Reporte-agua-recreacionales (1).docx

TecNM

SEP

TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO INSTITUTO TECNOLÓGICO DE ACAPULCO

MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS. REPORTE 6 “DETECCION DE ENTEROCOCOS FECALES, COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN AGUAS DE REACREACION POR EL METODO DE FILTRACION POR MEMBRANA”

M.C. MIGUEL ÁNGEL DIAZ ALDAY GRUPO A. 8:00 am- 10:00 am. OCAMPO RODRIGUEZ NELSY 15320596.- Desarrolló; Materiales, Metodología, Cálculos, Anexos. VERDIGUEL CEBRERO EMMANUEL 15320641.- Junto el trabajo, Desarrolló; Índice, Introducción, Objetivos. IBARROLA ARMIJO ARIOSHA 15320563.- Desarrolló; Resultados, Discusión de resultados, Conclusión. MORALES RAMIREZ KAREN LEOBARDA 15320591.- Desarrolló; Hipótesis, planteamiento del problema, Marco Teórico, Bibliografía.

ACAPULCO, GRO. ENERO – JUNIO DE 2018

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ÍNDICE

ÍNDICE................................................................................................................................ 2 INTRODUCCIÓN................................................................................................................4 OBJETIVOS........................................................................................................................ 4 

Objetivo general.....................................................................................................4



Objetivo especifico.................................................................................................4

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA................................................................................5 HIPÓTESIS......................................................................................................................... 5 

Hipótesis de trabajo...............................................................................................5



Hipótesis nula......................................................................................................... 5



Hipótesis alternativa...............................................................................................5

MARCO TEÓRICO............................................................................................................. 5 AGUAS DE RECREACIÓN.............................................................................................5 TÉCNICA DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA..............................................................6 VERIFICACIÓN BIOQUÍMICA........................................................................................8 PARÁMETROS MICROBIOLÓGICOS............................................................................8 PARÁMETROS FISICOQUÍMICOS.................................................................................9 COLOR, OLOR Y SABOR..............................................................................................9 pH.................................................................................................................................... 9 CONDUCTIVIDAD...........................................................................................................9 DUREZA........................................................................................................................ 10 SOLIDOS TOTALES.....................................................................................................10 CLORO RESIDUAL......................................................................................................10 TURBIDEZ.................................................................................................................... 10 COLIFORMES TOTALES Y FECALES.........................................................................11 ESTREPTOCOCOS FECALES.....................................................................................12 NOM-210-SSA1-2014...................................................................................................12 El recuento de enterococos intestinales se basa en la filtración de un volumen determinado de una muestra de agua, a través de un filtro de membrana con un tamaño de poro suficiente para retener las bacterias (0.45µm)..................................................12 NOM-250-SSA1-2014...................................................................................................12 MATERIALES................................................................................................................... 13 METODOLOGÍA............................................................................................................... 13

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CÁLCULOS...................................................................................................................... 16 

Conteo de colonias en agar verde brillante para coliformes totales....................16



Conteo de colonias en agar verde brillante para coliformes fecales....................16



Conteo de colonias en agar cuenta estándar para mesófilos..............................16

RESULTADOS.................................................................................................................. 17 

Análisis fisicoquímico..........................................................................................17



Análisis microbiológico........................................................................................18



Análisis organoléptico.........................................................................................20

DISCUSIÓN DE RESULTADOS.......................................................................................20 CONCLUSIÓN.................................................................................................................. 20 BIBLIOGRAFÍA................................................................................................................ 21 ANEXOS........................................................................................................................... 22 Índice de tablas............................................................................................................ 22 Índice de Ilustraciones................................................................................................22 EVIDENCIAS.................................................................................................................... 23

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INTRODUCCIÓN El agua se puede contaminar por medio de aguas negras provenientes de hogares, residuos urbanos arrastrados por las lluvias o bien por residuos industriales, afectando así, la salud de todo ser vivo que consuma de esta agua, las playas son el principal cuerpo receptor de esta contaminación, la contaminación no es solo con materia solida inorgánica sino también con microorganismos como los estrespectococos, los cuales son bacterias grampositivas, relativamente tolerantes Ilustración 1 Enterococos Fecalis al cloruro sódico y al pH alcalino. Según la NOM-210-SSA1-2014 indica que la presencia de estos microrganismos no debe de rebasar más de 60 UFC/mL de muestra y que este tipo de microorganismos nos sirve como indicador de materia fecal resiente en la muestra.

Ilustración 2 Filtración por membrana

OBJETIVOS  Objetivo general Determinación e identificación de la presencia de Enterococos fecales, Coliformes fecales y totales, en la laguna de Tecomate basándonos en las NOM-210-SSA120014 y la NOM-250-SSA1-2014.  Objetivo especifico  El alumno aprenderá el método de filtración por membrana.  Realizar correctamente la determinación de enterococos fecalis.  Aprender la normatividad correspondiente al análisis de aguas.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Las enfermedades bacterianas, parasitarias, virales y químicas tienen origen en la transmisión de estos agentes por el agua ya que adquieren una especial 1

connotación sanitaria cuando las poblaciones con inadecuado suministro del agua o aquellas comunidades que a través de muchos años han carecido recurso hídrico necesario para la vida del hombre son escasos por diferentes factores. HIPÓTESIS  Hipótesis de trabajo Se realizará un análisis microbiológico y fisicoquímico en muestra de la laguna tecomate situada en San Marcos, Gro. Para determinar microorganismos patógenos causante de enfermedades mediante la técnica filtración por membrana.  Hipótesis nula

El agua de la laguna Tecomate no presenta microorganismos patógenos en las pruebas microbiológicas realizadas.  Hipótesis alternativa

El agua de la laguna Tecomate presenta microorganismos patógenos debido a la contaminación de esta. MARCO TEÓRICO La contaminación de los cuerpos naturales de agua es una problemática que se presenta en la actualidad, principalmente en los países en vías de desarrollo, debido a que los desechos domésticos e industriales se vierten a estos ecosistemas acuáticos sin tratamiento previo o pobremente tratados y por lo que constituyen una fuente constante de deterioro del medio ambiente. Para determinar la calidad microbiológica de los ecosistemas acuáticos, se utilizan las bacterias indicadoras de contaminación fecal. Entre las más utilizadas se encuentran los coliformes totales y termotolerantes, aunque la abundancia de Escherichia coli se ha asociado más al riesgo sanitario en comparación con el resto de los coliformes. El empleo de estas bacterias para la evaluación de la calidad del agua ha sido aceptado ampliamente en países de clima templado. Los indicadores fecales tales como Escherichia coli mueren en aguas templadas, debido a factores como la temperatura, la disponibilidad de nutrientes y la depredación por protozoos. Sin embargo, en aguas tropicales numerosos estudios han mostrado resultados cuestionables en cuanto a la factibilidad de utilizar estos microorganismos para el monitoreo de la calidad de las aguas. AGUAS DE RECREACIÓN Si bien el uso recreativo de las aguas dulces y costeras y las de piscinas y balnearios puede ser muy beneficioso para la salud y el bienestar de las personas, también entraña riesgos derivados de la exposición a la contaminación y riesgos físicos como los ahogamientos y otras lesiones.

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Ilustración 3 Aguas de recreación

La OMS ha publicado las Directrices para ambientes seguros en aguas recreativas (Guidelines for Safe Recreational Water Environment), que constan de dos volúmenes: el volumen 1, dedicado a las aguas costeras y aguas dulces, y el volumen 2, dedicado a las piscinas, los balnearios y los ambientes de agua recreativa similares.

Las Directrices resumen los riesgos para los bañistas y establecen un enfoque basado en los riesgos para la gestión y el seguimiento de la calidad de las aguas recreativas mediante planes de salubridad. TÉCNICA DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA. La FM está completamente aceptada y aprobada como procedimiento para el monitoreo de la calidad del agua en muchos países. Este método consiste en la filtración de la muestra de agua a través de una membrana estéril con un poro de diámetro igual a 0,45 µm, el cual retiene las bacterias. Esta membrana se incuba sobre la superficie de un medio selectivo y posteriormente, se enumeran las colonias típicas crecidas sobre la membrana. Ilustración 4 Tecnica filtracion por membrana

Los medios de cultivo más utilizados para el análisis de agua potable son el medio m-Endo-Type en América del Norte y el medio Tergitol-TTC en Europa. Las bacterias coliformes forman colonias rojas con brillo metálico en medio Endo-Type que contiene lactosa (incubación 24 hrs a 35 ºC para coliformes totales) o colonias amarillo-naranjas en medio Tergitol-TTC (incubación 24 y 48 h a 37 y 44 ºC para coliformes totales y termotolerantes respectivamente). Otros medios muy utilizados son el agar McConkey y el medio Teepol. Comparaciones entre diferentes medios han mostrado que el agar m-Endo produce mayores conteos que el agar McConkey o el Teepol. La preocupación predominante acerca del empleo de esta técnica es lo difícil que se hace recuperar coliformes dañados o estresados. Una serie de factores físicos y químicos involucrados en el tratamiento del agua, pueden causar daños subletales a las bacterias coliformes, que dan como resultado un daño celular que provoca la incapacidad de las células para formar colonias en un medio selectivo. Sin embargo, este método presenta una significativa ventaja en comparación con la FTM, debido a su facilidad para examinar grandes volúmenes de muestras con mayor sensibilidad y confiabilidad. Además, esta técnica es útil

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para la mayoría de los laboratorios relacionados con la calidad de las aguas y es un método relativamente fácil de usar; sin embargo, no es lo suficientemente específico y son necesarios pasos adicionales para la confirmación de los resultados. La filtración por membrana es el mecanismo mediante el cual se atrapan en la superficie de la membrana microorganismos cuyo tamaño es mayor que el tamaño del poro 0.45 um, esto gracias a que una bomba eléctrica ejerce una presión diferencial sobre la muestra de agua haciendo que se filtre. Los contaminantes de tamaño menor que el específico del poro atraviesan la membrana o se quedan retenidos en su interior, las bacterias quedan en la superficie de la membrana y luego está es llevada a un medio de enriquecimiento selectivo, en el IDEAM se utiliza el medio de cultivo Chromocult el cual promueve el crecimiento y la identificación.

Ilustración 5 Filtro con milipore

https://www.microclar.com/medioscultivo.php

La ultrafiltración se emplea en una variedad de tratamientos de agua y aguas residuales, tanto en sistemas municipales como industriales. Principalmente es útil para separar macromoléculas, que incluyen virus, bacterias, almidones, proteínas, arcillas y pigmentos. Esta técnica permite la remoción microorganismos patógenos que pueden estar presentes en agua de reusó doméstico, fabricación de alimentos e incluso agua potable, que al entrar en contacto con la población son generadores de enfermedades. La filtración por membrana es una de las tecnologías más modernas utilizadas para la clarificación, concentración, separación de componentes, desalación y purificación de agua. Las membranas se utilizan para la obtención- creación de agua tratada procedente de fuentes subterráneas, superficiales o residuales. Actualmente las membranas son competitivas para las técnicas convencionales. El proceso de la separación por membrana se basa en la utilización de membranas semipermeables. Una membrana se puede considerar que es una barrera o película permeo selectiva entre dos medios fluidos, que permite la transferencia de determinados componentes de un medio al otro a través de ella y evita o restringe el paso de otros componentes

Ilustración 6 Diagrama técnica de filtración por membrana

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La muestra se introduce en un módulo donde existe una membrana. De este módulo emergen dos corrientes: el rechazado, que contendrá las sustancias que no han logrado pasar a través de la membrana y el permeado que contendrá las sustancias que sí pueden pasar a través de la membrana. VERIFICACIÓN BIOQUÍMICA Seleccionar hasta diez colonias típicas y no típicas procedentes de los medios de cultivo ensayados y se identificaron utilizando las siguientes pruebas bioquímicas: catalasa, oxidasa, motilidad, crecimiento en agar sangre de carnero, hemólisis, hidrólisis de la arginina, crecimiento en caldo con 6,5 % de cloruro de sodio, crecimiento en presencia de 40 % de bilis, crecimiento a 45 °C, crecimiento a pH 9,6, hidrólisis de la esculina, prueba de Voges-Proskaüer, fermentación de (piruvato, arabinosa, manitol, sorbitol, lactosa, sorbosa). PARÁMETROS MICROBIOLÓGICOS El mayor riesgo microbiano del agua es el relacionado con el consumo de agua contaminada con excrementos humanos o animales, aunque puede haber otras fuentes y vías de exposición significativas. Peligros microbianos relacionados con el agua de consumo Los riesgos para la salud relacionados con el agua de consumo más comunes y extendidos son las enfermedades infecciosas ocasionadas por agentes patógenos como bacterias, virus y parásitos (por ejemplo, protozoos y helmintos). La carga para la salud pública es función de la gravedad de la enfermedad o enfermedades relacionadas con los agentes patógenos, de su infectividad y de la población expuesta. Un fallo general del sistema de sistema de protección de la seguridad del abastecimiento de agua puede ocasionar una contaminación a gran escala del agua y, potencialmente, epidemias detectables. Otras averías y la contaminación leve, posiblemente en ocasiones repetidas, pueden ocasionar brotes esporádicos significativos de enfermedades, pero no es probable que las autoridades de vigilancia de la salud pública los asocien con la fuente de abastecimiento de agua de consumo. La evaluación y cuantificación de los riesgos puede ayudar a comprenderlos y gestionarlos, sobre todo los relacionados con casos de enfermedad esporádicos.1 Existen diversos tipos de agentes patógenos que pueden transmitirse por el agua de consumo contaminada. La gama de agentes patógenos cambia en función de factores variables como el aumento de las poblaciones de personas y animales, el incremento del uso de aguas residuales, los cambios de los hábitos de la población o de las intervenciones médicas, las migraciones y viajes de la población, y presiones selectivas que favorecen la aparición de agentes patógenos nuevos o mutantes, o de recombinaciones de los agentes patógenos existentes.

PARÁMETROS FISICOQUÍMICOS Dadas las propiedades fisico-químicas del agua, esta se comporta como un magnífico disolvente tanto de compuestos orgánicos como inorgánicos, ya sean de naturaleza polar o apolar; de forma que podemos encontrarnos en su seno una gran cantidad de sustancias sólidas, líquidas y gaseosas diferentes que modifican sus propiedades. 1

COLOR, OLOR Y SABOR Son lo que se denomina propiedades organolépticas o determinables por los sentidos. No suelen ser una medida precisa del nivel de contaminación, aunque su presencia es un indicio de que la depuración de un efluente no está siendo correcta. Tiene gran importancia en aguas potabilizarles, por el rechazo que puede darse en el consumidor al detectar colores, olores o sabores que no asocie con “agua pura”. pH Es una medida de la concentración de iones hidronio (H3O+) en la disolución. Se determina mediante electrometría de electrodo selectivo (pHmetro) conservando la muestra en frasco de polietileno o vidrio de borosilicato en nevera menos de 24 h, obteniendo la concentración en valores de pH comprendidosentre 1 y 14. Las aguas con valores de pH menores de 7 son aguas ácidas y favorecen la corrosión de las Ilustración 7 Kit cloro residual y pH piezas metálicas en contacto con ellas, y las que poseen valores mayores de 7 se denominan básicas y pueden producir precipitación de sales insolubles (incrustaciones). En las medidas de pH hay que tener presente que estas sufren variaciones con la temperatura y que los valores indicados son para 20 ºC. El término pH representa la concentración de iones de hidrógeno en una solución. En el agua, este factor es de excepcional importancia, principalmente en los procesos de tratamiento. En la rutina de los laboratorios de las estaciones de tratamiento él es medido y ajustado siempre que necesario para mejorar el proceso de coagulación/floculación del agua y también el control de la desinfección. El valor del pH varía de 0 a 14. Bajo 7 el agua es considerada ácida y sobre 7, alcalina. Agua con pH 7 es neutra. La Portaría nº 2.914/2011 del Ministerio de Salud recomienda que se mantenga el pH del agua entre 6,0 y 9,5 en el sistema de distribución. CONDUCTIVIDAD El agua pura se comporta como aislante eléctrico, siendo las sustancias en ella disueltas las que proporcionan al agua la capacidad de conducir la corriente eléctrica. Se determina mediante electrometría con un electrodo conductimétrico, expresándose el resultado en microsiemens cm-1 (μS cm-1). Es una medida indirecta de la cantidad de sólidos disueltos estando relacionados ambos. DUREZA Es otra forma de indicar el contenido iónico de un agua, refiriéndolo a la concentración total de iones calcio, magnesio, estroncio y bario, aunque se debe fundamentalmente a los dos primeros. La presencia de este tipo de iones en el

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agua suele ser de origen natural, y raramente antrópica. Se obtiene a partir de la determinación por separado del contenido en calcio y magnesio de la muestra o de manera conjunta por complexiometría con EDTA, expresándose en diferentes unidades, siendo mg de Ca2+ equivalente/L la indicada por la U.E. El problema de las aguas duras se centra en la formación de precipitados insolubles de carbonatos e hidróxidos que al depositarse sobre tuberías y equipos pueden causar problemas de funcionamiento en calderas de vapor, intercambiadores de calor, filtros. SOLIDOS TOTALES Los “sólidos totales” se definen como la materia que permanece como residuo después de la evaporación y secado a 103 - 105 °C. El valor de los sólidos totales incluye materias disueltas (sólidos disueltos totales: porción que pasa a través del filtro) y no disuelto (sólidos suspendidos totales: porción de sólidos totales retenidos por un filtro). Determinación de sólidos totales, en suspensión y disueltos en agua. En el agua que se encuentra en la naturaleza se pueden encontrar varias impurezas de forma suspendida o disuelta. En la cuantificación de los niveles de impurezas, el término sólido en suspensión describe las partículas en suspensión presentes en una muestra de agua. Prácticamente, estas partículas se definen por su imposibilidad de ser separadas de la muestra de aguas usando un filtro. Las partículas más pequeñas, incluyendo especies conteniendo cargas iónicas, se refieren como sólidos disueltos. En el agua potable es importante tomar en cuenta ambas concentraciones de sólidos disueltos y en suspensión. CLORO RESIDUAL El cloro es un producto químico utilizado en la desinfección del agua. Su medida es importante y sirve para controlar la dosificación que se está aplicando y también para seguir su evolución durante el tratamiento. La Portaría nº 2.914/2011 del Ministerio de Salud determina la obligatoriedad de mantenerse, al menos, 0,2 mg/l de cloro residual libre o 2 mg/l de cloro residual combinado en toda la extensión del sistema de distribución (reservatorio y red). También recomienda que la concentración máxima de cloro residual libre en cualquier punto del sistema de abastecimiento sea de 2 mg/l. Los principales productos utilizados son: hipoclorito de sodio y cloro gaseoso. TURBIDEZ La turbidez del agua se debe a la presencia de materiales sólidos en suspensión, que reducen su transparencia. Puede ser provocada también por la presencia de algas, plancton, materia orgánica y muchas otras sustancias como el cinco, hierro, manganeso y arena, resultantes del proceso natural de erosión o de desechos domésticos e industriales. Ilustración 8 Turbidez en aguas

La turbidez tiene su importancia en el proceso de tratamiento del agua. Agua con turbidez elevada y dependiendo de su naturaleza, forma flecos pesados que decantan más rápidamente que el agua con baja turbidez. También hay desventajas, como en el caso de la desinfección que puede

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ser dificultada por la protección que puede dar a los microorganismos en el contacto directo con los desinfectantes. Es un indicador sanitario y patrón organoléptico del agua de consumo humano COLIFORMES TOTALES Y FECALES Los coliformes totales incluyen una amplia variedad de bacilos aerobios y anaerobios facultativos, gramnegativos y no esporulantes capaces de proliferar en presencia de concentraciones relativamente altas de sales biliares fermentando la lactosa y produciendo ácido o aldehído en 24 h a 35–37 °C. Escherichia coli y los coliformes termotolerantes son un subgrupo del grupo de los coliformes totales que pueden fermentar la lactosa a temperaturas más altas (véase el apartado 11.6.2). Los coliformes totales producen, para fermentar la Ilustración 9 Coliformes Totales lactosa, la enzima β-galactosidasa. Tradicionalmente, se consideraba que las bacterias coliformes pertenecían a los géneros Escherichia, Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter, pero el grupo es más heterogéneo e incluye otros géneros como Serratia y Hafnia. El grupo de los coliformes totales incluye especies fecales y ambientales. Los coliformes fecales también denominados coliformes termotolerantes, llamados así porque soportan temperaturas hasta 45°C, comprenden un grupo muy reducido de microorganismos los cuales son indicadores de calidad, ya que son de origen fecal. En su mayoría están representados por el microorganismo E. coli pero se pueden encontrar, entre otros menos frecuentes, Citrobacter freundii y Klebsiella pneumoniae estos últimos hacen parte de los coliformes termotolerantes, pero su Ilustración 10 Coliformes Fecales origen se asocia normalmente con la vegetación y solo ocasionalmente aparecen en el intestino. Los coliformes fecales integran el grupo de los coliformes totales, pero se diferencian de los demás microorganismos que hacen parte de este grupo, en que son indol positivo, su rango de temperatura optima de crecimiento es muy amplio (hasta 45°C) y son mejores indicadores de higiene en alimentos y en aguas, la presencia de estos indica presencia de contaminación fecal de origen humano o animal, ya que las heces contienen dichos microorganismos presentes en la flora intestinal y de ellos entre un 90% y un 100% son E. coli mientras que en aguas y muestras de agua contaminada este porcentaje disminuye. ESTREPTOCOCOS FECALES Los Estreptococos fecales, actualizados taxonómicamente como Enterococos incluyen un número de especies que se encuentran en las heces de los humanos y animales de sangre caliente. Esto es muy importante, ya que la contaminación fecal causada por animales puede involucrar riesgos sanitarios, por lo que hay que tener en cuenta los microorganismos más abundantes y frecuentes en las heces de los animales, sobre todo en los de producción; vaca, cerdo, oveja, caballo, 1

Ilustración 11 Enterococcos Fecales

gallina y pato. En todos ellos se encuentran coliformes y Estreptococos fecales, aunque son más abundantes los estreptococos fecales. Los Estreptococos fecales no se multiplican en el medio ambiente, o si esto ocurre es solamente en raras ocasiones, son más persistentes en ambientes acuáticos y en suelos contaminados que E. coli. Son importantes en situaciones donde se sabe que hay contaminación fecal y no se detectan coliformes, como ocurre cuando las descargas son intermitentes o más antiguas, de modo que mueren los coliformes fecales y E. coli, y permanecen los estreptococos.

NOM-210-SSA1-2014 El recuento de enterococos intestinales se basa en la filtración de un volumen determinado de una muestra de agua, a través de un filtro de membrana con un tamaño de poro suficiente para retener las bacterias (0.45µm). Las colonias típicas de enterococos intestinales son elevadas de color rojo, marrón o rosa. Esta prueba tiene validez si se obtienen cajas que contengan entre 20 a 60 UFC. Una distribución desigual de las colonias o la presencia de microbiota competitiva, puede interferir con la diferenciación de colonias positivas debido a la difusión del color a las colonias adyacentes. NOM-250-SSA1-2014 Norma Oficial Mexicana PROY NOM-250-SSA1-2014, Agua para uso y consumo humano. Límites máximos permisibles de la calidad del agua y requisitos sanitarios que deben cumplir los sistemas de abastecimiento de agua públicos y privados, su control y vigilancia. Procedimiento sanitario de muestreo.

Parámetros

Unidades

Límite máximo permisible pH Unidades de pH 6,5-8,5 Turbiedad UTN 3,0 Tabla 1 Limites permisibles pH y turbiedad

Parámetros

Unidades

Límite máximo permisible Cloro residual libre mg/L 0,5-1,5 Yodo residual libre mg/L 0,5-1,5 Tabla 2 Limites permisibles cloro residual

1

Parámetros

Unidades

Coliformes fecales o E. coli

NMP/100 ml o UFC/100 ml

Límite máximo permisible Ausente

Tabla 3 Limites permisibles Coliformes fecales MATERIALES

Materiales 3 Matraces Erlenmeyer Papel Filtro Probeta Mecheros Cajas Petri

Equipos

Reactivos

Equipo de Filtración

Agar para Enterococos Agar Verde Bilis Brillante Agar Cuenta Estándar

Tabla 4. Materiales, Equipo y Reactivos

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METODOLOGÍA  Preparación del Agar para Enterococos

Pesar 0.42 g de Agar Para Enterococos

Vaciar a la caja Petri, y dejar Solidificar

Colocar la Membrana que ya fue usada como filtrante

Pesar 0.2 g de Agar Bacteorologico

Sacar de la auntoclve, y dejar enfriar.

Incubar a 35°c

Disolver en 10 mL de agua destilada los 0.42 de A.para enterococos y los 0.2 g de A. Bacteorologico.

Esterilizar a 120°C, durante 25 min.

Observar creciemiento de 24 a 48hrs

Diagrama 1. Preparación del Agar Para enterococos

 Preparación del Agar Verde Bilis Brillante Para Coliformes Totales

Pesar 0.315 g de Agar Verde Bilis Brillante

Colocar la Membrana que ya fue usada como filtrante

Incubar a 35°c

Disolver en 30 mL de agua Destilada

Vaciar a la caja Petri, y dejar Solidificar

Observar creciemiento de 24 a 48hrs

Esterilizar a 120°C, durante 25 min.

Sacar de la auntoclve, y dejar enfriar. 1 Diagrama 2. Preparación del Agar V.B.B

 Preparación de Agar Cuenta Estándar

Pesar 0.235 g de Agar Cuenta Estandar

Colocar la Membrana que ya fue usada como filtrante

Incubar a 35°c

Disolver en 10 mL de agua Destilada

Vaciar a la caja Petri, y dejar Solidificar

Observar creciemiento de 24 a 48hrs

Esterilizar a 120°C, durante 25 min.

Sacar de la auntoclve, y dejar enfriar. Diagrama 3. Preparación del Agar Cuenta Estándar

CÁLCULOS 

Conteo de colonias en agar verde brillante para coliformes totales 10 UFC – 5 mL x – 100 mL

x= 

( 100mL ) ( 10UFC ) =200 UFC /100 mL 5 mL

Conteo de colonias en agar verde brillante para coliformes fecales 8 UFC – 5 mL x – 100 mL

x=

( 100mL ) ( 8 UFC ) =160 UFC / 100 mL 5 mL

1



Conteo de colonias en agar cuenta estándar para mesófilos 140 UFC – 5 mL x – 100 mL

x=

( 100mL ) ( 140UFC ) =2800 UFC / 100 mL 5 mL

RESULTADOS 

Análisis fisicoquímico

Tabla 5. Análisis fisicoquímico

Parámetro

Límite Permisible

pH Sólidos totales Cloro Turbidez

6.5-8.5 Máx. 500 ppm 0.5- 1.5 3 UTN

Ilustración 12. Determinación de pH y Cloro residual

1

Resultados de la muestra 8.2 >2500 ppm 0 30 UTN

Ilustración 13. Determinación de sólidos totales



Análisis microbiológico

Tabla 6. Análisis microbiológico

Medio de cultivo Agar para enterococos

Parámetros óptimos

Agar cuenta estándar (mesófilos) Agar verde brillante (Coliformes totales) Agar verde brillante (Coliformes fecales)

Hasta 500 UFC/100 mL Límite de hasta 1000 UFC/100 mL Ausente

1

Resultado No hubo presencia de colonias 140 UFC/ 5mL = 2800 UFC/100mL 10 UFC/ 5mL = 200 UFC/100mL 8 UFC/ 5mL = 160 UFC/100mL

Ilustración 14- Colonias presentes en Agar para enterococos

Ilustración 15. Colonias presentes en Agar cuenta estándar (Mesófilos)

Ilustración 16. Colonias presentes en Agar verde brillante (Coliformes totales)

1

Ilustración 17. Colonias presentes en Agar verde brillante (Coliformes fecales)



Análisis organoléptico

Aguas de aspecto visual turbio con leve tonalidad verdosa. No se observan grasas, aceites, espumas ni otros materiales flotantes. En el día de muestreo se perciben ligeros olores desagradables.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS De los resultados podemos decir que la mayoría de los parámetros analizados, fisicoquímicos y microbiológicos, la mayoría superó los límites permisibles por norma, es decir que el agua contenida en la laguna de Tecomate tiene un indicio de no ser saludable para el ser humano, el agua podría usarse para riego y usos industriales, sin embargo, no se debe consumir el agua sin potabilizar ya que podría causar daños en el organismo del ser humano. CONCLUSIÓN No se observa contaminación química debido a que no presentó índices de cloro disuelto y su pH fue aceptable en el límite permisible. La coloración observada y medida, asociada a la turbidez, falta de transparencia, la elevada demanda de oxígeno y el color levemente verdoso indican un desarrollo importante de algas u otros organismos fotosintéticos. Los resultados microbiológicos son alamantes, excepto al nivel de coliformes totales presentes, ya que este fue aceptable, sin embargo, el agua la laguna de Tecomate no deja de ser un foco de infección. Esto significa que el agua presenta calidad aceptable para usos de recreación, observando la precaución de no ingerir. Su calidad es también aceptable para riego y para usos industriales. Se debe tener precaución en el consumo de peces desarrollados en estas aguas ya

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que esos alimentos pueden llegar a contener las bacterias antes mencionadas y provocar enfermedades al consumidor. El agua no es apta para consumo humano sin potabilizar. Para mejorar la calidad de la laguna se recomienda bajar el pH cada vez que supere el valor de 9 si es que esta llega a sobrepasar el límite. También es conveniente oxigenar la laguna, lo que se puede lograr en forma sencilla mediante agitación intensa de sus aguas. Métodos de oxigenación sugeridos: generar corrientes de intercambio de oxígeno mediante el bombeo de chorros de agua hacia la superficie de la laguna o agitación mediante un molino de paletas. Un aumento en el O2 disuelto y una disminución en la DBO se traducirán en una mejora para la laguna.

BIBLIOGRAFÍA  Procedimientos en Microbiología Clínica Recomendaciones de la Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica Editores: Emilia Cercenado y Rafael Cantón.  Camacho, A., M.Giles, A.Ortegón, M.Palao, B.Serrano y O.Velázquez. 2009. Técnicas para el Análisis Microbiológico de Alimentos. 2ª ed. Facultad de Química, UNAM. México.  artículo de revisión/review article Fecha de recepción: 23 de abril de 2015 Fecha de aceptación: 25 de noviembre de 2015 1 Docente investigador, Universidad Simón Bolívar. Barranquilla (Colombia).  Técnica cuenta en placa Camacho, A., M.Giles, A.Ortegón, M.Palao, B.Serrano y O.Velázquez. 2009. Técnicas para el Análisis Microbiológico de Alimentos. 2ª ed. Facultad de Química, UNAM. México.  NORMA Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014, Productos y servicios. Métodos de prueba microbiológicos. Determinación de microorganismos indicadores. Determinación de microorganismos patógenos.  http://www.who.int/water_sanitation_health/water-quality/recreational/es/  Norma Oficial Mexicana PROY NOM-250-SSA1-2014, Agua para uso y consumo humano. Límites máximos permisibles de la calidad del agua y requisitos sanitarios que deben cumplir los sistemas de abastecimiento de agua públicos y privados, su control y vigilancia. Procedimiento sanitario de muestreo. ANEXOS Índice de tablas Tabla 1 Limites permisibles pH y turbiedad.......................................................................12 Tabla 2 Limites permisibles cloro residual.........................................................................12 Tabla 3 Limites permisibles Coliformes fecales.................................................................13

1

Tabla 4. Materiales, Equipo y Reactivos............................................................................13 Tabla 5. Análisis fisicoquímico...........................................................................................16 Tabla 6. Análisis microbiológico.........................................................................................18

Índice de Ilustraciones Ilustración 1 Enterococos Fecalis........................................................................................3 Ilustración 2 Filtración por membrana.................................................................................4 Ilustración 3 Aguas de recreación.......................................................................................5 Ilustración 4 Tecnica filtracion por membrana......................................................................6 Ilustración 5 Filtro con milipore............................................................................................7 Ilustración 6 Diagrama técnica de filtración por membrana.................................................7 Ilustración 7 Kit cloro residual y pH.....................................................................................9 Ilustración 8 Turbidez en aguas.........................................................................................10 Ilustración 9 Coliformes Totales.........................................................................................11 Ilustración 10 Coliformes Fecales......................................................................................11 Ilustración 11 Enterococcos Fecales.................................................................................11 Ilustración 12. Determinación de pH y Cloro residual........................................................17 Ilustración 13. Determinación de sólidos totales................................................................17 Ilustración 14- Colonias presentes en Agar para enterococos...........................................18 Ilustración 15. Colonias presentes en Agar cuenta estándar (Mesófilos)..........................18 Ilustración 16. Colonias presentes en Agar verde brillante (Coliformes totales)................19 Ilustración 17. Colonias presentes en Agar verde brillante (Coliformes fecales)...............19 Ilustración 18. Filtración de membrana..............................................................................22 Ilustración 19.Filtración de membrana...............................................................................22 Ilustración 20. Unoculando membrana al medio selectivo.................................................23 Ilustración 21. Conteo de colonias....................................................................................23 Ilustración 22. Agua muestra.............................................................................................24

EVIDENCIAS

Ilustración 18. Filtración de membrana

1

Ilustración 19.Filtración de membrana

Ilustración 20. Unoculando membrana al medio selectivo

6

Ilustración 21. Conteo de colonias

1

Ilustración 22. Agua muestra

1