 2000) Sebanyak 5 g ekstrak dimasukkan ke dalam labu bersumbat, kemudian ditambahkan dengan 100 mL etanol (96%) sambil dikocok berkali-kali selama 6 jam pertama dan didiamkan selama 18 jam. Filtrat disaring dengan cepat untuk menghindarkan penguapan etanol. Sebanyak 20 mL filtrat diuapkan hingga kering dalam cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara, sisa penguapan dipanaskan pada suhu 105°C hingga bobot tetap. Kadar sari larut etanol dihitung terhadap 39

bahan yang telah dikeringkan di udara. Kadar ekstrak yang larut dalam etanol (atas dasar cuplikan kering). Kadar sari larut etanol dihitung dengan rumus: Persen berat =

W1- W2 W

x 100% …… Persamaan (4)

Keterangan: W1

= berat cawan dan isinya (g)

W2

= berat cawan kosong dalam (g)

W

= berat cuplikan kering untuk pengujian (g)

7. Pembuatan Na-CMC 0,5 % Sebanyak 0,5 g Na.CMC ditimbang lalu dikembangkan dengan aquadest hangat (70°) secukupnya. Setelah mengembang, Na.CMC ditambahkan aquadest hingga 100 mL.

8. Penetapan Dosis Bahan Uji Dosis ekstrak etanol buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) sebagai antipiretik, dan antiinflamasi yaitu 100 mg/g BB, 200 mg/g BB, 300 mg/g BB, 400 mg/g BB.

9. Penyiapan Hewan Uji Mencit diaklimatisasi selama 1 minggu dalam kandang Laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo agar dapat menyesuaikan diri dengan lingkungan yang baru. Selama masa aklimatisasi, mencit diberikan makanan dan minuman yang seragam dan dilakukan pengamatan yang rutin terhadap keadaan umum serta penimbangan berat badan mencit. Mencit yang sakit dengan ciri-ciri bulu berdiri, kurang aktif, dan mata tidak jernih tidak diikut sertakan dalam 40

penelitian. Mencit diketahui dalam keadaan sehat berdasarkan pengamatan visual (bulu mencit sehat tampak bersih, halus ;bola mata tampak pink dan jernih; hidung dan mulut tidak mengeluarkan lendir; serta aktif) (Anfiandi, 2013). 10. Pengelompokkan Hewan Uji Hewan percobaan dikelompokkan secara acak menjadi 6 kelompok, masing-masing terdiri dari 4 ekor. Pengelompokkan dapat dilihat pada lampiran 5. 11. Pengujian Efek Antipiretik a) Pengelompokkan Hewan Uji Mencit dibagi menjadi 6 kelompok, tiap kelompok terdiri dari 4 ekor mencit. Pengelompokkan hewan uji dapat lihat pada tabel 1. Tabel 1. Pengelompokkan hewan uji antipiretik

Kelompok

Perlakuan

Kontrol negatif

diberikan Na.CMC 0,5%.

Kontrol positif

diberikan parasetamol 1.3 mg/KgBB

Kelompok uji dosis I

diberikan ekstrak etanol buah Wualae 100 mg/KgBB

Kelompok uji dosis II

diberikkan ekstrak etanol buah Wualae 200 mg/KgBB

Kelompok uji dosis III

diberikkan ekstrak etanol buah Wualae 300 mg/KgBB

Kelompok uji dosis IV

diberikan ekstrak etanol buah Wualae 400 mg/KgBB

b) Penentuan Dosis Parasetamol Dosis tablet parasetamol untuk dewasa adalah 500 mg (Tjay dan Kirana, 2007). Jadi dosis parasetamol yang diberikan pada mencit jantan dengan BB 22,4 g adalah 1.3 mg/KgBB dapat dilihat pada lampiran 6.

41

c) Pembuatan Suspensi Parasetamol Tablet parasetamol 500 mg ditimbang sebanyak 10 tablet, kemudian digerus dan ditimbang serbuk sebanyak 1.3 mg. Kemudian dimasukkan dalam mortir dan ditambahkan dengan suspensi Na.CMC 0,5 % sampai homogen dan dicukupkan volumenya hingga 10 ml.

d) Uji Efek Antipiretik a. Mencit ditimbang bobotnya dan dikelompokkan secara acak; ada enam kelompok mencit dengan jumlah mencit 4 ekor tiap kelompok. b. Mencit dipuasakan 18 jam sebelum pengujian, air minum tetap diberikan. c. Tiap-tiap mencit sebelum diberi perlakuan diukur suhu rektal sebelum disuntik vaksin dan 1 jam setelah disuntik vaksin DPT untuk mengetahui derajat peningkatan suhu tubuh setelah penyuntikan vaksin. d. Mencit disuntik vaksin DPT 0,5 cc secara intraperitoneal. e. satu jam setelah pemberian vaksin, masing-masing kelompok diberi perlakuan dengan cara oral. f. Pada kelompok kontrol negatif, setiap mencit diberi suspensi Na.CMC 0,5%. g. Pada kelompok kontrol positif, setiap mencit diberi suspensi obat Parasetamol dosis 1.3 mg/KgBB mencit h. Pada masing-masing kelompok uji diberikan suspensi bahan uji dalam Na.CMC 0,5% yang diatur sedemikian rupa sehingga sesuai dengan dosis yang diinginkan. i. Tiga puluh menit setelah perlakuan, suhu rektal diukur lagi sampai percobaan pada menit ke-180 dengan interval 30 menit. 42

12. Pengujian Efek Antiinflamasi a) Pengelompokkan Hewan Uji Mencit dibagi menjadi 6 kelompok, tiap kelompok terdiri dari 4 ekor mencit. Pengelompokkan hewan uji dapat dilihat pada tabel 2. Tabel 2. Pengelompokkan hewan uji antiinflamasi Kelompok Perlakuan Kontrol negatif

diberikan Na.CMC 0,5%.

Kontrol positif

diberikan Natrium diklofenak 0,13 mg/ KgBB

Kelompok uji dosis I

diberikan ekstrak etanol buah Wualae 100 mg/KgBB

Kelompok uji dosis II

diberikan ekstrak etanol buah Wualae 200 mg/KgBB

Kelompok uji dosis III

diberikan ekstrak etanol buah Wualae 300 mg/KgBB

Kelompok uji dosis IV

diberikkan ekstrak etanol buah Wualae 400 mg/KgBB

b) Penentuan Dosis Natrium Diklofenak Dosis Natrium Diklofenak untuk dewasa adalah 50 mg (Tjay dan Kirana, 2007). Jadi dosis Natrium Diklofenak yang diberikan pada mencit jantan dengan BB 23,92 g adalah 0.13 mg/KgBB dapat dilihat pada lampiran 6. c) Pembuatan suspensi Natrium Diklofenak Ditimbang sebanyak 0,13 mg serbuk natrium diklofenak kemudian digerus dengan penambahan suspensi Na.CMC 0,5% sampai homogen dan dicukupkan volumenya hingga 10 ml. d) Pembuatan Larutan Karagenan 1% Sebanyak 0,1 gram Karagenan ditimbang lalu dilarutkan dalam 10 ml larutan natrium klorida 0,9%.

43

e) Pengujian Efek Antiinflamasi dengan Metode Edema Buatan Pada Telapak Kaki Mencit a. Mencit ditimbang bobotnya dan dikelompokkan secara acak; ada enam kelompok mencit dengan jumlah mencit masing masing kelompok adalah 4 ekor. b. Mencit dipuasakan 18 jam sebelum pengujian, air minum tetap diberikan. c. Volume kaki setiap mencit yang akan diinduksi, diberi tanda pada mata kaki lalu diukur terlebih dahulu dengan cara mencelupkan kaki mencit ke dalam pletismometer hingga tanda batas. Pada setiap pengukuran, tinggi cairan pada alat dicatat sebelum dan sesudah pengukuran. d. Semua kelompok perlakuan diberikan perlakuan masing-masing secara oral 1 jam sebelum di injeksikan karagenan . e. Pada kelompok kontrol negatif, setiap mencit diberi suspensi Na.CMC 0,5%. f. Pada kelompok kontrol positif, setiap mencit diberi suspensi obat antiinflamasi natrium diklofenak dosis 0.13 mg/KgBB. g. Pada masing-masing kelompok uji diberikan suspensi bahan uji dalam Na.CMC 0,5% yang diatur sedemikian rupa sehingga sesuai dengan dosis yang diinginkan. h. Telapak mencit disuntik dengan larutan Karagenan 1% sebanyak 0,1 ml secara subplantar, sebelumnya kaki mencit dibersihkan dengan etanol 70%. i. Setelah 1 jam di induksi kaki mencit dicelupkan lagi ke dalam alat pletismometer hingga batas mata kaki lalu diukur pada jam ke-1, 2, 3, 4, 5 dan 6. j. Ukur volume edema telapak kaki masing-masing mencit.

44

k. Dihitung Persentase radang tiap waktu dan Efek antiinflamasi (persentase inhibisi edema), ditentukan dengan rumus sebagai berikut : % radang = Vt – Vo x 100% (Hidayati dkk, 2008) Vo % Inhibisi edema = a – b x 100% (Oktiwilianti dkk, 2015) a Keterangan: Vt = volume telapak kaki mencit pada waktu t Vo = volume telapak kaki mencit sebelum injeksi karagenan a

= persen radang rata-rata kelompok kontrol negatif

b

= persen radang rata-rata kelompok zat uji

45

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN A. Determinasi Tanaman Determinasi tanaman wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M Smith) dilakukan untuk memastikan kebenaran sampel yang digunakan dalam penelitian. Hal tersebut dilakukan dengan memperhatikan ciri-ciri morfologi yang ada dalam tanaman wualae dengan menggunakan petunjuk pustaka dibuktikan di Pusat Penelitian Biologi, LIPI Cibinong. Hasil determinasi dapat dilihat pada Lampiran 1. B. Penyiapan sampel Sampel buah wualae yang digunakan diperoleh dari Kelurahan Sambeani, Kecamatan Abuki, Kabupaten Konawe. Buah wualae yang dikumpulkan sebanyak 19,04 kg adalah buah yang masak yang ditandai dengan buah berwarna merah. Selanjutnya dilakukan sortasi basah untuk memisahkan kotoran-kotoran atau bahan-bahan asing lainnya dari tumbuhan sebelum pencucian dengan cara membuang bagian-bagian yang tidak perlu sebelum pengeringan, sehingga didapatkan herba yang layak untuk digunakan. Sampel buah Wualae dilakukan pencucian untuk menghilangkan tanah dan pengotor lainnya yang melekat pada buah Wualae. Selanjutnya dilakukan perajangan untuk mempermudah proses pengeringan, pengepakan dan penggilingan sampel, perajangan dapat dilakukan dengan menggunakan pisau. Sampel buah kemudian dilakukan Pengeringan bertujuan untuk mengurangi kadar air pada sampel dan dapat menghentikan

46

terjadinya proses enzimatik yang dapat merusak sampel sehingga akan menghasilkan mutu simplisia yang dapat disimpan lama. Pengeringan dilakukan dengan cara diangin-anginkan dan terhindar dari sinar matahari langsung dan dilapisi kain hitam karena sinar ultraviolet dari matahari dapat menimbulkan kerusakan pada kandungan kimia bahan yang dikeringkan dan juga memiliki sirkulasi udara yang baik sehingga mengoptimalkan proses pengeringan. Selanjutnya dilakukan sortasi kering untuk memisahkan benda-benda asing seperti bagian-bagian tanaman yang tidak diinginkan yang masih ada dan tertinggal pada simplisia kering (Wahyuni dkk, 2014). Sampel buah kemudian dihaluskan dengan menggunakan alat pencacah elektrik yaitu blender untuk merubah ukuran sampel menjadi lebih kecil dengan luas permukaan lebih besar hingga diperoleh serbuk simplisia sebanyak 1870 gram. C. Ekstraksi Ekstraksi yang dilakukan pada penelitian ini yaitu menggunakan metode maserasi. Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokkan atau pengadukan pada temperatur ruangan (kamar) (Depkes RI, 2000). Proses maserasi dilakukan selama 3x24 jam dengan pergantian pelarut tiap 24 jam bertujuan untuk memaksimalkan proses ekstraksi serta waktu tersebut dianggap sudah cukup efisien untuk berlangsungnya kontak antara sampel dan pelarut serta menghindari terjadinya penguapan. Hasil maserasi kemudian disaring untuk mendapatkan filtrat dan residu. Filtrat yang diperoleh kemudian digabungkan dan dipekatkan menggunakan ratory vacum evaporator pada suhu tidak lebih dari 60ºC sehingga diperoleh ekstrak kental 47

(Sharon dkk, 2013). Ekstrak kemudian dipekatkan menggunakan water bath pada suhu 60°C untuk menguapkan pelarut etanol sehingga terpisah dari ekstrak hingga diperoleh Diperoleh ekstrak kental sebanyak 96,2148 gram, dan ekstrak yang diperoleh kemudian dihitung rendamennya, nilai rendamen yang diperoleh 5,14%. Perhitungan rendamen ekstrak dapat dilihat pada Lampiran 3. D. Skrining fitokimia Skrining fitokimia dilakukan untuk mendeteksi senyawa yang terkandung dalam tanaman berdasarkan golongannya (Yuda dkk, 2013). Pemeriksaan dilakukan pada senyawa metabolit sekunder yang memiliki khasiat bagi kesehatan seperti alkaloid, flavonoid, terpenoid, tanin dan saponin. Senyawa-senyawa dapat diidentifikasi dengan pereaksi-pereaksi yang mampu memberikan ciri khas dari setiap golongan dari metabolit sekunder (Harborne, 1987). Komponen yang terdapat dalam ekstrak buah wualae dianalisis golongan senyawanya dengan tes uji tabung, dilakukan dengan penambahan berbagai pereaksi tertentu ke dalam ekstrak tanaman sehingga menghasilkan warna larutan/endapan spesifik yang menandakan senyawa tertentu (Ginting dkk, 2012). Hasil skrining fitokimia buah wualae disajikan pada Tabel 3.

48

Tabel 3. Hasil skrining fitokimia Uji Fitokimia Alkaloid

Pereaksi

Hasil

Kesimpulan

Dragendorf

Terbentuk endapan

Positif

Gambar

coklat (Djamal, 2012)

Flavonoid

Mg + HCl

Terbentuk warna merah

Pekat

atau merah jingga

Positif

(Djamal, 2012)

Saponin

Air

Tidak terbentuk busa

Negatif

(Djamal, 2012)

Tanin

FeCl3

Berwarna hijau

Positif

kehitaman (Djamal, 2012)

Terpenoid

Liebermann-

Terbentuk warna coklat

buchard

(Djamal, 2012)

Positif

1. Alkaloid Identifikasi alkaloid menggunakan uji Dragendorff ditandai dengan terbentuknya endapan coklat muda sampai kuning. Endapan tersebut adalah kalium alkaloid. Pada pembuatan pereaksi Dragendorff, bismuth nitrat dilarutkan dalam HCl agar tidak terjadi reaksi hidrolisis karena garam-garam bismuth mudah terhidrolisis membentuk ion bismutil (BiO+) yang reaksinya ditunjukkan pada Gambar 9.

49

Bi3+ + H2O

BiO+ + 2H+

Gambar 9. Reaksi hidrolisis bismut

Agar Bi3+ tetap berada dalam larutan, maka larutan itu ditambah asam sehingga kesetimbangan akan bergeser ke arah kiri. Selanjutnya, ion Bi3+ dari bismut nitrat bereaksi dengan kalium iodida membentuk endapan hitam Bismut (III) iodida yang kemudian melarut dalam kalium iodida berlebih membentuk kalium tetraiodobismutat (Svehla, 1985). Pada uji alkaloid dengan Dragendorff, nitrogen digunakan untuk membentuk ikatan kovalen koordinat dengan K+ yang merupakan ion logam. Reaksi pada Uji Dragendorff ditunjukkan pada Gambar 10. Bi (NO3)3 + 3KI

BiI3 + KI

BiI3 + 3KNO3 coklat K [BiI4] Kalium tetraiodobismutat + [BiI4]-

+ K[BiI4] N

N K+

Oranye

Kalium-Alkaloid endapan

Gambar 10. Reaksi uji Dragendorff (Ergina dkk, 2014)

2. Flavonoid Identifikasi flavonoid dilakukan menggunakan uji Wilstater cyanidin menunjukkan hasil positif flavonoid dengan terbentuknya warna jingga pada ekstrak. Penambahan Magnesium dan asam klorida menimbulkan reaksi membentuk gelembung-gelembung yang merupakan gas H2, dan penambahan 50

logam Mg dan HCL pekat bertujuan untuk mereduksi inti benzopiron yang terdapat dalam struktur flavonoid sehingga terbentuk garam flavilium berwarna merah atau jingga (Ergina dkk, 2014) 3. Saponin Identifikasi adanya saponin menggunakan metode Forth. Timbulnya buih pada uji Forth menunjukkan adanya glikosida dalam ekstrak tersebut yang mempunyai kemampuan membentuk buih dalam air yang terhidrolisis menjadi glukosa dan senyawa lainnya. Uji saponin menunjukkan hasil positif dimana setelah dikocok dan didiamkan ada busa yang stabil/bertahan selama 2-4 menit (Nafisah dkk, 2014). Dari hasil uji tidak ditemukan adanya senyawa saponin pada ekstrak. 4. Tanin Identifikasi tanin dilakukan dengan penambahan pereaksi besi (III) klorida. Hasil pada uji ini, diperoleh hasil yaitu larutan berwarna hijau kehitaman. Terbentuknya warna hijau kehitaman setelah ditambahkan dengan FeCl3 dikarenakan senyawa fenol yang terkandung akan membentuk senyawa kompleks dengan ion Fe3+ (Harborne, 1987). 5. Terpenoid Identifikasi terpenoid menggunakan uji Lieberman-Buchard (asetat anhidrida-H2SO4 pekat). Identifikasi terpenoid memberikan hasil positif yaitu terbentuknya cincin coklat pada batas larutan saat ditambahkan dengan H2SO4. Perubahan tersebut dikarenakan terjadinya oksidasi pada golongan senyawa terpenoid melalui pembentukan ikatan rangkap terkonjugasi (Siadi, 2012).

51

E. Karakterisasi Ekstrak Karakterisasi ekstrak etanol buah wualae (E. elatior) dilakukan sebagai upaya untuk menjamin bahwa ekstrak mempunyai nilai parameter tertentu yang konstan dan ditetapkan (dirancang dalam formula) terlebih dahulu (Depkes RI, 2000). Karakterisasi yang dilakukan dalam penelitian ini meliputi parameter spesifik ekstrak dengan pemeriksaan organoleptik, penentuan kadar sari larut air dan sari larut etanol, dan parameter non spesifik yang meliputi penentuan kadar air dan kadar abu. Hasil karakterisasi dapat dilihat pada Tabel 4. Tabel 4: Karakterisasi ekstrak Jenis karakterisasi

Hasil

Organoleptis Bentuk

Kental

Warna

Merah tua

Bau

Khas

Kadar air

5,26%

Kadar abu

6,28%

Kadar sari larut etanol

61,07%

Kadar sari larut air

41,65%

Pada pemeriksaan organoleptik ekstrak yang meliputi bentuk, warna, rasa dan bau diperoleh hasil ekstrak yaitu berkonsistensi kental, berwarna merah tua dan berbau khas. Penentuan parameter organoleptik ekstrak ini bertujuan untuk memberikan pengenalan awal ekstrak secara objektif dan sederhana yang dilakukan dengan menggunakan panca indera (Angelina dkk, 2015).

52

Penetapan kadar air ekstrak dilakukan untuk memberikan rentang tentang besarnya kandungan air didalam sampel dengan nilai <10%. Dengan tujuan untuk menghasilkan mutu simplisia yang dapat disimpan lama, dan mencegah rusaknya sampel. Tabel. 4 menunjukkan bahwa kadar air dalam ekstrak sebesar 5,26%. Hasil ini telah sesuai dengan persyaratan kadar air untuk ekstrak kental yaitu < 10%. Apabila kadar air lebih besar dari 10% akan menyebabkan terjadinya proses enzimatik dan kerusakan oleh mikroba (Depkes RI, 2000 ; Wahyuni dkk, 2014). Penentuan kadar abu bertujuan untuk memberikan gambaran kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya ekstrak, dengan kadar tidak lebih dari 7%. (Depkes RI, 2000). Kadar abu ekstrak buah wualae adalah 6,28% yang menunjukkan bahwa ekstrak tidak tercemar logam-logam. Penetapan kadar sari larut air bertujuan untuk mengetahui kemampuan kelarutan ekstrak dalam air, sedangkan uji kadar sari etanol bertujuan untuk mengetahui kemampuan kelarutan ekstrak dalam etanol (Depkes RI, 2000). Pada tabel 4 menunjukkan bahwa ekstrak etanol buah wualae lebih larut dalam etanol daripada dalam air. Kadar senyawa yang larut dalam air dan dalam etanol adalah masing-masing sebesar 41,65% dan 61,07%. Tingginya kadar sari larut etanol berhubungan dengan sifat etanol sebagai pelarut semipolar sehingga dapat menarik senyawa polar maupun non polar dalam ekstrak

53

F. Pengujian Antipiretik Pengujian antipiretik dilakukan untuk mengetahui efek antipiretik ekstrak etanol buah wualae dengan empat variasi dosis yaitu dosis 100 mg/KgBB, dosis 200 mg/KgBB, dosis 300 mg/KgBB, dan dosis 400 mg/KgBB. Variasi dosis ini bertujuan untuk mengetahui efek dosis ekstrak buah wualae. Pada penelitian ini digunakan parasetamol sebagai kontrol positif, karena Parasetamol merupakan obat dengan efek antipiretik yang kuat (Setiabudy, 2009), dan digunakan Na.CMC (Sodium Carboxyl Methyl Cellulose) sebagai kontrol negatif (Hidayati, 2008). Na.CMC digunakan dalam penelitian ini untuk melarutkan sediaan uji dan sediaan kontrol, karena dapat menghasilkan suspensi yang stabil, kejernihannya tinggi dan bersifat inert sehingga tidak mempengaruhi zat berkhasiat (Susanty dkk, 2014). Pada penelitian ini digunakan mencit sebagai hewan percobaan, hal ini berdasarkan pertimbangan susunan anatomi fisiologi mencit memiliki kemiripan dengan manusia, mudah ditangani, mudah didapat, mudah dalam pemeliharaan, dapat beradaptasi dengan baik dan harganya pun relatif lebih murah (Susanty dkk, 2014). Pada penelitian ini digunakan hewan dengan jenis kelamin mencit jantan, pemilihan jenis kelamin jantan lebih didasarkan pada hormon esterogen pada mencit, dimana mencit jantan memiliki hormon esterogen yang sedikit dibandingkan mencit betina, sehingga kondisi hormonal pada mencit jantan relatif stabil jika dibandingkan dengan betina, karena pada mencit betina mengalami perubahan hormonal pada masa-masa tertentu seperti pada masa siklus estrus, masa kehamilan dan menyusui, dimana kondisi tersebut dapat mempengaruhi kondisi psikologis hewan uji tersebut dan tingkat stress mencit bentina lebih

54

tinggi dibandingkan dengan mencit jantan yang mungkin dapat mengganggu saat proses pengujian (Suhendi dkk, 2011). Setiap mencit dalam kelompok perlakuan kemudian dipuasakan selama kurang lebih 12 jam dan hanya diberi minum sebelum perlakuan, hal ini dimaksudkan untuk menghindari kemungkinan adanya pengaruh makanan terhadap larutan uji/ekstrak yang akan diberikan secara oral (Susanty dkk, 2014). Efek demam dirangsang dengan pemberian Vaksin DPT (difteri-tetanuspertussis) mengandung fraksi seluler Bordettella pertussis berperan sebagai pirogen eksogen terhadap tubuh sehingga terjadi mekanisme pembentukan antibodi terhadap kuman, dengan adanya kuman yang masuk ke dalam tubuh maka termostat akan bereaksi meningkatkan suhu tubuh untuk melakukan pertahanan tubuh terhadap kuman (Wiryawan dkk, 2015). Keadaan demam dapat terjadi sebagai akibat pirogen terangkut ke dalam darah dan berkaitan dengan reseptor di dalam nukleus preoptik hypothalamic anterior, sehingga kadar prostaglandin meningkat dan mengakibatkan peningkatan hypothalamic set point (Styawan dan Hendra, 2015). Berdasarkan kontrol positif yang digunakan dalam penelitian ini yaitu Parasetamol, dimana parasetamol diabsorpsi cepat dan sempurna melalui saluran cerna dengan konsentrasi tertinggi dalam plasma dicapai pada waktu ½ jam (30 menit) dan masa paruh plasma antara 1-3 jam (Setiabudy, 2009). Inilah yang menjadi alasan dilakukannya pengamatan setiap 30 menit selama 3 jam pada penelitian.

55

Hasil pengujian antipiretik ekstrak etanol buah wualae dapat dilihat pada Gambar 11:

Suhu

Grafik rata-rata penurunan suhu rektal mencit pada beberapa titik waktu 38 37.5 37 36.5 36 35.5 35 34.5 34

100 mg/KgBB 200 mg/KgBB 300 mg/KgBB 400 mg/KgBB K+ PCT K- Na CMC

Waktu (menit)

Gambar 11. Grafik Rata-Rata penurunan Suhu Rektal Mencit pada Beberapa Titik waktu

Berdasarkan grafik dapat dilihat bahwa pada kontrol negatif yaitu Na.CMC tidak mengalami penurunan suhu yang signifikan. Hal ini disebabkan karena Na.CMC tidak mengandung senyawa kimia yang berperan sebagai antipiretik, sedangkan pada ekstrak etanol buah wualae memiliki efek antipiretik yang sama dengan kontrol positif parasetamol yang ditunjukkan dengan penurunan suhu rektal mencit mulai menit ke 30 setelah induksi vaksin. Kemampuan antipiretik ekstrak etanol buah wualae karena adanya kandungan flavonoid. Flavonoid merupakan golongan terbesar dari senyawa fenol (Moot dkk, 2013). Flavonoid bekerja sebagai inhibitor cyclooxygenase (COX), sehingga terjadi penghambatan biosintesis prostaglandin yang berefek pada penurunan suhu tubuh (Kalay dkk, 2014). Adapun rata-rata besar penurunan suhu ekstrak etanol buah wualae terhadap mencit selama 3 jam dapat dilihat pada Gambar 12.

56

Besar Penurunan rata-rata suhu

1.4 1.2 K- Na CMC K+ PCT 100 mg/KgBB 200 mg/KgBB 300 mg/KgBB 400 mg/KgBB

1 0.8 0.6 0.4 0.2 0

Kelompok Perlakuan Gambar 12. Grafik Rata-rata besar penurunan suhu Ekstrak Etanol Buah wualae terhadap Mencit

Berdasarkan grafik dapat dilihat bahwa besar penurunan suhu pada setiap kelompok yaitu kontrol negatif Na.CMC sebesar 0.175oC, kontrol positif parasetamol sebesar 1.191oC, Dosis 100 mg/KgBB sebesar 0.8oC, Dosis 200 mg/KgBB sebesar 0.912oC, Dosis 300 mg/KgBB sebesar 1.058oC, dan Dosis 400 mg/KgBB sebesar 1.237 oC. Dosis 100 mg/KgBB, Dosis 200 mg/KgBB dan Dosis 300 mg/KgBB memiliki efek antipiretik namun tidak lebih baik daripada Dosis 400 mg/KgBB dan kontrol positif parasetamol. Berdasarkan penelitian, ekstrak etanol buah wualae dosis 400 mg/KgBB memiliki efek antipiretik yang lebih besar daripada Parasetamol 500 mg. Hal ini dapat dilihat bahwa efek antipiretik semakin meningkat seiring dengan peningkatan dosis sediaan. Dosis 100 mg/KgBB, Dosis 200 mg/KgBB dan Dosis 300 mg/KgBB memiliki efek yang lebih rendah, hal ini dapat disebabkan karena konsentrasi ekstraknya yang lebih kecil, sehingga jumlah flavonoid yang terkandung lebih sedikit menyebabkan jumlah metabolit sekunder yang terabsorbsi ke dalam darah juga kecil. 57

Data hasil penurunan suhu kemudian dianalisis menggunakan program SPSS (Statistical Product and Service Solution) metode analisis non parametrik Kruskal Wallis. Analisis ini dilakukan terhadap hasil penurunan suhu rata-rata mencit. Analisis variasi terhadap penurunan suhu rata-rata mencit digunakan untuk melihat ada perbedaan yang signifikan antar kelompok perlakuan secara keseluruhan pada ekstrak etanol buah wualae dosis 100 mg/KgBB, 200 mg/KgBB, 300 mg/KgBB, dan 400 mg/KgBB terhadap Na.CMC sebagai kontrol negatif dan Parasetamol 500 mg sebagai kontrol positif. Data hasil analisis dapat dilihat pada Lampiran 9. Analisis data Kruskal Wallis pada data penurunan suhu rata-rata mencit menunjukkan nilai probabilitas (p) < 0,05, maka hipotesis nol (H0) ditolak dan hipotesis alternatif (H1) diterima, yang berarti bahwa terdapat perbedaan signifikan efek antipiretik pada keseluruhan data pada tiap kelompok, dari kelompok perlakuan dan kelompok kontrol. Uji Mann Whitney dilakukan sebagai uji lanjutan dari uji Kruskal Wallis pada penurunan suhu rata-rata mencit. Tujuan uji Mann Whitney untuk melihat apakah terdapat perbedaan efek yang signifikan dari masing-masing kelompok perlakuan dengan kelompok perlakuan lainnya. Data uji Mann Whitney pada data penurunan suhu rata-rata mencit menunjukkan dosis 100 mg/KgBB, 200 mg/KgBB, 300 mg/KgBB, 400 mg/KgBB dan kontrol positif memiliki perbedaan signifikan dengan kontrol negatif, namun tidak memiliki perbedaan yang signifikan dengan kelompok lain. Sedangkan pada

58

kontrol negatif memiliki perbedaan yang signifikan dengan kelompok perlakuan dan kontrol positif. G. Pengujian Antiinflamasi Pengujian aktivitas antiinflamasi dilakukan untuk mengetahui efek antiinflamasi ekstrak etanol buah wualae dengan empat variasi dosis yaitu dosis 100 mg/KgBB, dosis 200 mg/KgBB, dosis 300 mg/KgBB, dan dosis 400 mg/KgBB. Pada penelitian ini digunakan natrium diklofenak sebagai kontrol positif karena natrium diklofenak memiliki efek anti radang yang kuat dengan efek samping yang lebih rendah dibandingkan obat lainnya (Tjay dan Kirana, 2007). Seperti indometasin, naproxen dan piroxicam (Goodman dan Gilman, 2008), dan digunakan Na.CMC (Sodium Carboxyl Methyl Cellulose) sebagai kontrol negatif (Hidayati, 2008). Uji efek antiinflamasi dilakukan dengan menginduksi kaki mencit dengan menggunakan larutan karagenan. Penggunaan karagenan sebagai penginduksi radang memiliki keuntungan antara lain tidak meninggalkan bekas, tidak menimbulkan kerusakan jaringan dan memberikan respon yang lebih peka terhadap obat antiinflamasi dibanding senyawa iritan lainnya (Fridiana, 2012), tidak bersifat antigenik dan tidak menimbulkan efek sistemik (Hidayati, 2008). Pada penelitian ini, sebelum penginduksian karagenan, volume kaki kiri belakang setiap mencit diberi tanda pada mata kaki lalu diukur terlebih dahulu volume kaki mencit (Vo) dengan alat pletysmometer modifikasi. Pletysmometer memiliki prinsip pengukuran berdasarkan hukum archimedes, yang menyatakan bahwa apabila benda dimasukkan kedalam zat cair, maka akan menimbulkan gaya 59

atau tekanan ke atas (Sukmawati dkk, 2015). Penginduksian karagenan pada kaki mencit secara subplantar menyebabkan kaki mencit mengalami peradangan. Hal ini dapat dilihat dengan pertambahan volume kaki mencit. Peradangan yang terjadi pada kaki mencit terlihat dengan timbulnya ciri-ciri terjadinya peradangan atau inflamasi seperti pembengkakan dan kemerahan. Analisis dilakukan terhadap hasil perubahan volume kaki mencit dimulai menit ke-60 hingga menit ke-360 selama 6 jam setelah penyuntikan karagenan dan pemberian larutan uji. Menurut Sujono dkk (2012), setelah dilepaskannya mediator yang mengawali proses inflamasi. Edema yang disebabkan oleh karagenan bisa bertahan selama 6 jam dan berangsur-angsur berkurang dalam waktu 24 jam. Perubahan volume telapak kaki mencit diukur dengan pletysmometer modifikasi. Hasil perubahan volume kaki mencit digunakan untuk menghitung persen radang pada kaki mencit. Selanjutnya dibuat grafik perubahan rata-rata persen inflamasi dan grafik perubahan rata-rata persen hambat radang. Hasil pengujian

persen udem

antiinflamasi ekstrak etanol buah wualae dapat dilihat pada Gambar 13.

120 100 80 60 40 20 0

Grafik rata-rata penurunan persen udem mencit pada beberapa titik waktu 100 mg/KgBB 200 mg/KgBB 300 mg/KgBB 400 mg/KgBB Kontrol + Na.Diklofenak Kontrol - Na.CMC

60

120

180

240

300

360

Waktu

Gambar 13. Grafik rata-rata penurunan persen udem mencit pada beberapa titik waktu

60

Berdasarkan grafik dapat dilihat bahwa pada kontrol negatif yaitu Na.CMC tidak mengalami penurunan persen udem yang signifikan. Hal ini disebabkan karena Na.CMC tidak mengandung senyawa kimia yang berperan sebagai antiinflamasi, sedangkan pada esktrak etanol buah wualae kelompok dosis 100 mg/KgBB, dosis 200 mg/KgBB, dosis 300 mg/KgBB, dosis 400 mg/KgBB memiliki efek antiinflamasi yang sama dengan kontrol positif Natrium diklofenak yang ditujukkan dengan penurunan persen udem. Hal ini menunjukkan bahwa bahan uji mampu menekan radang yang disebabkan oleh karagenan. Ekstrak etanol buah wualae memiliki efek antiinflamasi, hal ini disebabkan oleh aktivitas farmakologi kandungan metabolit sekunder pada buah wualae yaitu flavonoid. Flavonoid merupakan golongan terbesar dari senyawa fenol (Moot dkk, 2013). Flavonoid bekerja sebagai inhibitor cyclooxygenase (COX), sehingga terjadi penghambatan biosintesis prostaglandin yang berefek pada penurunan inflamasi (Kalay dkk, 2014). Selanjutnya, dihitung persen hambat radang atau kemampuan

Besar Persen hambat Radang

daya antiinflamasi dari setiap kelompok dapat dilihat pada Gambar 14:

80 70 60

Kontrol + Na.Diklofenak 100 mg/KgBB 200 mg/KgBB 300 mg/KgBB 400 mg/KgBB

50 40

30 20 10 0

Kelompok Perlakuan

Gambar 14. Grafik Rata-rata persen hambat radang ekstrak etanol buah wualae 61

Berdasarkan gambar grafik hasil persen hambat radang, dapat dilihat bahwa kemampuan penghambatan terbesar ditunjukan oleh kelompok dosis 400 mg/KgBB yaitu sebesar 69,3%, sedangkan dosis 100 mg/KgBB sebesar 52,28%, dosis 200 mg/KgBB sebesar 67,63%, dosis 300 mg/KgBB sebesar 68,21% dan kontrol positif natrium diklofenak yaitu sebesar 68,75. Kemampuan Dosis 400 mg/KgBB menghambat inflamasi lebih besar daripada kontrol positif Natrium Diklofenak. Hal ini memiliki alasan yang sama dengan pengujian antipiretik dimana ekstrak etanol buah wualae dapat dilihat bahwa efek antiinflamasi semakin meningkat seiring dengan peningkatan dosis sediaan. Data hasil penurunan udem kemudian dianalisis menggunakan program SPSS (Statistical Product and Service Solution) metode analisis non parametrik Kruskal Wallis. Analisis ini dilakukan terhadap persen hambat radang, analisis variasi terhadap persen hambat radang digunakan untuk melihat ada perbedaan yang signifikan antar kelompok perlakuan secara keseluruhan pada ekstrak etanol buah wualae dosis 100 mg/KgBB, 200 mg/KgBB, 300 mg/KgBB, dan 400 mg/KgBB terhadap Na-CMC sebagai kontrol negatif dan Natrium diklofenak sebagai kontrol positif. Data hasil analisis dapat dilihat pada Lampiran 9. Analisis data Kruskal Wallis pada data persen hambat radang menunjukkan nilai probabilitas (p) < 0,05, maka hipotesis nol (H0) ditolak dan hipotesis alternatif (H1) diterima, yang berarti bahwa terdapat perbedaan signifikan efek antiinflamasi pada keseluruhan data pada tiap kelompok, dari kelompok perlakuan dan kelompok kontrol.

62

Uji Mann Whitney dilakukan sebagai uji lanjutan dari uji Kruskal Wallis pada persen hambat radang. Tujuan uji Mann Whitney untuk melihat apakah terdapat perbedaan efek yang signifikan dari masing-masing kelompok perlakuan dengan kelompok perlakuan lainnya. Data uji Mann Whitney pada persen hambat radang menunjukkan dosis 100 mg/KgBB, 200 mg/KgBB, 300 mg/KgBB, 400 mg/KgBB dan kontrol positif memiliki perbedaan signifikan dengan kontrol negatif, namun tidak memiliki perbedaan yang signifikan dengan kelompok lain. Sedangkan pada kontrol negatif memiliki perbedaan yang signifikan dengan kelompok perlakuan dan kontrol positif.

63

BAB V PENUTUP A. Kesimpulan Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan diperoleh kesimpulan yaitu sebagai berikut: 1. Kandungan metabolit sekunder yang terdapat dalam buah wualae adalah alkaloid, flavonoid, tanin, dan terpenoid. 2. Ekstrak etanol buah wualae memiliki efek sebagai antipiretik terhadap mencit jantan galur Balb/c. 3. Ekstrak etanol buah wualae memiliki efek sebagai antiinflamasi terhadap mencit jantan galur Balb/c B. Saran Berdasarkan hasil yang diperoleh, maka saran dari penelitian ini yaitu Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai efektivitas antipiretik dan antiinflamasi ekstrak etanol buah Wualae dengan parasetamol sebagai antipiretik dan natrium diklofenak sebagai antiinflamasi.

64

DAFTAR PUSTAKA Adliani, N., Nazliniwaty., dan Djendakita.P., 2012., Formulasi Lipstik Menggunakan Zat Warna Dari Ekstrak Bunga Kecombrang (Etlingera elatior (Jack) R.M.Sm.), Journal of Pharmaceutics and Pharmacology, Vol. 1 (2). Angelina, M., Amelia., Irsyad, M., Meilawati, L., dan Hanafi, M., 2015, Karakterisasi Ekstrak Etanol Herba Katumpangan Air (Peperomia Pellucida L. Kunth), Biopropal Industri, Vol. 6 (2):53-61. Anggraeny, E.N., dan Anastasia, S.P., 2016, Uji Daya Antiinflamasi dan Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Lengkeng (Dimocarpus longan Lour) Pada Tikus Putih Jantan (Rattus norvegicum) Galur Wistar, Jurnal Ilmiah Farmasi, Vol. 12 (2). Agustina, R.Y., dan Sulchan,M., 2013, Pengaruh Pemberian Jus Apel Fuji (Malus Domestica) Dan Susu Tinggi Kalsium Rendah Lemak Terhadap Kadar Trigliserida Pada Mencit Sprague Dawley Hiperkolesterolemia, Journal of Nutrition College, Vol. 2 (4). Akbar, B., 2010, Tumbuhan dengan Kandungan Senyawa Aktif yang Berpotensi Sebagai Bahan antifertilitas, Adabia Press, Jakarta. Anfiandi, V., 2013, Uji Teratogenik Infusa Daun Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban) pada Mencit Betina (Mus musculus), Jurnal Ilmiah Mahasiswa Universitas Surabaya, Vol. 2 (1). Angin, M.I.B.P., 2015, Karakterisasi Senyawa Kimia Dan Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Bunga Kecombrang (Etlingera Elatior) Yang Diisolasi Dengan Destilasi Stahl, Agrica Ekstensia, Vol. 9 (1). Badan POM RI, 2013, Pedoman Teknologi Formulasi Sediaan Berbasis Ekstrak Volume 2, Direktorat Obat Asli Indonesia, Jakarta. Corwin, E.J., 2009, Buku Saku Patofisiologi, EGC, Jakarta. Depkes RI, 1995, Materia Medika Jilid VI, Diktorat Jenderal POM, Jakarta. Depkes RI, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Diktorat Jenderal POM, Jakarta. Dhyantari, O., Cyntia,T. M., dan Tri,D.W., 2015, Efek Antiinflamasi Dari Ekstrak Glukosamin Ceker Ayam Pada Mencit Wistar Jantan Yang Diinduksi Karagenanan, Jurnal Pangan dan Agroindustri, Vol. 3(3).

65

Ditjen POM, 1979, Farmakope Indonesia Edisi III, Jakarta, Depkes RI. Djamal, R., 2012, Prinsip-Prinsip Dasar Isolasi dan Identifikasi, Universitas Baiturrahman, Padang. Dorland, 2011, Kamus Kedokteran, Edisi 28, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Ergina, Siti, N., dan Indarini, D.P., 2014, Uji kualitatif Senyawa Metabolit Sekunder pada Daun Palado (Agave angustifolia) yang diekstraksi dengan Pelarut Air dan Etanol, J. Akad.Kim, Vol. 3(3). Fridiana, D., 2012, Uji Antiinflamasi Ekstrak Umbi Rumput Teki (Cyperus rotundus L) Pada Kaki Mencit Wistar Jantan Yang Diinduksi Karagenan, Skripsi, Universitas Jember. Ginting, 2012, Indigofera sebagai Pakan Ternak, Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian, Jakarta. Guyton, A.C., dan Hall, J.E., 2007, Buku Ajar Fisiologi Kedokteran Edisi 11, Egc, Jakarta. Harborne, J.B., 1987, Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, Penerjemah: Kosasih P, Soediro Iwang, Penerbit ITB, Bandung, 6-17. Hastuti, S., dan Susi, E., 2016, Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etil Asetat Daun Seligi (Phyllanthus buxifolius Muell.Arg) Pada Mencit Jantan Galur Swiss, Jurnal Biologi Papua, Vol. 8(1). Hidayati, N.A., Shanti, L., dan Ahmad, D.S., 2008, Kandungan Kimia dan Uji Antiinflamasi Ekstrak Etanol Lantana camara L. pada Mencit Putih (Rattus norvegicus L.) Jantan, Bioteknologi, Vol. 5(1). Kalay,S., Widdhi,B., dan Paulina,V.Y.Y., 2014, Uji Efek Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Prasman (Eupatorium triplinerve Vahl.) Pada Mencit Jantan Galur Wistar (Rattus Norvegicus L.) Yang Diinduksi Vaksin Dtp Hb, Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi, Vol. 3(3). Katzung, B. G., 2002, Farmakologi Dasar dan Klinik Edisi II, Penerbit Salemba, Jakarta. Katzung, B. G., 2013, Farmakologi dasar & klinik Edisi 12, EGC, Jakarta.

66

Kumar, V., Ramzi, S.C., Stanley, L.R., 2014, Buku Ajar Patologi Edisi 7, EGC, Jakarta. Kusumawanti,D., 2004, Bersahabat dengan Hewan Coba. Gadjah Mada University Press, Yogyakarta. Kusumawati,E., 2016, Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Kecombrang (Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith) Terhadap Bakteri Bacillus cereus dan Escherichia coli Menggunakan Metode Difusi Sumur, Polhasains, Vol. 4(1). Lenny S., 2006, Senyawa Flavonoida, Fenilpropanoida dan Alkaloida, Karya Ilmiah. Departemen Kimia. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera utara. Lumbanraja,L.B., 2009, Skrining Fitokimia dan Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Tempuyung (Sonchus arvensis L.) Terhadap Radang Pada Tikus, Skripsi, Universitas Sumatera utara, Medan. Makalalag, I.W., Adeanne, W., dan Weny, W., 2013, Uji Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia Steen.) Terhadap kadar Gula Darah Pada Mencit Putih Jantan Galur Wistar ( Rattus norvegicus) yang Diinduksi Sukrosa, Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi, Vol. 2(1). Makalalag, A.K., Meiske, S., Maureen, K., 2015, Skrining Fitokimia Dan Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Dari Daun Turi (Sesbania grandiflora Pers), Chemistry Progress, Vol. 8(1). Moot, C.L, Widdi, B, dan Jeane, M., 2013, Uji Efek Antipiretik Infusa Daun Sesewanua (Clerodendron squamatum Vahl.) Terhadap Kelinci Jantan Yang Diinduksi Vaksin Dtp Hb, Pharmacon, Vol. 2(3). Muliani, H., 2011, Pertumbuhan Mencit (Mus musculus L.) Setelah Pemberian Biji Jarak Pagar (Jatropha curcas L.), Buletin Anatomi dan Fisiologi, Vol. XIX (1). Nafisah, M., Tukiran, Suyatno, dan Nurul, H., 2014, Uji skrining fitokimia pada ekstrak heksan, kloroform dan metanol dari tanaman Patikan Kebo (Euphorbiae hirtae), Prosiding Seminar Nasional Kimia, Universitas Negeri Surabaya. Oktiwilianti,W., Umi,Y., dan Ratu,C., 2015, Uji Aktivitas Antiinflamasi dari Ekstrak Etanol daun asam jawa (Tamarindus indica L) terhadap Tikus Wistar Jantan, Prosiding Penelitian SpeSIA Unisba. Price, S.A., dan Wilson, L.M., 2005, Patofisiologi Konsep Klinis Proses-Proses 67

Penyakit Edisi 6 Volume 1, Egc, Jakarta. Priyanto, 2008, Farmakologi Dasar, Penerbit Leskonfi, Depok Jabar. Putra, M.P., Santun, B.R., dan Mia, K., 2015, Perbandingan Efektifitas Antipiretik antara Ekstrak Etanol Kunyit Putih (Curcuma zedoaria Rosc) dengan Parasetamol pada Tikus Model Demam, Prosiding Pendidikan Dokter. Rowe, R.C., Paul, J.S., and Marian, E.Q., 2009, Handbook of Pharmaceutical Excipients Sixth edition, Pharmaceutical Press, London. Sagala, J.P., Wisnu, C.P., Rolan, R., 2016, Pengaruh Ekstrak Etanol Bunga Kecombrang (Etlingera elatior) terhadap penyembuhan luka pada tikus putih (Rattus novergicus), Prosiding Seminar Nasional Tumbuhan Obat Indonesia ke-50. Setiabudy, R., Setiabudy, S.G., dan Elysabeth., 2009, Farmakologi Dan Terapi Edisi 5, Balai Penerbit Fkui, Jakarta. Setiati, S., Idrus, A., Aru, W.s., Marcellus, S.K., Bambang, S., dan Ari, F.S., 2014, Ilmu Penyakit Dalam Jilid edisi VI, InternaPublishing, Jakarta. Sharon, N., syariful, A., dan Yuliet., 2013, Formulasi Krim Antioksidan Ekstrak Etanol Bawang Hutan (Eleutherine palmifolia L. Merr), Online Jurnal of Natural Science, Vol. 2(3). Sherwood, L., 2014, Fisiologi Manusia dari Sel ke Sistem Edisi 8. EGC, Jakarta. Siadi, K., 2012, Ekstrak Bungkil Biji Jarak Pagar (Jatropa curcas) Sebagai Biopeptisida yang Efektif Dengan Penambahan Larutan NaCl, Jurnal Mipa, Vol. 35(2):77-83. Silalahi, M. 2016. Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith : Manfaat dan Aktivitas Biologi. Prosiding Seminar Nasional Pendidikan Biologi. ISBN. 978602-96166-5-4. Soemarie, Y.B., 2016, Uji Aktivitas Antiinflamasi Kuersetin Kulit Bawang Merah (Allium cepa L.) Pada Mencit Putih Jantan (Mus musculus), Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, Vol. 1(2): 163-172 Styawan, A.A., dan Hendra, B., 2015, Pengaruh Penurunan Dosis Dari Ekstrak Etanol Batang Brotowali (Tinospora crispa, L) Terhadap Efek Antipiretik Pada Mencit Putih Jantan Galur Wistar, CERATA Journal Of Pharmacy Science.

Suhendi, A., Nurcahyanti, Muhtadi, dan Sutrisna, E.M., 2011, Aktivitas antihiperurisemia ekstrak air jinten hitam (Coleus ambonicus L) pada 68

mencit jantan galur balb/c dan standardisasinya, Majalala Farmasi Indonesia, Vol. 22(2). Sujono, T.A., Patimah, R., Yuliani, R., 2012, Efek Antiinflamasi Infusa Rimpang Temu Putih (Curcuma Zedoaria (Berg) Roscoe) Pada Mencit Yang Diinduksi Karagenan, Biomedika, Vol. 4(2). Sukandar, D., Nani, R., Ira, J., dan Adeng, H., 2010, Karakterisasi Senyawa Aktif Antibakteri Ekstrak Air Bunga Kecombrang (Etlingera elatior) Sebagai Bahan Pangan Fungsional, Valensi, Vol. 2(1). Susanti,L., 2012, Efektifitas Kompres Dingin Dan Hangat Pada Penataleksanaan Demam, Sainstis, Vol. 1(1). Susanty, A., Armon, F dan Ivona A., 2014, Efek Analgetik Ekstrak Etanol Daun Tampa Badak (Voacanga foetida (Bl.) K. Schum) Pada Mencit Putih Jantan, Jurnal Sains Farmasi & Klinis, Vol.1(1). Susilowati, S.S., Sudibyo, M., Sugeng, R., dan Agung, E.N., 2011, Aktivitas analgetik dan antiinflamasi ekstrak batang combrang (Nicola speciosa Horan), Majalah Farmasi Indonesia, Vol. 22(2). Tjay, T.H., dan Kirana, R., 2007, Obat-obat Penting, Penerbit PT Elex Media Komputindo, Jakarta. Wahyuni, R., Guswandi., Dan Harrizul, R., 2014, Pengaruh Cara Pengeringan dengan Oven, Kering Angin dan Cahaya Matahari Langsung Terhadap Mutu Simplisia Herba Sambiloto , Jurnal Farmasi Higea, Vol. 6(2). Wiryawan., I Gede,A., dan I Putu,A., 2015, Efek Ekstrak Bawang Merah ( Allium ascalonicum L.) Terhadap Perubahan Suhu Tubuh Pada Mencit Putih (Rattus norvegicus) Yang Mengalami Demam, Coping Ners, Vol. 3(1). Yuda, I.K.A., Made, S.A., Anak, A.G.O.K., 2013, Identifikasi Golongan Senyawa Kimia Ekstrak Etanol Buah Pare (Momordica charantia) dan Pengaruhnya Terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah Mencit Putih Jantan (Rattus novergicus) yang Diinduksi Aloksan, Buletin Veteriner Udayana, Vol. 5(2).

69

Lampiran 1. Hasil Determinasi Tanaman

70

Lampiran 2. Skema alur penelitian Buah wualae

Di preparasi Didapatkan simplisia kering Di maserasi menggunakan Etanol 96%

Ekstrak kental

Skrining Fitokimia

Uji Efek antipiretik dan antiinflamasi

Analisis profil kandungan metabolit sekunder

24 ekor mencit jantan dikelompokkan kedalam 6 kelompok

Uji Efek Antipiretik

k e l o m p o k

Uji karakteristik Sari larut air Sari larut etanol Kadar air,Kadar abu Organoleptik

Uji Efek Antiinflamasi

Kontrol (-) Na.CMC

Kontrol (-) Na.CMC

Kontrol (+) Parasetamol

Kontrol (+) Na-diklofenak

Ekstrak etanol buah wualae 100 mg/KgBB

Ekstrak etanol buah wualae 100 mg/KgBB

Ekstrak etanol buah wualae 200 mg/KgBB

Ekstrak etanol buah wualae 200 mg/KgBB

Ekstrak etanol buah wualae 300 mg/KgBB

Ekstrak etanol buah wualae 300 mg/KgBB

Ekstrak etanol buah wualae 400 mg/KgBB

Ekstrak etanol buah wualae 400 mg/KgBB

Induksi vaksin DPT

Pengukuran suhu rektal dan edema kaki mencit

k e l o m p o k

Induksi karagenan

Analisis Data 71

Lampiran 3. Perhitungan Rendamen Ekstrak Berat simplisia kering

= 1870 gram

Berat total ekstrak

= 96,21 gram

Rendemen ekstrak

=

96,21gram x 100% 1870 gram

= 5,14 %

72

Lampiran 4. Karakterisasi Ekstrak a. Uji Kadar Sari Larut Air Berat ekstrak (W)

= 5,0113 gram

Berat cawan kosong (W2)

= 38,4255 gram

Berat cawan + ekstrak setelah diuapkan (W1) = 38,8430 gram

Kadar sari larut air

=

W1  W 2 x 100% W

=

(38,8430  38,4255) x 100% 5,0113

= 8,331 % x 5 = 41,65 % (dihitung terhadap 100 mL pelarut) b. Uji Kadar Sari Larut Etanol Berat ekstrak (W)

= 5,1876 gram

Berat cawan kosong (W2)

= 38,4261 gram

Berat cawan + ekstrak setelah diuapkan (W1) = 39,0598 gram

Kadar sari larut etanol

=

W1  W 2 x 100% W

=

(39,0598  38,4261) x 100% 5,1876

= 12,215 % x 5 = 61,07 % (dihitung terhadap 100 mL pelarut)

73

c. Uji Kadar Air Berat ekstrak (berat awal)

= 1,0793 gram

Berat cawan kosong

= 30,3354 gram

Berat cawan + ekstrak setelah dikeringkan

= 31,3579 gram

Berat akhir

= (31,3579 – 30,3354) = 1,0225 gram

Kadar Air (%)

= =

𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑎𝑤𝑎𝑙−𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑎𝑘ℎ𝑖𝑟 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑎𝑤𝑎𝑙

x 100%

1,0793  1,0225 x 100% 1,0793

= 5,26 % d. Uji kadar abu Berat ekstrak (A)

= 1 gram

Berat cawan kosong (C)

= 30,2582 gram

Berat cawan + ekstrak setelah pemijaran (B) = 30,3210 gram Kadar abu (%)

= =

𝐵− 𝐶 𝐴

x 100%

30,3210  30,2582 x 100% 1

= 6,28 %

74

Lampiran 5. Pengelompokkan Hewan Uji Pengelompokkan Hewan Uji mengikuti Rumus Federer (Agustina dan Sulchan, 2013) : (t-1) (n-1) ≥ 15 Keterangan : n = jumlah sampel setiap kelompok perlakuan t = jumlah kelompok Rumus Fereder: (6-1) (n-1) ≥ 15 5 (n-1) ≥ 15 5n – 5 ≥ 15 5n ≥ 20 n ≥ 4, sehingga jumlah mencit yang digunakan yaitu 4 mencit dalam satu kelompok.

75

Lampiran 6. Pembuatan Sediaan Banding 1. Parasetamol Perhitungan dosis parasetamol yang akan diberikan pada mencit secara peroral (p.o). a. Sediaan banding yang digunakan adalah parasetamol dengan dosis 500 mg untuk manusia dewasa. Maka perlu dilakukan konversi dosis untuk pemberian pada mencit. Perhitungan konversi sebagai berikut: Dosis mencit = 500 mg x 0,0026 = 1,3 mg. Berat rata-rata mencit = 22,4 mg. Jadi, dosis parasetamol untuk mencit dengan berat rata-rata 22,4 mg adalah 1,3 mg. b. Menentukan jumlah parasetamol yang dibutuhkan untuk membuat 10 ml. Volume dosis oral mencit : 1 ml. Vol. Pemberian optimal = ½ x Vol. Pemberian maksimal parasetamol yang dibutuhkan = parasetamol butuh

𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛 𝑠𝑡𝑜𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑎𝑘𝑎𝑛 𝑑𝑖𝑏𝑢𝑎𝑡 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑝𝑒𝑚𝑏𝑒𝑟𝑖𝑎𝑛 (𝑝.𝑜)

x dosis mencit

10 𝑚𝑙

= 0,5 𝑚𝑙 x 1,3 mg = 26 mg



Menurut FI III, penetapan keseragaman bobot dilakukan dengan penimbangan 10 tablet satu per satu, maka diambil 10 parasetamol digerus dan ditimbang berat totalnya yaitu 5.450 mg dengan berat rata-rata parasetamol 545 mg.



Berat bahan aktif dalam parasetamol yaitu 500 mg/tab x 10 tab = 5.000 mg



Menentukan berat serbuk yang akan diambil untuk memperoleh 26 mg 76

Berat yang ditimbang

=

𝑗𝑢𝑚𝑙. 𝑝𝑎𝑟𝑎𝑠𝑒𝑡𝑎𝑚𝑜𝑙 𝑏𝑢𝑡𝑢ℎ 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑡𝑖𝑘𝑒𝑡

x berat rata-rata

26 𝑚𝑔

= 500 𝑚𝑔 x 545 mg = 28,34 mg. c. Menentukan volume pemberian untuk mencit dengan berat rata-rata 22,4 mg. 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡

Volume pemberian

= 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑏𝑒𝑠𝑎𝑟 x volume pemberian oral

Volume pemberian

= 25,1 x 0,5 mL

Volume pemberian

= 0,44 mL

22,4

d. Pembuatan sediaan parasetamol Ditimbang 28,34 mg parasetamol, dimasukan kedalam lumpang, digerus, disuspensikan dengan sedikit Na.CMC 0,5% kemudian dimasukan kedalam labu takar, dicukupkan volumenya hingga 10 ml dengan Na.CMC 0,5%. e. Pembuatan Na.CMC 0,5%. Ditimbang Na.CMC sebanyak 0,5 g kedalam gelas kimia ditambahkan 100 mL aquades diaduk sambil dipanaskan di atas hot plate. Didinginkan selama 15 menit hingga diperoleh

massa yang transparan, lalu diaduk sampai

homogen.

77

2. Natrium Diklofenak Perhitungan dosis Natrium Diklofenak yang akan diberikan pada mencit secara peroral (p.o). a. Sediaan banding yang digunakan adalah Natrium Diklofenak dengan dosis 50 mg untuk manusia dewasa. Maka perlu dilakukan konversi dosis untuk pemberian pada mencit. Perhitungan konversi sebagai berikut: Dosis mencit

= 50 mg x 0,0026 = 0,13 mg.

Berat rata-rata mencit = 23,92 mg. Jadi, dosis untuk mencit dengan berat rata-rata 23,92 mg adalah 0,13 mg. b. Menentukan jumlah Na.Diklofenak yang dibutuhkan untuk membuat 10 ml. Volume dosis oral mencit : 1 ml. Vol. Pemberian optimal = ½ x Vol. Pemberian maksimal Na.Diklofenak yang dibutuhkan = Na.Diklofenak l butuh

𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛 𝑠𝑡𝑜𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑎𝑘𝑎𝑛 𝑑𝑖𝑏𝑢𝑎𝑡 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑝𝑒𝑚𝑏𝑒𝑟𝑖𝑎𝑛 (𝑝.𝑜)

x dosis mencit

10 𝑚𝑙

= 0,5 𝑚𝑙 x 0,13 mg = 2,6 mg

 Menurut FI III, penetapan keseragaman bobot dilakukan dengan penimbangan 10 tablet satu per satu, maka diambil 10 Na.Diklofenak digerus dan ditimbang berat totalnya yaitu 2.062,2 mg dengan berat rata-rata Na.Diklofenak 206,22 mg.  Berat bahan aktif dalam Na.Diklofenak yaitu 500 mg/tab x 10 tab = 5.000 mg.  Menentukan berat serbuk yang akan diambil untuk memperoleh 2,6 mg

78

Berat yang ditimbang

= =

𝑗𝑢𝑚𝑙.𝑁𝑎𝑡𝑟𝑖𝑢𝑚 𝑑𝑖𝑘𝑙𝑜𝑓𝑒𝑛𝑎𝑘 𝑏𝑢𝑡𝑢ℎ 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑡𝑖𝑘𝑒𝑡 2,6 𝑚𝑔 50 𝑚𝑔

x berat rata-rata

x 206,22 mg

= 10,72 mg. c. Menentukan volume pemberian untuk mencit dengan berat rata-rata 23,92 mg. 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡

Volume pemberian

= 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑏𝑒𝑠𝑎𝑟 x volume pemberian oral

Volume pemberian

=

Volume pemberian

= 0,47 mL

23,92 25,1

x 0,5 mL

d. Pembuatan sediaan Na.Diklofenak Ditimbang 10,72 mg Na.Diklofenak, dimasukan kedalam lumpang, digerus, disuspensikan dengan sedikit Na.CMC 0,5% kemudian dimasukan kedalam labu takar, dicukupkan volumenya hingga 10 ml dengan Na.CMC 0,5%. e. Pembuatan Na.CMC 0,5%. Ditimbang Na.CMC sebanyak 0,5 g kedalam gelas kimia ditambahkan 100 mL aquades diaduk sambil dipanaskan di atas hot plate. Didinginkan selama 15 menit hingga diperoleh

massa yang transparan, lalu diaduk sampai

homogen. f. Pembuatan larutan karagenan 1% Ditimbang 0,1 g kedalam gelas kimia, dilarutkan dalam 10 mL NaCl 0,9%

79

Lampiran 7. Pembuatan Sediaan Uji. 1. Sediaan uji antipiretik Dosis suspensi ekstrak etanol buah wualae (E. elatior) yang akan dibuat adalah dosis 100 mg/kgBB, 200 mg/kgBB, 300 mg/kgBB, dan 400 mg/kgBB. Berat badan mencit rata-rata: Kelompok dosis 100 mg/kgBB : 24,97 g Kelompok dosis 200 mg/kgBB : 25,27 g Kelompok dosis 300 mg/kgBB : 24,3 g Kelompok dosis 400 mg/kgBB : 23 g Perhitungan dosis pemberian : a. Kelompok dosis 100 mg/kgBB 100

- Konversi dari kg ke gram : 1000 = 0,1 mg/gBB Untuk mencit dengan berat rata-rata 24,97 g 0,1 mg/gBB x 24,97 gram = 2,497 mg - Menentukan ekstrak yang dibutuhkan untuk membuat 10 mL 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛 𝑠𝑡𝑜𝑘

Esktrak butuh = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑝𝑒𝑚𝑏𝑒𝑟𝑖𝑎𝑛 x dosis mencit 10𝑚𝑙

Ekstrak butuh = 0,5𝑚𝑙 x 2,497 mg Ekstrak butuh = 49,94 mg. Jadi, sebanyak 53,2 mg ekstrak etanol buah wualae disuspensikan kedalam 10 mL Na.CMC 0,5%.

80

- Menetukan volume pemberian 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡

Volume pemberian

= 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑏𝑒𝑠𝑎𝑟 x volume pemberian oral

Volume pemberian

=

Volume pemberian

= 0,42 mL

24,97 29,1

x 0,5 mL

b. Kelompok dosis 200 mg/kgBB 200

- Konversi dari kg ke gram : 1000 = 0,2 mg/gBB Untuk mencit dengan berat rata-rata 25,27 g 0,2 mg/gBB x 25,27 gram = 5,054 mg - Menentukan ekstrak yang dibutuhkan untuk membuat 10 mL 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛 𝑠𝑡𝑜𝑘

Esktrak butuh = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑝𝑒𝑚𝑏𝑒𝑟𝑖𝑎𝑛 x dosis mencit 10𝑚𝑙

Ekstrak butuh = 0,5𝑚𝑙 x 5,054 mg Ekstrak butuh = 101,08 mg. Jadi, sebanyak 102 mg ekstrak etanol buah wualae disuspensikan kedalam 10 mL Na.CMC 0,5%. - Menetukan volume pemberian 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡

Volume pemberian

= 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑏𝑒𝑠𝑎𝑟 x volume pemberian oral

Volume pemberian

=

Volume pemberian

= 0,424 mL

25,27 29,8

x 0,5 mL

c. Kelompok dosis 300 mg/kgBB 300

- Konversi dari kg ke gram : 1000 = 0,3 mg/gBB

81

Untuk mencit dengan berat rata-rata 24,3 g 0,3 mg/gBB x 24,3 gram = 7,29 mg - Menentukan ekstrak yang dibutuhkan untuk membuat 10 mL 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛 𝑠𝑡𝑜𝑘

Esktrak butuh = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑝𝑒𝑚𝑏𝑒𝑟𝑖𝑎𝑛 x dosis mencit 10𝑚𝑙

Ekstrak butuh = 0,5𝑚𝑙 x 7,29 mg Ekstrak butuh = 145,8 mg. Jadi, sebanyak 145,8 mg ekstrak etanol buah wualae disuspensikan kedalam 10 mL Na.CMC 0,5%. - Menetukan volume pemberian 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡

Volume pemberian

= 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑏𝑒𝑠𝑎𝑟 x volume pemberian oral

Volume pemberian

=

Volume pemberian

= 0,418 mL

24,3 29

x 0,5 mL

d. Kelompok dosis 400 mg/kgBB 400

- Konversi dari kg ke gram : 1000 = 0,4 mg/gBB Untuk mencit dengan berat rata-rata 23 g 0,4mg/gBB x 23 gram = 9,2 mg - Menentukan ekstrak yang dibutuhkan untuk membuat 10 mL 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛 𝑠𝑡𝑜𝑘

Esktrak butuh = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑝𝑒𝑚𝑏𝑒𝑟𝑖𝑎𝑛 x dosis mencit 10𝑚𝑙

Ekstrak butuh = 0,5𝑚𝑙 x 9,2 mg Ekstrak butuh = 184 mg.

82

Jadi, sebanyak 184 mg ekstrak etanol buah wualae disuspensikan kedalam 10 mL Na.CMC 0,5%. - Menetukan volume pemberian 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡

Volume pemberian

= 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑏𝑒𝑠𝑎𝑟 x volume pemberian oral

Volume pemberian

= 26 x 0,5

Volume pemberian

= 0,442 mL

23

2. Sediaan uji antiinflamasi Dosis suspensi ekstrak etanol buah wualae (E. elatior) yang akan dibuat adalah dosis 100 mg/kgBB, 200 mg/kgBB, 300 mg/kgBB, dan 400 mg/kgBB. Berat badan mencit rata-rata: Kelompok dosis 100 mg/kgBB : 23,48 g Kelompok dosis 200 mg/kgBB : 23,90 g Kelompok dosis 300 mg/kgBB : 23,78 g Kelompok dosis 400 mg/kgBB : 23,76 g Perhitungan dosis pemberian : a. Kelompok dosis 100 mg/kgBB 100

- Konversi dari kg ke gram : 1000 = 0,1 mg/gBB Untuk mencit dengan berat rata-rata 23,48 g 0,1 mg/gBB x 23,48 gram = 2,348 mg - Menentukan ekstrak yang dibutuhkan untuk membuat 10 mL 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛 𝑠𝑡𝑜𝑘

Esktrak butuh = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑝𝑒𝑚𝑏𝑒𝑟𝑖𝑎𝑛 x dosis mencit

83

10𝑚𝑙

Ekstrak butuh = 0,5𝑚𝑙 x 2,348 mg Ekstrak butuh = 46,96 mg. Jadi, sebanyak 46,96 mg ekstrak etanol buah wualae disuspensikan kedalam 10 mL Na.CMC 0,5%. - Menetukan volume pemberian 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡

Volume pemberian

= 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑏𝑒𝑠𝑎𝑟 x volume pemberian oral

Volume pemberian

=

Volume pemberian

= 0,419 mL

23,48 28

x 0,5 mL

b. Kelompok dosis 200 mg/kgBB 200

- Konversi dari kg ke gram : 1000 = 0,2 mg/gBB Untuk mencit dengan berat rata-rata 23,90 g 0,2 mg/gBB x 23,90 gram = 4,78 mg - Menentukan ekstrak yang dibutuhkan untuk membuat 10 mL 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛 𝑠𝑡𝑜𝑘

Esktrak butuh = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑝𝑒𝑚𝑏𝑒𝑟𝑖𝑎𝑛 x dosis mencit 10𝑚𝑙

Ekstrak butuh = 0,5𝑚𝑙 x 4,78 mg Ekstrak butuh = 95,6 mg. Jadi, sebanyak 95,6 mg ekstrak etanol buah wualae disuspensikan kedalam 10 mL Na.CMC 0,5%. - Menetukan volume pemberian 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡

Volume pemberian

= 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑏𝑒𝑠𝑎𝑟 x volume pemberian oral

Volume pemberian

=

23,90 27,7

x 0,5 84

Volume pemberian

= 0,431 ml

c. Kelompok dosis 300 mg/kgBB 300

- Konversi dari kg ke gram : 1000 = 0,3 mg/gBB Untuk mencit dengan berat rata-rata 23,78 g 0,3 mg/gBB x 23,78gram = 7,134 mg - Menentukan ekstrak yang dibutuhkan untuk membuat 10 mL 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛 𝑠𝑡𝑜𝑘

Esktrak butuh = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑝𝑒𝑚𝑏𝑒𝑟𝑖𝑎𝑛 x dosis mencit 10𝑚𝑙

Ekstrak butuh = 0,5𝑚𝑙 x 7,134 mg Ekstrak butuh = 142,68 mg. Jadi, sebanyak 142,68 mg ekstrak etanol buah wualae disuspensikan kedalam 10 ml Na.CMC 0,5%. - Menetukan volume pemberian 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡

Volume pemberian

= 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑏𝑒𝑠𝑎𝑟 x volume pemberian oral

Volume pemberian

=

Volume pemberian

= 0,448 mL

23,78 26,5

x 0,5 mL

d. Kelompok dosis 400 mg/kgBB 400

- Konversi dari kg ke gram : 1000 = 0,4 mg/gBB Untuk mencit dengan berat rata-rata 23,76 g 0,4mg/gBB x 23,76 gram = 9,502 mg - Menentukan ekstrak yang dibutuhkan untuk membuat 10 mL 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛 𝑠𝑡𝑜𝑘

Esktrak butuh = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑝𝑒𝑚𝑏𝑒𝑟𝑖𝑎𝑛 x dosis mencit 85

10𝑚𝑙

Ekstrak butuh = 0,5𝑚𝑙 x 9,502 mg Ekstrak butuh = 190,08 mg. Jadi, sebanyak 190,08 mg ekstrak etanol buah wualae disuspensikan kedalam 10 mL Na.CMC 0,5%. - Menetukan volume pemberian 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡

Volume pemberian

= 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑏𝑒𝑠𝑎𝑟 x volume pemberian oral

Volume pemberian

=

Volume pemberian

= 0,45 mL

23,76 26,4

x 0,5 mL

86

Lampiran 8. Data suhu rektal mencit dan Data volume kaki mencit Tabel 1. Data suhu rektal mencit Kelompok

K- Na CMC

K+ PCT 500 mg

Dosis I 100 mg/KgBB Dosis II 200 mg/KgBB Dosis III 300 mg/KgBB Dosis IV 400 mg/KgBB

SUHU AWAL

Suhu Induksi

t30

t60

t90

t120

t150

t180

35,1 36 37,2 35,2 36,3 36,5 35,5 37,1 35,7 35,9 37,4 36,4 35,5 36,1 36,4 35,5 36,1 35,3 35,7 36,2 35,7 36,3 37,1 35,6

36,8 36,9 38 37,5 37,9 38,5 36,6 38,2 36,9 37,2 38,6 37,8 36,9 37,8 37,9 36,9 36,9 37,1 37,2 37,7 37,1 37,7 38,3 37,2

36,7 37 37,9 37,4 37,5 38 36,2 37,9 36,8 36,9 38,5 37,5 36,7 37,7 37,8 36,6 36,6 36,8 36,9 37,5 36,5 37,3 38 36,7

36,7 36,8 38 37,2 37,1 37,6 35,7 37,6 36,6 36,7 38,3 37,3 36,4 37,3 37,5 36,3 36,2 36,4 36,6 37,3 36,1 36,9 37,7 36,3

36,6 36,8 38,1 37 36,7 37,2 35,5 37,4 36,3 36,5 38 36,8 36,1 36,7 37,3 36,1 36 35,9 36,1 37 35,7 36,6 37,4 35,9

36,7 36,7 38,1 36,8 36,3 36,9 35,3 37,2 36 36,3 37,8 36,6 35,8 36,5 36,9 35,8 35,9 35,7 35,8 36,6 35,5 36,2 37 35,7

36,6 37 38 36,7 36 36,6 35,2 36,9 35,8 35,9 37,6 36,5 35,6 36,3 36,7 35,6 35,8 35,4 35,5 36,2 35,4 36 36,8 35,5

36,5 37 37,9 36,8 35,7 36,1 35 36,7 35,5 35,7 37,4 36,3 35,3 36 36,5 35,4 35,5 35,2 35,3 35,8 35,2 35,8 36,6 35,3

87

Tabel 2. Data Penurunan Suhu Rektal Mencit Kelomp ok

K - Na CMC

K+ PCT 500 mg Dosis I 100 mg/KgB B Dosis II 200 mg/KgB B Dosis III 300 mg/KgB B Dosis IV 400 mg/KgB B

SUHU AWAL

Suhu Induksi

35.1 36 37.2 36.2 36.3 36.5 35.5 37.1 35.8 35.9 37.3 36.4 35.5 36.1 36.4 35.5 36.1 35.3 35.7 36.2 35.7 36.3 37.1 35.6

36.8 36.9 38 37,5 37.9 38.5 36.6 38.2 36.9 37.2 38.6 37.5 36.9 37.8 37.9 36.9 36.9 37.1 37.2 37.7 37.1 37.7 38.3 37.2

Penurunan suhu menit ke30 0.1 -0,1 0.1 0,1 0.4 0.5 0.4 0,3 0.1 0.3 0.1 0.3 0.2 0.2 0.1 0.3 0.3 0.3 0.3 0.2 0.6 0.4 0.3 0.5

Penurunan suhu menit ke60 0.1 0,1 0 0,3 0.8 0.9 0.9 0,6 0.3 0.5 0.3 0.5 0.5 0.5 0.3 0.6 0.7 0.7 0.6 0.4 1 0.8 0.6 0.9

Penurunan suhu menit ke90 0.2 0,1 -0,1 0,5 1.2 1 1.1 0,8 0.6 0.7 0.6 1 0.8 1.1 0.6 0.8 0.9 1.2 1.1 0.7 1.4 1.1 0.9 1.3

Penuruna n suhu menit ke120 0.1 0,2 -0,1 0,7 1.6 1.6 1.3 1 0.9 0.9 0.8 1.2 1.1 1.3 1 1.1 1 1.4 1.4 1.1 1.6 1.5 1.3 1.5

Penurunan suhu menit ke150 0.2 -0,1 0 0,8 1.9 1.9 1.4 1,3 1.1 1.3 1 1.3 1.3 1.5 1.2 1.3 1.1 1.7 1.7 1.5 1.7 1.7 1.5 1.7

Penurunan suhu menit ke180 0.3 -0,1 0,1 0,7 2.2 2.4 1.6 1,5 1.4 1.5 1.2 1.5 1.4 1.8 1.4 1.5 1.4 1.9 1.9 1.9 1.9 1.9 1.7 1.9

Tabel 3. Penurunan Suhu Rata-rata Rektal Mencit Kelompok Dosis I Dosis II Dosis III Dosis IV K+ PCT K- Na CMC

Penurunan suhu menit ke- 30

Penurunan suhu menit ke- 60

Penurunan suhu menit ke- 90

Penurunan suhu menit ke- 120

Penurunan suhu menit ke- 150

Penurunan suhu menit ke- 180

0,2 0,2 0,275 0,45 0,4

0,4 0,475 0,6 0,825 0,8

0,725 0,825 0,975 1,175 1,025

0,95 1,125 1,225 1,475 1,375

1,175 1,325 1,5 1,65 1,625

1,4 1,525 1,775 1,85 1,925

0,8 0,912 1,058 1,237 1,191

0,05

0,125

0,175

0,225

0,225

0,25

0,175

Rata-rata

88

Tabel 4. Data volume kaki mencit

K - Na CMC

K + Na Diklofenak 50 mg Dosis I 100 mg/KgBB

Dosis II 200 mg/KgBB

Dosis III 300 mg/KgBB

Dosis IV 400 mg/KgBB

V awal 0.4 0.4 0.5 0.4 0.4 0.4 0.5 0.4 0.5 0.4 0.5 0.4 0.4 0.5 0.5 0.5 0.4 0.4 0.5 0.5 0.4 0.5 0.5 0.4

V60 0.8 0.8 0.9 0.9 0.7 0.7 0.8 0.8 0.8 0.8 0.7 0.8 0.7 0.8 0.8 0.7 0.7 0.8 0.8 0.7 0.8 0.8 0.7 0.7

V120 0.8 0.8 0.9 0.9 0.6 0.6 0.7 0.7 0.8 0.8 0.7 0.8 0.7 0.8 0.8 0.7 0.7 0.7 0.8 0.7 0.7 0.8 0.7 0.7

V180 0.9 0.8 0.9 0.9 0.5 0.5 0.6 0.6 0.7 0.7 0.6 0.7 0.6 0.7 0.6 0.7 0.6 0.6 0.6 0.6 0.5 0.6 0.6 0.6

V240 0.8 0.7 0.8 0.8 0.4 0.4 0.5 0.5 0.6 0.6 0.5 0.6 0.4 0.6 0.5 0.6 0.4 0.5 0.5 0.5 0.4 0.5 0.5 0.5

V300 0.7 0.6 0.7 0.7 0.4 0.4 0.5 0.4 0.5 0.5 0.5 0.5 0.4 0.5 0.5 0.5 0.4 0.4 0.5 0.5 0.4 0.5 0.5 0.4

V360 0.6 0.5 0.6 0.6 0.4 0.4 0.5 0.4 0.5 0.4 0.5 0.4 0.4 0.5 0.5 0.5 0.4 0.4 0.5 0.5 0.4 0.5 0.5 0.4

89

 Perhitungan volume udem pada pletismometer Volume udem = π.r2.t Keterangan: t = Kenaikan volume air raksa (cm) r = jari-jari pipa kapiler alat pletismometer modifikasi (cm)  Contoh perhitungan volume udem awal (Vo) Dosis I Dik: t1 = 0,5 cm r = 0,2 cm Volume udem = π.r2.t = 3,14 . 0,22 . 0,5 = 0,0628 mL = 62,80μL Dik: t2 = 0,4 cm r = 0,2 cm Volume udem = π.r2.t = 3,14 . 0,22 . 0,4 = 0,05024 mL = 50,24μL Dik: t3 = 0,5 cm r = 0,2 cm Volume udem = π.r2.t = 3,14 . 0,22 . 0,5 = 0,0628 mL = 62,80μL Dik: t4 = 0,4 cm r = 0,2 cm Volume udem = π.r2.t = 3,14 . 0,22 . 0,4 = 0,05024 mL = 50,24μL

90

Tabel 5. Data volume kaki kiri mencit (satuan µL)

K - Na CMC K + Na Diklofenak 50 mg Dosis I 100 mg/KgBB Dosis II 200 mg/KgBB Dosis III 300 mg/KgBB Dosis IV 400 mg/KgBB

t 0.4 0.4 0.5 0.4 0.4 0.4 0.5 0.4 0.5 0.4 0.5 0.4 0.4 0.5 0.5 0.5 0.4 0.4 0.5 0.5 0.4 0.5 0.5 0.4

V awal 50.24 50.24 62.80 62.80 50.24 50.24 62.80 50.24 62.80 50.24 62.80 50.24 50.24 62.80 62.80 62.80 50.24 50.24 62.80 62.80 50.24 62.80 62.80 50.24

V60(µL) 100.48 100.48 113.14 113.14 87.92 87.92 100.48 100.48 100.48 100.48 87.92 100.48 87.92 100.48 100.48 100.48 87.92 100.48 100.48 87.92 100.48 100.48 87.92 87.92

V120(µL) 100.48 100.48 113.14 113.14 75.36 75.36 87.92 87.92 100.48 100.48 87.92 100.48 87.92 100.48 100.48 100.48 87.92 87.92 100.48 87.92 87.92 100.48 87.92 87.92

V180(µL) V240(µL) V300(µL) V360(µL) 113.14 100.48 87.92 75.36 100.48 87.92 75.36 62.80 113.14 100.48 87.92 75.36 113.14 100.48 87.92 75.36 62.80 50.24 50.24 50.24 62.80 50.24 50.24 50.24 75.36 62.80 62.80 62.80 75.36 62.80 50.24 50.24 87.92 75.36 62.80 62.80 87.92 75.36 62.80 50.24 75.36 62.80 62.80 62.80 87.92 75.36 62.80 50.24 75.36 50.24 50.24 50.24 87.92 75.36 62.80 62.80 75.36 62.80 62.80 62.80 87.92 75.36 62.80 62.80 75.36 50.24 50.24 50.24 75.36 62.80 50.24 50.24 75.36 62.80 62.80 62.80 75.36 62.80 62.80 62.80 62.80 50.24 50.24 50.24 75.36 62.80 62.80 62.80 75.36 62.80 62.80 62.80 75.36 62.80 50.24 50.24

 Perhitungan persen radang dan persen hambat radang

1. Perhitungan persen radang a. Persen radang Dosis I pada menit ke 60 Dik: Vt1 = 100,48 μL Vo1 = 62,80 μL % radang

𝑉𝑡−𝑉0

= =

𝑉0

x 100%

100,48−62,80 62,80

x 100%

= 60 %

91

Dik: Vt2 = 100,48 μL Vo2 = 50,24 μL % radang

= =

𝑉𝑡−𝑉0 𝑉0

x 100%

100,48−50,24 50,24

x 100%

= 100 % Dik: Vt3 = 87,92 μL Vo3 = 62,80 μL % radang

= =

𝑉𝑡−𝑉0 𝑉0

x 100%

87,92−62,80 62,80

x 100%

= 40 % Dik: Vt4 = 100,48 μL Vo4 = 50,24 μL % radang

= =

𝑉𝑡−𝑉0 𝑉0

x 100%

100,48−50,24 50,24

x 100%

= 100 %

% radang rata-rata

= =

%𝑟𝑎𝑑𝑎𝑛𝑔1+%𝑟𝑎𝑑𝑎𝑛𝑔2+%𝑟𝑎𝑑𝑎𝑛𝑔3+%𝑟𝑎𝑑𝑎𝑛𝑔4 4 60%+100%+40%+100% 4

= 75% b. Persen radang kontrol negatif pada menit ke 60 Dik: Vt1 = 100,48 μL Vo1 = 50,24 μL % radang

= =

𝑉𝑡−𝑉0 𝑉0

x 100%

100,48−50,24 50,24

x 100%

= 100 % 92

Dik: Vt2 = 100,48 μL Vo2 = 50,24 μL % radang

= =

𝑉𝑡−𝑉0 𝑉0

x 100%

100,48−50,24 50,24

x 100%

= 100 % Dik: Vt3 = 113,04 μL Vo3 = 62,80 μL % radang

𝑉𝑡−𝑉0

= =

𝑉0

x 100%

113,04−62,08 62,08

x 100%

= 80 % Dik: Vt4 = 113,04 μL Vo4 = 62,80 μL % radang

= =

𝑉𝑡−𝑉0 𝑉0

x 100%

113,04−62,08 62,08

x 100%

= 80 %

% radang rata-rata

= =

%𝑟𝑎𝑑𝑎𝑛𝑔1+%𝑟𝑎𝑑𝑎𝑛𝑔2+%𝑟𝑎𝑑𝑎𝑛𝑔3+%𝑟𝑎𝑑𝑎𝑛𝑔4 4 100%+100%+80%+80% 4

= 90%

93

Tabel 6. Persen Udem Telapak Kaki Mencit Kelompok K– Na.CMC K + Na Diklofenak 50 mg Dosis I 100 mg/KgBB Dosis II 200 mg/KgBB Dosis III 300 mg/KgBB Dosis IV 400 mg/KgBB

Kelompok Kontrol Kontrol + Dosis I Dosis II Dosis III Dosis IV

%udem 60 100 100 80 80 75 75 60 100 60 100 40 100 75 60 60 60 75 100 60 40 100 60 40 75

%udem 120 100 100 80 80 50 50 40 75 60 100 40 100 75 60 60 60 75 75 60 40 75 60 40 75

%udem 180 125 100 80 80 25 25 20 50 40 75 20 75 50 40 20 40 50 50 20 20 25 20 20 50

%udem 240 100 75 60 60 0 0 0 25 20 50 0 50 0 20 0 20 0 25 0 0 0 0 0 25

%udem 300 75 50 40 40 0 0 0 0 0 25 0 25 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

%udem 360 50 25 20 20 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Persen udem rata-rata

60

120

180

240

300

360

90 77,5 75 63,75 68,75 68,75

90 53,75 75 63,75 62,5 62,5

96,25 30 52,5 37,5 35 28,75

73,75 6,25 30 10 6,25 6,25

51,25 0 12,5 0 0 0

28,75 0 0 0 0 0

94

2. Persen hambat radang Persen hambat Dosis I pada menit ke-60 Dik:

a (persen radang kontrol negatif) = 90 % b (persen radang kelompok uji) = 75 % % Hambat radang

= =

𝑎−𝑏 𝑏

x 100%

90−75 90

x 100%

= 16,6 % Tabel 7 . Persen Hambat Radang Kelompok

%hambat menit ke 60

%hambat menit ke 120

%hambat menit ke 180

%hambat menit ke 240

%hambat menit ke 300

%hambat menit ke 360

Rata-rata

Kontrol + Na. Diklofenak

13,88

40,27

66,83

91,52

100

100

68,75

Dosis I 100 mg/KgBB

16,6

16,6

45,45

59,32

75,6

100

52,28

Dosis II 200 mg/KgBB

29,16

29,16

61,03

86,44

100

100

67,63

Dosis III 300 mg/KgBB

23,61

30,55

63,63

91,52

100

100

68,21

Dosis IV 400 mg/KgBB

23,61

30,55

70,12

91,52

100

100

69,3

95

Lampiran 9. Analisis Data Hasil Pengujian Antipiretik dan Antiinflamasi Hipotesis: H0 : Tidak terdapat perbedaan yang signifikan efek antipiretik dan antiinflamasi ekstrak etanol buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) RM. Smith) terhadap mencit jantan galur Balb/c. pada keseluruhan kelompok H1 : Terdapat perbedaan yang signifikan efek antipiretik dan antiinflamasi ekstrak etanol buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) RM. Smith) terhadap mencit jantan galur Balb/c. pada keseluruhan kelompok Kriteria Pengujian: Bila nilai sig < 0,05 H0 ditolak, H1 diterima, berarti terdapat perbedaan signifikan efek antipiretik dan antiinflamasi pada keseluruhan kelompok Bila nilai sig > 0,05 H0 diterima, H1 ditolak, berarti tidak terdapat perbedaan signifikan efek antipiretik dan antiinflamasi pada keseluruhan kelompok. Uji Kruskal Wallis Tujuan : Untuk mengetahui apakah ada tidaknya perbedaan secara signifikan keseluruhan kelompok. Uji Mann-whitney Tujuan : Untuk melihat apakah terdapat perbedaan efek antipiretik dan antiinflamasi yang signifikan antar kelompok perlakuan.

96

1. Analisis Data Hasil Pengujian Antipiretik a. Kruskal wallis  Penurunan rata-rata Suhu rektal Menit Tujuan : Untuk mengetahui apakah ada tidaknya perbedaan secara signifikan keseluruhan kelompok. Ranks

rata-rata

Kosentrasi

N

Mean Rank

kontrol -

6

4.50

kontrol +

6

23.75

100 mg/kg BB

6

16.75

200 mg/kg BB

6

19.00

300 mg/kg BB

6

22.00

400 mg/kg BB

6

25.00

Total

36

Test Statisticsa,b rata-rata Chi-Square

15.219

df

5

Asymp. Sig.

.009

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: kosentrasi

Kesimpulan

: Nilai sig. 0,009 < 0,05 sehingga Ho ditolak yang artinya terdapat perbedaan signifikan efek antipiretik pada keseluruhan data pada tiap kelompok.

97

Uji Kruskal Wallis dilakukan untuk melihat perbedaan antar kelompok perlakuan secara keseluruhan. Jika ingin melihat perbedaan dari masing-masing kelompok perlakuan dengan kelompok perlakuan lainnya, maka perlu dilakukan pengujian lanjutan seperti uji Mann-Whitney. b. Uji Mann-Whitney Tujuan :

Untuk melihat apakah terdapat perbedaan efek antipiretik yang signifikan antar kelompok perlakuan.

Dosis

Mann whitney

Kontrol - Na.CMC

Kontrol + PCT

100 mg/KgBB

200 mg/KgBB

300 mg/KgBB

Dosis

Sig.

Kontrol + PCT

0.02(*)

100 mg/KgBB

0.015(*)

200 mg/KgBB

0.02(*)

300 mg/KgBB

0.02(*)

400 mg/KgBB

0.02(*)

Kontrol - Na.CMC 100 mg/KgBB

0.02(*) 0.240

200 mg/KgBB

0.485

300 mg/KgBB

0.699

400 mg/KgBB Kontrol - Na.CMC Kontrol + PCT 200 mg/KgBB 300 mg/KgBB 400 mg/KgBB

0.818 0.015(*) 0.240 0.699 0.394 0.134

Kontrol - Na.CMC Kontrol + PCT

0.02(*) 0.485

100 mg/KgBB

0.699

300 mg/KgBB 400 mg/KgBB Kontrol - Na.CMC Kontrol + PCT

0.699 0.310 0.02(*) 0.699 98

400 mg/KgBB

100 mg/KgBB 200 mg/KgBB 400 mg/KgBB Kontrol - Na.CMC Kontrol + PCT 100 mg/KgBB

0.394 0.699 0.699 0.02(*) 0.818 0.134

200 mg/KgBB

0.310

300 mg/KgBB

0.699

Keterangan : Jika terdapat tanda (*) artinya terdapat perbedaan yang signifikan antar kelompok dan jika tidak ada tanda (*) maka tidak ada perbedaan yang signifikan. Contoh : Kelompok Kontrol – Na.CMC menunjukkan terdapat perbedaan signifikan terhadap kelompok Kontrol + PCT, dosis 100 mg/KgBB, 200 mg/KgBB, 300 mg/KgBB, dan 400 mg/KgBB. 2. Analisis Data Hasil Pengujian Antiinflamasi a. Kruskal wallis Tujuan : Untuk mengetahui apakah ada tidaknya perbedaan secara signifikan keseluruhan kelompok. Ranks

rata-rata

Kosentrasi

N

Mean Rank

kontrol – Na.CMC

6

3.50

kontrol + Na.Diklofenak

6

22.33

100 mg/kg BB

6

17.83

200 mg/kg BB

6

22.00

300 mg/kg BB

6

22.50

400 mg/kg BB

6

22.83

Total

36

99

Test Statisticsa,b rata-rata Chi-Square

15.855

df

5

Asymp. Sig.

.007

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: kosentrasi Kesimpulan

: Nilai sig. 0,007 < 0,05 sehingga Ho ditolak yang artinya terdapat perbedaan signifikan efek antiinflamasi pada keseluruhan data pada tiap kelompok.

Uji Kruskal Wallis dilakukan untuk melihat perbedaan antar kelompok perlakuan secara keseluruhan. Jika ingin melihat perbedaan dari masing-masing kelompok perlakuan dengan kelompok perlakuan lainnya, maka perlu dilakukan pengujian lanjutan seperti uji Mann-Whitney. b. Uji Mann-Whitney Tujuan :

Untuk melihat apakah terdapat perbedaan efek antiinflamasi yang signifikan antar kelompok perlakuan. Dosis

Mann whitney

Kontrol - Na.CMC

Kontrol + Na.Diklofenak

Dosis

Sig.

Kontrol + Na.Diklofenak

0.02(*)

100 mg/KgBB

0.02(*)

200 mg/KgBB

0.02(*)

300 mg/KgBB

0.02(*)

400 mg/KgBB

0.02(*)

Kontrol - Na.CMC

0.02(*)

100 mg/KgBB

0.589

200 mg/KgBB

0.937

100

100 mg/KgBB

200 mg/KgBB

300 mg/KgBB

400 mg/KgBB

300 mg/KgBB

0.937

400 mg/KgBB

0.937

Kontrol - Na.CMC

0.02(*)

Kontrol + Na.Diklofenak

0.589

200 mg/KgBB

0.394

300 mg/KgBB

0.394

400 mg/KgBB

0.394

Kontrol - Na.CMC

0.02(*)

Kontrol + Na.Diklofenak

0.937

100 mg/KgBB

0.394

300 mg/KgBB

0.937

400 mg/KgBB

0.937

Kontrol - Na.CMC

0.02(*)

Kontrol + Na.Diklofenak

0.937

100 mg/KgBB

0.394

200 mg/KgBB

0.937

400 mg/KgBB Kontrol - Na.CMC

0.937 0.02(*)

Kontrol + Na.Diklofenak

0.937

100 mg/KgBB

0.394

200 mg/KgBB

0.937

300 mg/KgBB

0.937

Keterangan : Jika terdapat tanda (*) artinya terdapat perbedaan yang signifikan antar kelompok dan jika tidak ada tanda (*) maka tidak ada perbedaan yang signifikan. Contoh : Kelompok Kontrol – Na.CMC menunjukkan terdapat perbedaan signifikan pada kelompok Kontrol + PCT, dosis 100 mg/KgBB, 200 mg/KgBB, 300 mg/KgBB, dan 400 mg/KgBB.

101

Lampiran 10. Dokumentasi Penelitian

Pengambilan Sampel

Preparasi Sampel

102

Ekstraksi

Kadar sari larut air

Kadar Abu

Kadar Sari larut etanol

Kadar Air

Karakterisasi Ekstrak

103

Aklimatisasi hewan uji

Pengujian Antipiretik

Pengujian Antiinflamasi

104