Sars
This document was uploaded by user and they confirmed that they have the permission to share it. If you are author or own the copyright of this book, please report to us by using this DMCA report form. Report DMCA
Overview
Download & View Sars as PDF for free.
More details
- Words: 912
- Pages: 34
SARS
Prof. Dr. José Raúl Oubiña
Dto. Microbiología Ciclo lectivo 2004 www.mancia.com.ar
El inicio de una enfermedad emergente
A FINES DE 2002 Provincia de Guangdong
China
Hong Kong
ENFERMEDAD RESPIRATORIA FEBRIL SEVERA
Vietnam Canadá
SARS Severe Acute Respiratory Syndrome MARZO 2003
Enfermedad P. Incubación:. Habitualmente 2-7 (hasta 10) días Síntomas (ordenados según frecuencia) •Fiebre (mayor de 38ºC) •Tos •Mialgia •Disnea •Diarrea
SARS: laboratorio •Leucopenia con linfopenia •Trombocitopenia •Aumento de TGP y TGO •Aumento de LDH y CPK •Proteína C reactiva: positividad asociada a casos fatales
Detección del coronavirus (Co-V) asociado a SARS (implicancias en la transmisión)
•Pulmón •Tráquea •Intestino delgado •Riñón •Glándulas sudoríparas
POSTULADOS DE HENLE - KOCH
1.- El agente en cuestión puede ser cultivado (aislado) a partir de las lesiones de la enfermedad 2.- El microorganismo puede crecer en medio puro de cultivo 3.- Los microorganismos producen la enfermedad cuando se los introduce en un huésped apropiado 4.- El microorganismo puede ser re-cultivado (aislado) a partir de lesiones de del dicho huésped enfermo.
¿Qué buscar?
¿Dónde buscar?
PACIENTE CON SARS
¿Cómo buscar?
¿Cuándo buscar?
¿Qué buscar? PATÓGENOS DEL TRACTO RESPIRATORIO BAJO: BACTERIAS, CLAMIDIAS, RICKETTSIAS y VIRUS (algunos ejemplos) •
Orthomyxoiviridae (Influenza)
•
Mastadenoviridae (Adenovirus)
•
Herpetoviridae
•
Picornaviridae
•
Bunyaviridae (Hantavirus)
•
Arenaviridae
•
Paramyxoviridae
(Metapneumovirus)
¿Dónde buscar?
SANGRE y SUERO MATERIAL DE HISOPADO NASOFARÍNGEO MATERIAL DE HISOPADO O LAVADO OROFARÍNGEO TEJIDO DE ÓRGANOS DE AUTOPSIA HECES (?)
¿Cómo buscar? INOCULACIÓN EN : CULTIVOS CELULARES ANIMALES DE LABORATORIO (Primates y –recientemente- ratones Balb por vía intra nasal y oral Emerging Infetious Diseases, 2004)
INFECTIVIDAD
Monocapa de células Vero E6 infectada con la muestra de un paciente con SARS: A- Efecto citopático
B- Inmunofluorescencia indirecta realizada con suero de convalecientes
Características ultraestructurales del coronavirus asociado al SARS: A- Partícula brotando del RER y partícula envuelta
B- Tinción negativa de una particula viral completa con características morfológicas de la familia Coronaviridae
Esquema de la partícula de Co-V asociado al SARS
Características ultraestructurales de una célula infectada con coronavirus en fluído de lavado bronquioalveolar de un paciente con SARS Partículas virales intra y extracelulares de 80 a 140 nm
Detección genómica del Co-V asociado al SARS RT-PCR con cebadores que hibridan en regiones conservadas del gen de la polimerasa de otros Coronavirus humanos conocidos se pudo detectar el RNA de un nuevo virus
RT-PCR
DIAGNÓSTICO EN MUESTRAS DE PACIENTES CON SARS
TEMPLADO DE DNA para SECUENCIACIÓN NUCLEOTIDICA
Comparación del Coronavirus asociado al SARS con otros coronavirus:
humanos (HCoV-229E y HCoV- OC43), caninos, felinos, porcinos, bovinos, aviares, murinos y de rata.
SUERO DE CONVALECIENTE DE SARS - Ac POS
ANTICUERPOS MONOCLONALES CONTRA DIFERENTES VIRUS - Ac
NEG
ELISA
NEG SUERO DE DONANTE DE SANGRE - Ac
EXTRACTO DE CÉLULAS VERO E6 INOCULADAS CON MUESTRA DE PACIENTE CON SARS Ag
Histopalogía del pulmón de un paciente con SARS: A- Daño alveolar, infiltrado inflamatorio, membrana hialina
B- Células sinciciales multinucleadas sin inclusiones virales
Inmunohistoquímica sobre células Vero E6 infectadas con Coronavirus asociado al SARS, tinción en membrana y citoplasma
¿Cuándo buscar?
¿Qué buscar? AGENTE MÉTODO DIRECTO
RESPUESTA INMUNE MÉTODO INDIRECTO
SARS: el inicio de una virosis emergente
Lancet 361: 17879-85, 2003.
Existencia de al menos 2 Genogrupos del Coronavirus asociado al SARS
Las secuencias nucleotídicas de las cepas de Beijing (BJ; China) y Hong Kong (HK) se agrupan separadamente de las de Toronto (TOR) Singapur (Sing) y la prototipo URBANI.
Epidemiología (I)
Diseminación por microgotas y posiblemente aerosoles provenientes de individuos infectados. En el primer semestre de 2003 hubo: 8422 casos 908 muertes 29 países afectados Se desconoce el reservorio, aunque se encontraron coronavirus similares al agente etiológico del SARS en humanos, en civetas (palm civets) y perros mapaches (raccoon dogs).
Civeta
Racoon dog (perro mapache)
調査分析 •分布調査 •個体数調査 •生息環境調査 •食性調査 •ラジオテレメトリー調査 •標識装着のための生体捕獲 •狩猟・駆除個体分析 •年齢査定 •繁殖状況調査 •遺伝分析 •被害調査 •被害防除試験 •調査・解析手法の開発
データ解析 •個体群解析 •行動圏解析 •生息環境解析 •ＧＩＳを用いた各種解析 野生動物管理に関わるｺﾝｻﾙﾃｨﾝｸﾞ 普及活動 •パンフレット作成 •博物館等企画・展示 •講演
Epidemiología (II)
Co-V SARS en suspensión: viable hasta 9 días (vs 6 del HCoV 229E) Co-V SARS desecado: viable hasta 6 días (vs 1 día del HCoV 229E)
Epidemiología (III) Medidas de precaución
• Un estudio de caso-control realizado en 5 hospitales de Hong Kong incluyó 241 miembros del staff no infectado y 13 infectados, todos los cuales tuvieron una exposición documentada a 11 pacientes índice con SARS. Se monitoreó en todos los participantes la utilidad del uso de máscara, guantes, camisolín y lavado frecuente de manos. • Los 69 miembros del staff que reportaron la observancia de las 4 medidas no se infectaron, mientras que todo el personal infectado reportó la omisión de al menos una medida (p= 0,0224). Lancet, 2003
SARS 2004: vacunas en experimentación •Vacuna inactivada con beta propiolactona (induce Acs. en ratones).
•Vacuna a DNA con calreticulina (aumenta expresión de HLA-I) y proteína N de SARS. •Vacuna a DNA codificante de proteína de espícula de CoV – asociado al SARS (induce Acs e Inmunidad celular en ratones). •Vacuna de Parainfluenza atenuada heteróloga y quimérica (Bovine Parainfluenza Virus 3) conteniendo espícula de Co-V asociado al SARS (en monos, inhibe diseminación del Co-V SARS).
SARS 2004: Tratamiento para el Co-V asociado al SARS •No hay aún consenso.
•Parecerían promisorios los ensayos iniciales con: Interferón alfa PEG (en primates Cynomolgus) Nelfinavir (inhibidor de proteasa para HIV; in vitro) siRNA (small interferring RNA; in vitro)
Estudios de patogénesis experimental
Ratones Balb infectados por vía intranasal y oral con CoV-asociado al SARS Desarrollan menor ganancia de peso, se detecta en ellos RNA viral y anticuerpos específicos.
Utilidad para estudios de: profilaxis terapéutica (Emerging Infectious Diseases Julio 2004)
Prof. Dr. José Raúl Oubiña
Dto. Microbiología Ciclo lectivo 2004 www.mancia.com.ar
El inicio de una enfermedad emergente
A FINES DE 2002 Provincia de Guangdong
China
Hong Kong
ENFERMEDAD RESPIRATORIA FEBRIL SEVERA
Vietnam Canadá
SARS Severe Acute Respiratory Syndrome MARZO 2003
Enfermedad P. Incubación:. Habitualmente 2-7 (hasta 10) días Síntomas (ordenados según frecuencia) •Fiebre (mayor de 38ºC) •Tos •Mialgia •Disnea •Diarrea
SARS: laboratorio •Leucopenia con linfopenia •Trombocitopenia •Aumento de TGP y TGO •Aumento de LDH y CPK •Proteína C reactiva: positividad asociada a casos fatales
Detección del coronavirus (Co-V) asociado a SARS (implicancias en la transmisión)
•Pulmón •Tráquea •Intestino delgado •Riñón •Glándulas sudoríparas
POSTULADOS DE HENLE - KOCH
1.- El agente en cuestión puede ser cultivado (aislado) a partir de las lesiones de la enfermedad 2.- El microorganismo puede crecer en medio puro de cultivo 3.- Los microorganismos producen la enfermedad cuando se los introduce en un huésped apropiado 4.- El microorganismo puede ser re-cultivado (aislado) a partir de lesiones de del dicho huésped enfermo.
¿Qué buscar?
¿Dónde buscar?
PACIENTE CON SARS
¿Cómo buscar?
¿Cuándo buscar?
¿Qué buscar? PATÓGENOS DEL TRACTO RESPIRATORIO BAJO: BACTERIAS, CLAMIDIAS, RICKETTSIAS y VIRUS (algunos ejemplos) •
Orthomyxoiviridae (Influenza)
•
Mastadenoviridae (Adenovirus)
•
Herpetoviridae
•
Picornaviridae
•
Bunyaviridae (Hantavirus)
•
Arenaviridae
•
Paramyxoviridae
(Metapneumovirus)
¿Dónde buscar?
SANGRE y SUERO MATERIAL DE HISOPADO NASOFARÍNGEO MATERIAL DE HISOPADO O LAVADO OROFARÍNGEO TEJIDO DE ÓRGANOS DE AUTOPSIA HECES (?)
¿Cómo buscar? INOCULACIÓN EN : CULTIVOS CELULARES ANIMALES DE LABORATORIO (Primates y –recientemente- ratones Balb por vía intra nasal y oral Emerging Infetious Diseases, 2004)
INFECTIVIDAD
Monocapa de células Vero E6 infectada con la muestra de un paciente con SARS: A- Efecto citopático
B- Inmunofluorescencia indirecta realizada con suero de convalecientes
Características ultraestructurales del coronavirus asociado al SARS: A- Partícula brotando del RER y partícula envuelta
B- Tinción negativa de una particula viral completa con características morfológicas de la familia Coronaviridae
Esquema de la partícula de Co-V asociado al SARS
Características ultraestructurales de una célula infectada con coronavirus en fluído de lavado bronquioalveolar de un paciente con SARS Partículas virales intra y extracelulares de 80 a 140 nm
Detección genómica del Co-V asociado al SARS RT-PCR con cebadores que hibridan en regiones conservadas del gen de la polimerasa de otros Coronavirus humanos conocidos se pudo detectar el RNA de un nuevo virus
RT-PCR
DIAGNÓSTICO EN MUESTRAS DE PACIENTES CON SARS
TEMPLADO DE DNA para SECUENCIACIÓN NUCLEOTIDICA
Comparación del Coronavirus asociado al SARS con otros coronavirus:
humanos (HCoV-229E y HCoV- OC43), caninos, felinos, porcinos, bovinos, aviares, murinos y de rata.
SUERO DE CONVALECIENTE DE SARS - Ac POS
ANTICUERPOS MONOCLONALES CONTRA DIFERENTES VIRUS - Ac
NEG
ELISA
NEG SUERO DE DONANTE DE SANGRE - Ac
EXTRACTO DE CÉLULAS VERO E6 INOCULADAS CON MUESTRA DE PACIENTE CON SARS Ag
Histopalogía del pulmón de un paciente con SARS: A- Daño alveolar, infiltrado inflamatorio, membrana hialina
B- Células sinciciales multinucleadas sin inclusiones virales
Inmunohistoquímica sobre células Vero E6 infectadas con Coronavirus asociado al SARS, tinción en membrana y citoplasma
¿Cuándo buscar?
¿Qué buscar? AGENTE MÉTODO DIRECTO
RESPUESTA INMUNE MÉTODO INDIRECTO
SARS: el inicio de una virosis emergente
Lancet 361: 17879-85, 2003.
Existencia de al menos 2 Genogrupos del Coronavirus asociado al SARS
Las secuencias nucleotídicas de las cepas de Beijing (BJ; China) y Hong Kong (HK) se agrupan separadamente de las de Toronto (TOR) Singapur (Sing) y la prototipo URBANI.
Epidemiología (I)
Diseminación por microgotas y posiblemente aerosoles provenientes de individuos infectados. En el primer semestre de 2003 hubo: 8422 casos 908 muertes 29 países afectados Se desconoce el reservorio, aunque se encontraron coronavirus similares al agente etiológico del SARS en humanos, en civetas (palm civets) y perros mapaches (raccoon dogs).
Civeta
Racoon dog (perro mapache)
調査分析 •分布調査 •個体数調査 •生息環境調査 •食性調査 •ラジオテレメトリー調査 •標識装着のための生体捕獲 •狩猟・駆除個体分析 •年齢査定 •繁殖状況調査 •遺伝分析 •被害調査 •被害防除試験 •調査・解析手法の開発
データ解析 •個体群解析 •行動圏解析 •生息環境解析 •ＧＩＳを用いた各種解析 野生動物管理に関わるｺﾝｻﾙﾃｨﾝｸﾞ 普及活動 •パンフレット作成 •博物館等企画・展示 •講演
Epidemiología (II)
Co-V SARS en suspensión: viable hasta 9 días (vs 6 del HCoV 229E) Co-V SARS desecado: viable hasta 6 días (vs 1 día del HCoV 229E)
Epidemiología (III) Medidas de precaución
• Un estudio de caso-control realizado en 5 hospitales de Hong Kong incluyó 241 miembros del staff no infectado y 13 infectados, todos los cuales tuvieron una exposición documentada a 11 pacientes índice con SARS. Se monitoreó en todos los participantes la utilidad del uso de máscara, guantes, camisolín y lavado frecuente de manos. • Los 69 miembros del staff que reportaron la observancia de las 4 medidas no se infectaron, mientras que todo el personal infectado reportó la omisión de al menos una medida (p= 0,0224). Lancet, 2003
SARS 2004: vacunas en experimentación •Vacuna inactivada con beta propiolactona (induce Acs. en ratones).
•Vacuna a DNA con calreticulina (aumenta expresión de HLA-I) y proteína N de SARS. •Vacuna a DNA codificante de proteína de espícula de CoV – asociado al SARS (induce Acs e Inmunidad celular en ratones). •Vacuna de Parainfluenza atenuada heteróloga y quimérica (Bovine Parainfluenza Virus 3) conteniendo espícula de Co-V asociado al SARS (en monos, inhibe diseminación del Co-V SARS).
SARS 2004: Tratamiento para el Co-V asociado al SARS •No hay aún consenso.
•Parecerían promisorios los ensayos iniciales con: Interferón alfa PEG (en primates Cynomolgus) Nelfinavir (inhibidor de proteasa para HIV; in vitro) siRNA (small interferring RNA; in vitro)
Estudios de patogénesis experimental
Ratones Balb infectados por vía intranasal y oral con CoV-asociado al SARS Desarrollan menor ganancia de peso, se detecta en ellos RNA viral y anticuerpos específicos.
Utilidad para estudios de: profilaxis terapéutica (Emerging Infectious Diseases Julio 2004)
