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Vicerrectoría Ciencias de la Salud ______________________________ Dirección Nacional de Tecnologías Educativas en Salud

Manual de prácticas Institucionales de la Escuela de Ciencias de la Salud — 2016 — Copyright © UVM México, 2015. Todos los Derechos Reservados.

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Formato Institucional de Prácticas Explícitas de Fundamentos Biológicos. -----PROCESOS METABÓLICOS -----

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Presentación Escuela de Ciencias de la Salud

ASIGNATURA:

Lic. en NUTRICIÓN

PROCESOS METABÓLICOS

CLAVE:

80L665

CRÉDITOS TOTALES:

10

HORAS TOTALES

8

TIPO DE CICLO:

SEMESTRAL

CICLO:

TERCER SEMESTRE

HORAS CON DOCENTE

6

HORAS DE PRÁCTICA

4

HORAS DE APRENDIZAJE INDEPENDIENTE

2

ÁREA CURRICULAR:

Fundamentos biológicos

Observaciones:

Aspectos Curriculares 1.- OBJETIVO GENERAL DE LA ASIGNATURA: El estudiante aplicará las diversas técnicas del estudio de procesos bioquímicos mediante el uso de las principales rutas metabólicas y las bases para describir los mecanismos fundamentales. 2.- OBJETIVO, PROPÓSITO O COMPETENCIA VINCULADA A LA PRÁCTICA: Reafirmar la información analizada en clase respecto a las diferentes vías metabólicas que actúan de forma concertada para el adecuado funcionamiento de un organismo. Con fundamento en los conocimientos previamente adquiridos sobre estructura y función de biomoléculas celulares, conocer y aplicar herramientas metodológicas que les permitan extraer, separar, e identificar carbohidratos, proteínas, lípidos y ácidos nucleicos. Apreciar el delicado balance en las condiciones necesarias para que las enzimas involucradas en las vías metabólicas funcionen eficientemente, y reconocer aquellos factores causantes de una alteración en su actividad. Integrar la información mecanística de las diferentes vías metabólicas en el funcionamiento de un organismo en condiciones fisiológicas y reconocer las vías que pueden estar alteradas en ciertas condiciones patológicas.

Competencias transversales genéricas Capacidad de análisis y síntesis Capacidad de organizar y planificar Capacidad de aprender Adquisición de conocimientos Capacidad de adaptación a nuevas situaciones Habilidades para trabajar en equipo Habilidades elementales en informática Capacidad de generar nuevas ideas Copyright © UVM México, 2015. Todos los Derechos Reservados.

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Inquietud por la calidad Conocimiento de la terminología básica de la Bioquímica

Competencias específicas Saber: 1. Véase contenidos de la asignatura 2. Fundamentos de las principales rutas metabólicas. 3. Conocimiento de los métodos de extracción e identificación de macromoléculas. Saber hacer: 1. Aplicación de procedimientos experimentales enfocados a la extracción e identificación de macromoléculas. 2. Habilidad en la preparación de soluciones. 3. Capacidad de realizar modificaciones en los procedimientos experimentales, de manera que, ante la carencia de algún reactivo, material o equipo, el estudiante pueda proponer alternativas viables que aseguren el desarrollo de la práctica, cumpliendo los objetivos propuestos. Ser: 1. Capacidad de utilización y reconocimiento del método científico 2. Capacidad y habilidad para resolver problemas 3.- CONTENIDOS: Practica 1. Introducción al laboratorio de Bioquímica………………………………………………..5 Practica 2. Reacciones de carbohidratos (metabolismo)………………………………………………7 Practica 3. Producción de ácido pirúvico durante la fermentación de la glucosa por la levadura y su identificación………………………………………………………………………………………………...9 Practica 4. Extracción de glucógeno…………………………………………………………………….11 Practica 5. Estudio del bombeo de protones por levaduras…………………………………………..14 Practica 6. Digestión enzimática de grasas……………………………………………………………..16 Practica 7. Extracción de lípidos a partir de yema de huevo………………………………………….19 Practica 8. Detección de colesterol………………………………………………………………………22 Practica 9. Determinación de la actividad de Fosfatasa Alcalina……….…………………………….25 Practica 10. Análisis cuantitativo de enzimas…………………………………………………………...27 Practica 11. Obtención de caseína a partir de leche…………………………………………………...30 Practica 12. Reacciones de identificación de aminoácidos y proteínas……………………………...32 Practica 13. Cromatografía de aminoácidos…………………………………………………………….35 Practica 14. Extracción de DNA a partir de levadura…………………………………………………..37 Practica 15. Determinación de Calcio en leche…………………………………………………………40 Practica 16. Integración Metabólica………………………………………………………………………43

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Práctica Número:

Duración (mins/horas):

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

ENCUADRE.

Nombre de la Práctica

Introducción al laboratorio de bioquímica

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: a) Conoce detalladamente el Reglamento de los Laboratorios Multidisciplinarios. b) Analiza las medidas de bioseguridad básicas aplicables a un laboratorio tipo II. c) Conoce detalladamente la programación de prácticas a realizar durante el semestre, así como las reglas internas para el trabajo de laboratorio de Bioquímica. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: NO REQUERIDO

Bitácora de trabajo Investigación previa

Equipo: NO REQUERIDO Sustancias: NO REQUERIDAS Actividades Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

1.

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio con 1 semana de anticipación sus materiales 2. El docente verifica que el alumno ingresó su solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h de anticipación 3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio entreguen el material a los alumnos contra vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, posterior al briefing 4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta con el 100% de los materiales solicitados 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de trabajo limpia y despejada

2.

3.

4.

5.

El alumno deberá revisar minuciosamente el reglamento para el trabajo en los laboratorios de ciencias de la salud. El alumno deberá hacer un recorrido rápido por los laboratorios de manera que ubique la localización de salidas de emergencia, extintores, regaderas de emergencia, botiquín de primeros auxilios y lavaojos. El alumno analizará las medidas de bioseguridad contenidas en el Manual de Bioseguridad en el laboratorio (OMS), enfocándose en aquellas aplicables a un laboratorio tipo II, así como al manejo de sustancias químicas peligrosas. El alumno revisará la programación de prácticas del semestre, se informará sobre las reglas internas para el trabajo en el laboratorio de Bioquímica y conocerá las formas de evaluación propuestas por el docente. Limpieza y orden del laboratorio

EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la cronología. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO INSTRUCCIONAL. Copyright © UVM México, 2015. Todos los Derechos Reservados.

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7. Llenado de bitácora electrónica: https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 DEBRIEFING (10 MINUTOS) 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de dudas. 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente): Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica. b) Investigar: reglamento para uso de los laboratorios de Ciencias de la Salud (disponible en el portal de UVM). c) Investigar: Manual de Bioseguridad en el laboratorio (OMS) Después de la práctica: a) Conocer detalladamente el reglamento de trabajo en el laboratorio, medidas de protección generales, ubicar salidas de emergencia, extintores, regaderas de emergencia, lavaojos y botiquín de primeros auxilios. b) Conocer las indicaciones básicas respecto al manejo de RPBI y para el manejo de sustancias químicas peligrosas. c) Conocer la programación de prácticas a realizar durante el semestre, las formas de evaluación y reglas internas de trabajo en el laboratorio. Método de Evaluación De la Práctica Participación en discusión y análisis grupal 20% Reporte de práctica 40% (Resumen del manual de Bioseguridad de la OMS enfocado a medidas de seguridad en un laboratorio tipo II y manejo de sustancias químicas peligrosas).

Del Aprendizaje Independiente Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Organización Mundial de la Salud. (2005). Manual de Bioseguridad en el Laboratorio. UVM. Reglamento para el trabajo en los laboratorios de Ciencias de la Salud. http://www.universidaduvm.mx/normatividad/reglamentos/Reg_laboratorios_CS_(reg-lic-012-1)est.pdf

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Práctica Número:

Duración (mins/horas):

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

3. Metabolismo de los hidratos de carbono

Nombre de la Práctica

REACCIONES DE CARBOHIDRATOS (METABOLISMO)

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: Identifica las características bioquímicas y químicas de los azucares y su participación oxido - reducción en algunos alimentos y como pueden afectar el metabolismo Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 5 matraces aforados de 10 mL 2 matraces aforados de 25 mL 1 matraz aforado de 50 mL 1 matraz aforado de 100 mL 5 pipetas graduadas de 5 mL 36 tubos de ensayo 5 vasos de precipitados de 10 mL 2 vasos de precipitados de 50 mL 4 vasos de precipitados de 100 mL 3 vasos de precipitados de 250 mL 1 gradilla 10 pipetas Pasteur 3 espátulas 2 propipetas

Bitácora de trabajo Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas) Investigación previa El estudiante debe llevar al laboratorio el siguiente material: 1 sobre de canderel 1 lata de refresco de dieta sin colorante 1 lata de refresco normal sin colorante 1 lata de jugo manzana Azúcar de mesa (5 g)

Equipo: Placa calefactora Balanza analítica Balanza digital o granataria Baño María Sustancias: Glucosa (0.5 g) Fructosa (0.5 g) Manosa (0.5 g) Sacarosa (0.5g) Sulfato de cobre (5.23 g) Tartrato de sodio y potasio (17.5 g) Hidróxido de sodio (5 g) Citrato de potasio (17.3 g) Carbonato de sodio anhidro (10 g) Agua destilada Actividades Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

Preparación de muestras: 1. Preparación de solución de glucosa al 5% (p/v) (10 mL) 2. Preparación de solución de fructosa al 5% (p/v) (10 mL) 3. Preparación de solución de manosa al 5% (p/v) (10 mL) 4. Preparación de solución de sacarosa al 5% (p/v) (10 mL) 5. Preparación de solución de Canderel al 1% (p/v) (25 mL) 6. Preparación de solución de azúcar de mesa al 5% (p/v) (25 mL)

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio con 1 semana de anticipación sus materiales

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El docente verifica que el alumno ingresó Preparación de Reactivos Reactivo de Fehling su solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h de anticipación  Solución A: 3.5 g de CuSO4 en agua y aforara a 50 ml 3. El docente verifica que los auxiliares de  Solución B: 17.5 g de Tartrato de Sodio y Potasio y 5g laboratorio entreguen el material a los de NaOH en agua y aforar a 50ml alumnos contra vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, Reactivo de Benedict posterior al briefing 4. El docente verifica que el alumno revise En 60 ml de agua disolver 17.3g de citrato de sodio y 10g de que cuenta con el 100% de los materiales Na2CO3 anhidro. Esta mezcla se solicitados añade lentamente y agitando una solución previamente 5. El docente verifica que el alumno tenga el preparada de 1.73g de CuSO4 área de trabajo limpia y despejada pentahidratado en 15mL de agua. La solución final se afora a 100mL EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA Procedimiento Experimental Prueba de Fehling 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos 1. Numera una serie de nueve tubos por duplicado a llevar la cronología. 2. Adiciona a cada tubo las cantidades indicadas en la 2. Provee Feedback descriptivo durante la siguiente tabla: práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. Tubos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica Sol. A 1 1 1 1 1 1 1 1 1 5. Verifica la Entrega de material limpio y mL completo. Sol. B 1 1 1 1 1 1 1 1 1 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO mL INSTRUCCIONAL. Glucosa 3 - - 7. Llenado de bitácora electrónica: Fructosa 3 - https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 Manosa 3 Sacarosa 3 DEBRIEFING (10 MINUTOS) Jugo 10 1. Recapitula con los alumnos los hechos Manzana ocurridos. RF N 10 2. Promueve la reflexión, discusión y RF dieta 10 resolución de dudas. Canderel 10 3. Verifica si se cumplió el propósito de Azúcar 10 aprendizaje. 2.

3. Calienta los tubos en baño María, a ebullición durante 5 minutos y dejar a enfriar a temperatura ambiente. 4. La formación de un precipitado rojo y la decoloración de la solución indica prueba positiva para azúcar reductor. Procedimiento para la Prueba de Benedict 1. Prepara por duplicado una serie de nueve tubos por duplicado y numera consecutivamente cada uno de los tubos. 2. Añade las soluciones como se indican en la tabla siguiente: Tubos Sol. Benedict mL Glucosa Fructosa Manosa Sacarosa Jugo Manzana RF N RF dieta Canderel Azúcar 3.

1 1 5

2 1 5

3 1 5

4 1 5

5 1 10

6 1 10

7 1 10

8 1 10

9 1 10

Calienta los tubos en baño María, a ebullición durante 5 minutos y dejar a enfriar a temperatura ambiente.

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5.

La presencia de un precipitado cuya coloración varía desde amarillo hasta rojo y con decoloración de la solución indica prueba positiva. Limpieza y entrega de materiales.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente): Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica b) ¿Qué es un azúcar reductor? c) Describe las dos pruebas más comunes para determinar azucares reductores. d) Describe las reacciones de las dos pruebas descritas en el inciso anterior (c). e) Dibuja las estructuras de los principales monosacáridos con actividad bioquímica en el ser humano. f) Describe las reacciones de oxidación de los monosacáridos. Después de la práctica: a) Elabora un cuadro con cada una de las características observadas en cada una de las reacciones: color, formación del precipitado etc.  Compara los resultados e indica que tipo de azucares son la glucosa, la fructosa, la manosa y sacarosa  Los alimentos probados contenían azucares reductores, explica.  Las determinaciones de esta práctica son cuantitativas o cualitativas ¿por qué?  Mencione la similitud en su composición que presentan el reactivo de Fehling y el reactivo de Benedict  ¿Qué efecto tiene en el organismo la presencia de azucares reductores en los alimentos? b)

Describe las rutas metabólicas activadas después del consumo de los diferentes tipos de alimentos. Método de Evaluación De la Práctica

Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Del Aprendizaje Independiente Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Morales R. A. (2012) Manual del laboratorio de Bioquímica UVM Campus Coyoacán Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Química clínica. Teoría, análisis y correlación. 3ª ed. Ed. Pesce Kaplan publicaciones.

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Práctica Número:

3

Duración (mins/horas):

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

3. Metabolismo de los hidratos de carbono

Nombre de la Práctica

PRODUCCIÓN DE ÁCIDO PIRÚVICO DURANTE LA FERMENTACIÓN DE LA GLUCOSA POR LA LEVADURA.

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: a) Demuestra la formación de ácido pirúvico durante la fermentación de la glucosa por la levadura. b) identifica el ácido pirúvico producido a partir de glucosa. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 18 tubos de ensayo de 18x150 6 tubos de ensayo de 13x100 1 gradilla. 1 pinzas para tubo de ensayo. 5 matraces Erlenmeyer de 50 ml. 1 agitador de vidrio. 2 vasos de precipitados de 100 ml. 4 vasos de precipitados de 50 ml. 4 pipetas serológicas de 5 ml. 3 pipetas serológicas de 1 ml. 1 probeta de 50 ml. 1 probeta de 25 ml. 2 propipetas. 1 barra magnética. 1 espátula. 4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Jabón para manos. Pipeta Pasteur desechable. Charola para pesar.

Bitácora de trabajo

Equipo:     

Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa Levadura (5 gr/equipo)

Parrilla con agitación Centrífuga Agitador Vortex Baño maría Balanza digital

Sustancias: 10 ml 10 ml 10 ml 0.5 gr 10 ml 5 ml 10 ml 10 ml

NaOH 0.1 N Acido tricloroacético al 10% Nitroprusiato de Sodio al 0.5% Sulfato de amonio sólido. 2,4-dinitrofenil-hidracina al 0.1% en HCl 2N Hidróxido de amonio concentrado. Soluciones de glucosa al 0.5, 1.0 y 2.0% Suspensión de levadura al 5% en Na2HPO4 (213 mg/100 ml) y KH2PO4 (90 mg/100 ml) (18 hrs de fermentación antes de su utilización). Agua destilada.

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Escuela de Ciencias de la Salud Actividades

Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

I. FORMACIÓN DE PIRUVATO. 1. Marcar dos series de 3 tubos de 18x150 y adicionar 3 ml. de las soluciones de glucosa a las diferentes concentraciones (0.5, 1.0 y 2.0 %) a ambas series. 2. A una de las series agregar 3 ml de suspensión de levadura con fosfatos de sodio (marcar como A).A la otra serie agregar 3 ml de la suspensión de levadura con fosfatos de potasio (marcar como B). 3. Colocar todos los tubos en baño maría a 37ºC por 30 minutos. Posteriormente añadir a cada tubo 1 ml. de Ácido tricloroacético al 10%. Mezclar vigorosamente y centrifugar a 2500 rpm por 10 minutos. A partir de cada tubo separar 2 alícuotas de 1 ml de sobrenadante en tubos nuevos y reservar para las pruebas de identificación del piruvato. El precipitado se desecha.

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio con 1 semana de anticipación sus materiales 2. El docente verifica que el alumno ingresó su solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h de anticipación 3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio entreguen el material a los alumnos contra vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, posterior al briefing 4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta con el 100% de los materiales solicitados 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de trabajo limpia y despejada EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la cronología. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO INSTRUCCIONAL. 7. Llenado de bitácora electrónica: https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3

II. IDENTIFICACIÓN DEL PIRUVATO. 1. REACCIÓN CON NITROPRUSIATO DE SODIO. Tomar una de las alícuotas del paso anterior . Adicionar 0.5 gr de sulfato de amonio sólido y agitar. Agregar dos gotas de nitroprusiato de sodio y mezclar vigorosamente. Depositar lentamente por la pared interna del tubo unas gotas de Hidróxido de amonio concentrado de manera que se estratifique. NO MEZCLAR. La formación de un anillo azul ó verde en la interfase indica prueba positiva. Repetir el procedimiento con las alícuotas de ambas series. 2. REACCIÓN CON 2,4-DINITROFENIL-HIDRACINA. Tomar la segunda alícuota reservada en la parte I y adicionar 1 ml. de 2,4-dinitrofenil-hidracina, agitar y separar la mitad de la mezcla formada en un tubo nuevo de 13x100. Agregar 1 ml de NaOH 0.1 N. La aparición de un color rojo indica prueba positiva. Repetir el procedimiento con las alícuotas de ambas series. Limpieza y entrega de materiales Limpieza y orden del laboratorio

DEBRIEFING (10 MINUTOS) 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de dudas. 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica. b) Investigar: Glucólisis, destinos del piruvato. c) Investigar: fundamento de las pruebas de identificación del piruvato. Después de la práctica: a) Comparar la coloración e intensidad obtenida en ambas pruebas de identificación de piruvato. Discutir las diferencias en función de las concentraciones de glucosa y la solución de fosfatos utilizada para la suspensión de levadura. Método de Evaluación De la Práctica

Del Aprendizaje Independiente

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Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Feduchi E, Blasco I, Romero CS, Yáñez E. (2011) Bioquímica. Conceptos esenciales. Primera edición. Editorial Médica Panamericana. Madrid.

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Práctica Número:

Duración (mins/horas):

4

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

3. Metabolismo de los hidratos de carbono

Nombre de la Práctica

EXTRACCIÓN DE GLUCÓGENO

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: a) Describe el papel del glucógeno en el almacenamiento de energía. b) Aísla el glucógeno a partir de hígado de res y posteriormente identifica las moléculas de glucosa resultantes de su hidrólisis mediante pruebas colorimétricas. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 8 tubos de ensayo de 13x100 1 gradilla. 1 pinzas para tubo de ensayo. 1 mechero 2 matraces Erlenmeyer de 25 ml. 2 matraces volumétricos de 25 ml. 1 agitador de vidrio. 1 vaso de precipitado de 100 ml. 3 vasos de precipitados de 50 ml. 4 pipetas serológicas de 5 ml. 4 pipetas serológica de 1 ml. 2 probetas de 50 ml. 2 probetas de 25 ml. 2 propipetas. 1 espátula. 4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Jabón para manos. Papel filtro. Papel indicador. Pipeta pasteur desechable. Charola para pesar.

Bitácora de trabajo

Equipo:    

Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa Hígado de res (3 gr por equipo).

Centrífuga Agitador Vortex Baño maría Balanza digital

Sustancias: 5 ml KOH al 30% 1 ml Na2SO4 al 15% 10 ml Etanol al 96% 2 ml H2SO4 5 N. 5 ml NaOH 5 N 0.5 ml Fenolftaleína 1 ml Reactivo de Benedict. Agua destilada. Hielo. Actividades Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

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I. Extracción del glucógeno de una muestra hepática de hígado de res. 1. Pesar aproximadamente 1.5 g de hígado de res. Realizar la extracción por duplicado. 2. Introducir los fragmentos de hígado en dos tubos de ensayo. Añadir a cada tubo 2 ml de KOH al 30%. PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) Incubar los tubos en un baño de agua hirviendo 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio durante 15 minutos con agitación ocasional, hasta la con 1 semana de anticipación sus materiales completa digestión del tejido (que no queden partículas 2. El docente verifica que el alumno ingresó su en suspensión). solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio 3. Centrifugar 5 minutos a 3000 rpm para eliminar los con mínimo 24 h de anticipación restos de tejido no digerido. 3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio 4. Pasar cuidadosamente los sobrenadantes (con una entreguen el material a los alumnos contra vale de pipeta o por decantación) a dos tubos previamente solicitud y credencial del responsable del equipo, pesados, a los que se les añaden 0.2 ml de Na2SO4 al posterior al briefing 15%, y 4 ml de alcohol etílico. Agitar cuidadosamente 4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta la mezcla para poner en contacto a todos los con el 100% de los materiales solicitados componentes. Dejar reposar en hielo 15-20 minutos, 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de para provocar la precipitación del glucógeno extraído. trabajo limpia y despejada 5. Centrifugar 5 minutos a 3000 r.p.m. para sedimentar el glucógeno. Desechar con sumo cuidado el EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA sobrenadante y retener el precipitado o sedimento de 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la color marrón-blanco, puesto que esto es el glucógeno. Nota. La purificación completa del glucógeno cronología. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. implicaría tres o cuatro precipitaciones alcohólicas y 3. Resuelve dudas durante la ejecución. una precipitación ácida, pero en esta práctica haremos 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo sólo una precipitación alcohólica. durante la ejecución de la práctica 6. Secar cuidadosamente con papel de filtro y pesar el 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. precipitado de glucógeno de cada tubo. Anotar el 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO resultado. INSTRUCCIONAL. II. Hidrólisis ácida del sedimento de glucógeno 7. Llenado de bitácora electrónica: https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 1. Al sedimento de glucógeno obtenido en el tubo, se le añade 1 ml de H2SO4 5N para proceder a su hidrólisis DEBRIEFING (10 MINUTOS) ácida y para ello se calienta la disolución 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. cuidadosamente a 100°C durante 45 minutos. Nota. Como el ácido puede saltar en la ebullición, es 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de dudas. conveniente poner en la parte superior del tubo papel 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. filtro enrollado, para que absorba el ácido y evitar riesgos. Tener en cuenta que en este tratamiento es donde se está obteniendo la glucosa que después se puede valorar, por lo cual no conviene perder muestra. 2. Completar a 2 ml con agua destilada y añadir 2-3 gotas de fenolftaleína para que actúe de indicador en la posterior neutralización. 3. Añadir gota a gota NaOH 5N y agitar bien hasta que se obtenga un pH 8 o superior. Se debe comprobar el pH de la muestra con papel indicador. 4. Anotar el volumen de la disolución, hidrolizado de glucógeno, puesto que es la disolución problema donde se va a comprobar la presencia de glucosa proveniente del glucógeno extraído. BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

III. Medida cualitativa del contenido de glucosa 1. Se colocan dos tubos de ensayo en la gradilla en los que se introduce 0.5 ml del hidrolizado de glucógeno de cada muestra. 2. Se añade a cada uno 0.5 ml de reactivo de Benedict. 3. Observar y anotar lo que ocurre en cada tubo. 4. Limpieza y entrega de materiales. 5. Limpieza y orden en el laboratorio.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica

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b) Investigar: Gluconeogénesis, glucogenólisis, regulación del metabolismo del glucógeno, función del KOH al 30 %. c) Investigar: fundamento de la prueba de Benedict. Después de la práctica: a) Reportar la eficiencia de la extracción de glucógeno a través de la identificación de la glucosa. Método de Evaluación De la Práctica Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Del Aprendizaje Independiente Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Manzoul, SM, Mohammed, H. (2010). Bioquímica. Editorial El Manual Moderno. México.

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UVM México Práctica Número:

Escuela de Ciencias de la Salud Duración (mins/horas):

5

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

3. Metabolismo de los hidratos de carbono

Nombre de la Práctica

ESTUDIO DEL BOMBEO DE PROTONES POR LEVADURAS

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: a) Relaciona el consumo de glucosa con los cambios de pH producidos por la levadura. b) Analiza las vías por las cuales la glucosa genera los cambios de pH. c) Interpreta el efecto de los inhibidores y los desacoplantes sobre la salida de protones. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 3 vasos de precipitados de 100 ml. 1 vaso de precipitado de 50 ml. 3 pipetas serológicas de 5 ml. 2 pipetas serológicas de 1 ml. 1 probeta de 50 ml. 1 probetas de 25 ml. 2 propipetas. 1 espátula. 4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Jabón para manos. Charola para pesar.

Bitácora de trabajo Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa Levadura (Saccharomyces cerevisiae) (4 gr/equipo)

Equipo:  Potenciómetro  Balanza digital Sustancias: 20 ml 20 ml 1 ml 1 ml

Glucosa al 10% (para una concentración final de 1%) Solución de levadura 200 mg/ml. Dinitrifenol 40 mmol/l en etanol. Azida de sodio 400 mmol/l Agua destilada. Actividades

Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

EXPERIMENTO 1 (CONTROL). 1. Diluír 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada. 2. Determinar el pH de la solución y repetir la medición dos veces más con intervalos de 3 minutos para obtener la línea basal. 3. Adicionar 5 ml. de glucosa al 10%, agitar y medir el pH. 4. Determinar el pH de la solución cada 5 minutos 4 veces, y luego cada 10 minutos 2 veces más.

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio con 1 semana de anticipación sus materiales 2. El docente verifica que el alumno ingresó su solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h de anticipación 3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio entreguen el material a los alumnos contra vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, posterior al briefing

EXPERIMENTO 2 (DINITROFENOL). 1. Diluír 5 ml. de la levadura con 40 ml de agua destilada.

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Escuela de Ciencias de la Salud

4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta 2. con el 100% de los materiales solicitados 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de trabajo limpia y despejada 3. EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la cronología. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO INSTRUCCIONAL. 7. Llenado de bitácora electrónica: https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 DEBRIEFING (10 MINUTOS) 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de dudas. 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.

4. 5.

Añadir por decantación (no pipetear) 0.2 ml de la solución de dinitrofenol 40 mmol/l, concentración final de 200 μmol/l. Determinar el pH de la solución y repetir la medición dos veces más con intervalos de 3 minutos para obtener la línea basal. Esperar 5 minutos. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.

EXPERIMENTO 3 (AZIDA). 1. Diluír 5 ml. de la levadura con 40 ml de agua destilada. 2. Añadir por decantación (no pipetear) 0.5 ml de la solución de azida de sodio 400 mmol/l, concentración final de 5 mmol/l. 3. Determinar el pH de la solución y repetir la medición dos veces más con intervalos de 3 minutos para obtener la línea basal. 4. Esperar 5 minutos. 5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control. 6. Limpieza y entrega de materiales. 7. Limpieza y orden del laboratorio.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica. b) Investigar: Fuentes de carbono de las levaduras. Vías metabólicas para el catabolismo de carbohidratos. Glucólisis. Fosforilación oxidativa. c) Investigar: Productos finales del catabolismo de carbohidratos en levaduras. Inhibidores de la cadena respiratoria de los sitios I, II y III.Mecanismo de protonóforos para desacoplar la fosforilación oxidativa. Después de la práctica: a) Hacer una gráfica de cada uno de los experimentos; utilizar los valores de las lecturas de pH contra tiempo. b) Analizar el significado de los cambios de pH en el experimento control, con dinitrofenol como desacoplante y con azida de sodio c) Hacer una relación de las vías que producen estos cambios, considerando que las levadurasposeen una ATPasa de protones en la membrana mitocondrial que se encarga de sintetizar ATP y que tienen otra ATPasa de protones en la membrana plasmática cuya función es similar a la bomba de Na/K en las células de mamíferos. Método de Evaluación De la Práctica Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Del Aprendizaje Independiente Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Feduchi E, Blasco I, Romero CS, Yáñez E. (2011) Bioquímica. Conceptos esenciales. Primera edición. Editorial Médica Panamericana. Madrid.

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Práctica Número:

Escuela de Ciencias de la Salud

Duración (mins/horas):

6

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

5. Metabolismo de lípidos

Nombre de la Práctica

DIGESTIÓN ENZIMÁTICA DE GRASAS

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: c) Observar la eficiencia en la digestión de lípidos de la leche con enzimas pancreáticas sometidas a calentamiento. d) Comprender la importancia de las sales biliares en el proceso de digestión enzimática de grasas.. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 8 tubos de ensayo de 18x150 1 gradilla. 1 mortero con pistilo. 1 matraz erlenmeyer de 25 ml. 1 agitador de vidrio. 2 vasos de precipitados de 50 ml. 1 vaso de precipitados de 25 ml. 1 matraz volumétrico de 25 ml. 1 pipetas serológicas de 10 ml. 1 pipetas serológicas de 5 ml. 1 pipetas serológicas de 2 ml. 1 pipetas serológicas de 1 ml. 1 probeta de 25 ml. 1 probeta de 50 ml. 2 propipetas. 4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Jabón para manos.

Bitácora de trabajo Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa Material suficiente para todo el grupo: 

 

1 caja de ESPAVEN ENZIMÁTICO (Laboratorios Valeant), medicamento de venta libre. 100 mL de leche entera 100 ml de aceite vegetal

Equipo: Agitador vortex Potenciómetro Baño maría. Sustancias: 20 ml 1 ml 25 ml

Pancreatina al 1% Na2CO3 al 10%. NaOH 0.1 N. Agua destilada. Actividades

Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

1.

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio con 1 semana de anticipación sus materiales

Digestión de grasa de la leche con lipasa pancreática.

A 10 mL de leche agregar 10 gotas de fenolftaleína y 2 gotas de carbonato de sodio. Revisar pH. Dividir la leche en porciones iguales y transferir a 2 tubos de ensayo. Añadir a un tubo con leche 1.5 mL de solución hervida de pancreatina y a otro 1.5 mL de solución no hervida de pancreatina. Mezclar cada uno de los tubos

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2. El docente verifica que el alumno ingresó su solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h de anticipación 3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio entreguen el material a los alumnos contra vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, posterior al briefing 4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta con el 100% de los materiales solicitados 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de trabajo limpia y despejada. EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la cronología. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO INSTRUCCIONAL. 7. Llenado de bitácora electrónica: https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 DEBRIEFING (10 MINUTOS) 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de dudas. 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.

vigorosamente. Limpiar el exterior de los tubos para no introducir leche al baño maría. Colocar los tubos en baño maría a 40 °C. Mezclar los tubos cada 20 minutos y anotar cualquier cambio de color y olor. 2.

Efecto de las sales biliares en la acción de la lipasa.

Preparar un juego de cuatro digestiones (tubos 1 a 4) y dos controles (tubos 5 y 6) en tubos de ensayo de la siguiente manera, añadiendo la solución de pancreatina hasta el final: TUBO

ACEITE VEGETAL (ml)

AGUA (ml)

1 2 3 4 5 6

0.25 0.25 0.25 0.25 0 0

2.25 2.25 1.75 1.75 2.5 2

PASTILLA DE ESPAVEN MOLIDA 0 0 1 1 0 1

PANCREA TINA (ml)

2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5

C par C par

Mezclar vigorosamente cada tubo, colocarlos por el mismo periodo de tiempo en baño maría a 40 °C e incubar a esa temperatura durante 1 hora. Mezclar los tubos vigorosamente cada 15 minutos. Después de incubados, añadir 10 gotas de fenolftaleína y titular con una solución de NaOH 0.1 N hasta que la mezcla llegue a un color rosa que se desvanece después de unos 30 segundos. Anote los volúmenes de NaOH utilizados. Calcule los ácidos grasos producidos con y sin sales biliares (Espaven). Limpieza y entrega de materiales. Limpieza y orden del laboratorio.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: 1. Lectura de la práctica. 2. Investigar: : hidrólisis de triglicéridos, lipasa, sales biliares. 3. Investigar: solución, suspensión, emulsión. 4. Investigar la relación previamente establecida para la actividad lipásica en función de los ml de NaOH 0.1 N gastados en la segunda parte de la práctica..

Después de la práctica: a) Compara la eficiencia de digestión de lípidos de la leche con pancreatina normal y sometida a calentamiento. b) Calcular la cantidad de ácidos grasos producidos con y sin sales biliares, utilizando la relación arriba mencionada. Método de Evaluación De la Práctica Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Del Aprendizaje Independiente Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Strong FM, Koch GH. (1981). Biochemistry Laboratory Manual. Third Edition. McGraw-Hill Copyright © UVM México, 2015. Todos los Derechos Reservados.

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Práctica Número:

Duración (mins/horas):

7

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

5. Metabolismo de lípidos

Nombre de la Práctica

EXTRACCIÓN DE LÍPIDOS DE LA YEMA DE HUEVO

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: a) Comprender las características estructurales y funcionales de los lípidos contenidos en la yema de huevo. b) Obtener las diferentes fracciones lipídicas de la yema de huevo en base a sus diferencias en solubilidad. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 4 tubos de ensayo de 18x150 1 gradilla. 1 embudo Buchner. 1 matraz kitasato de 500 ml. 1 agitador de vidrio. 4 vasos de precipitados de 400 ml. 1 vasos de precipitados de 50 ml. 2 pipetas serológicas de 10 ml. 2 pipetas serológicas de 5 ml. 1 probeta de 100 ml. 2 probetas de 50 ml. 2 propipetas. 1 barra magnética. 1 espátula. 4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Jabón para manos. Papel filtro. Charola para pesar.

Bitácora de trabajo Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa 2 huevos por equipo.

Equipo:  Parrilla con agitación  Bomba de vacío  Agitador Vortex Sustancias: 25 ml 2 ml 8 ml 80 ml 100 ml 3.5 ml 30 ml

Acetona Anhídrido acético Cloroformo Etanol al 96 Éter etílico. H2SO4 concentrado. Solución alcohólica de KOH al 5.6 %. Agua destilada. Actividades

Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

1.- Pesar un vaso de precipitados de 400 ml completamente limpio y seco. 2.-Romper cuidadosamente dos huevos, y transferir las yemas al vaso de precipitados. Pesar nuevamente y determinar el peso de las yemas de huevo.

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PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio con 1 semana de anticipación sus materiales 2. El docente verifica que el alumno ingresó su solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h de anticipación 3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio entreguen el material a los alumnos contra vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, posterior al briefing 4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta con el 100% de los materiales solicitados 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de trabajo limpia y despejada. EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la cronología. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO INSTRUCCIONAL. 7. Llenado de bitácora electrónica: https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 DEBRIEFING (10 MINUTOS) 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de dudas. 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.

3.-Adicionar 70 ml de etanol y 35 ml de éter, agitar continuamente durante 10 minutos para extraer todos los lípidos. 4.-Filtrar la suspensión a través de una gasa adaptada a un embudo de filtración, recogiendo el filtrado en un vaso de precipitados de 400 ml bien seco, LEJOS DE TODA FLAMA. 5.-Filtrar nuevamente el filtrado en un embudo de filtración cubierto con papel filtro humedecido previamente con etanol. 6.- Evaporar el filtrado hasta casi sequedad utilizando una base magnética con agitación. Se obtendrá una suspensión pastosa amarillenta. 7.-Enfriar el vaso al chorro de agua, procurando que no caigan gotas de agua sobre el residuo. 8.-Una vez enfriado el vaso, resuspender el residuo en 10 ml de éter. 9.-Adicionar 30 ml de acetona agitando continuamente la solución. El precipitado que se forma son las LECITINAS. 10.-Filtrar recogiendo el filtrado en un vaso limpio y seco. El precipitado obtenido se pesa y se registra su peso en la tabla de resultados. 11.-Evaporar el filtrado hasta obtener una pasta viscosa de color café amarillento, utilizar para ello la parrilla eléctrica con agitación constante. 12.-Enfriar el vaso de precipitados al chorro de agua. 13.-Añadir al residuo 30 ml de solución alcohólica de hidróxido de potasio, y agitar para resuspenderlo homogeneamente. 14.-Calientar la solución durante 5 minutos, con agitación constante. 15.-Enfriar, y añadir 50 ml de éter agitando continuamente. Todo el material saponificado, sedimenta, es un JABON. 16.-Filtrar a través de un embudo de filtración acondicionado con papel filtro humedecido con alcohol. Pese el jabón. El filtrado contiene el material no saponificable, principalmente colesterol. 17.-Evaporar a sequedad el filtrado. Con una varilla de vidrio raspar el residuo formado de manera que obtenga un polvo fino, recuperar y pesar. Realizar las siguientes pruebas cualitativas. PRUEBA DE SALKOWSKI PARA COLESTEROL: En un tubo de 18 x 150 disuelva una pequeña porción del colesterol obtenido en 3 ml de cloroformo. En otro tubo coloque 3 ml de cloroformo. Añadir a ambos tubos 3 ml de ácido sulfúrico concentrado, agitar cuidadosamente, dejar reposar 15 minutos. Observar la separación de dos capas, la clorofórmica adquiere una coloración roja cereza en caso de existir colesterol. la capa sulfúrica toma una coloración amarilla con fluorescencia verde. La presencia de humedad dificulta la reacción. PRUEBA DE LIEBERMAN BURCHARD: Disolver una pequeña porción de colesterol en 1 mL de cloroformo, en un tubo de ensaye de 18 x 150. Transferir 1 ml de cloroformo en otro tubo. Agregar a los dos tubos 2 ml de anhídrido acético y 4 gotas de ácido sulfúrico concentrado. Mezclar bien y dejar reposar 15 minutos. Si existe colesterol aparecerá una coloración azul verdosa que pasa a verde.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica.

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b) Investigar: estructura, propiedades y funciones biológicas de la lecitina, colesterol, ceras, fosfolípidos. c) Investigar: reacción de saponificación, lípidos saponificables, lípidos no saponificables. d) Investigar la composición de lípidos de la yema de huevo reportada en la literatura.

Después de la práctica: a) Registrar el rendimiento de las fracciones lipídicas obtenidas en la siguiente tabla: MATERIAL Yemas de huevo Lecitinas Jabón Colesterol

PESO (gr)

RENDIMIENTO (%)

b) Compara el rendimiento obtenido en las diferentes fracciones con el reportado en la literatura. Método de Evaluación De la Práctica Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Del Aprendizaje Independiente Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Strong FM, Koch GH. (1981). Biochemistry Laboratory Manual. Third Edition. McGraw-Hill

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Práctica Número:

Duración (mins/horas):

8

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

5. Metabolismo de lípidos

Nombre de la Práctica

DETERMINACIÓN DE COLESTEROL

Competencia asociada a la práctica.

Que el alumno sea capaz de: a) Conocer un método efectivo de extracción de lípidos con solventes orgánicos. b) Desarrollar una curva de calibración que permita relacionar la cantidad de sustrato (colesterol) con la Absorbancia. c) Determinación de colesterol presente en la yema de huevo. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 2 Huevo (Yema) 5 Tubos para espectrofotómetro 1 Tubo de parafilm

Bitácora de trabajo Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa 2 Huevos (yema)

Equipo:  Espectofotómetro Sustancias: 5 Soluciones patrón de colesterol Ácido sulfúrico concentrado 6 mL FeCl3

Actividades Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

1)

Presentación e ingreso al laboratorio

2)

Organización del trabajo en equipo.

3)

.Revisión rápida de los conceptos investigados.

4)

Supervisión de ejecución adecuada del procedimiento indicado en la práctica.

5)

Revisión rápida de los resultados obtenidos.

a) Desarrolle el siguiente protocolo: A partir de distintas soluciones patrón de colesterol de concentraciones conocidas realice las diluciones indicadas en la siguiente tabla:

6) Supervisión de mesas de trabajo limpias y bancos ordenados. b) Tape los tubos con tapa y parafilm. c) Homogenice las soluciones por inversión suave. d) Desarrolle el color durante 25 minutos a temperatura ambiente. e) Determine la Absorbancia de cada tubo, leyendo en espectrofotómetro a 540 nm de longitud de onda (utilice el tubo Nº 1 (blanco) para calibrar el equipo a cero. f) Anote las lecturas en la siguiente tabla: Copyright © UVM México, 2015. Todos los Derechos Reservados.

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g) Con los datos anteriores complete la siguiente tabla:

h) Realice un gráfico (curva de calibración) de Absorbancia versus concentración de colesterol. 2.

Extracción de colesterol con solventes orgánicos a.

b. c.

Mase aproximadamente entre 0,1 – 0,15 g de yema de huevo en un vaso precipitado de 100 mL. Agregue 10 mL de una mezcla acetona/éter (1:1) y agite con la varilla de vidrio por 10 minutos. Trasvasije el contenido a un tubo de centrífuga y centrifugue por 5 minutos a 3000 rpm.

3. Determinación de colesterol total a. b.

c. d.

e. f. g. h.

i.

Prepare un tubo blanco adicionando 6 mL de FeCl3 . Rotule otros dos tubos de ensayo (1 y 2) y adicione a cada uno de ellos 0,5 mL del sobrenadante proveniente de la extracción de la yema de huevo. Evapore a sequedad en un baño de agua termorregulado a 60º C. Agregue 6 mL de solución de FeCl3 a cada tubo (1 y 2) y caliente en baño de agua a ebullición por 5 minutos, incluya el tubo blanco. Enfríe y agregue 2 mL de H2SO4 concentrado por la pared de cada tubo. Tapar los tubos con tapa y parafilm. Homogenice las soluciones por inversión suave. Desarrolle el color durante 25 minutos a temperatura ambiente. Determine la Absorbancia de cada tubo, leyendo en espectrofotómetro a 540 nm de longitud de onda, utilice el tubo blanco para calibrar el equipo a cero.

Tubo N° Absorbancia 540 (nm)

j.

1

2

Con los datos anteriores, interpole los valores de Absorbancia en la curva de calibración para obtener la concentración de colesterol y complete la siguiente tabla:

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k.

A continuación desarrolle los siguientes cálculos:

K1. Sabiendo que el volumen de sobrenadante en total es de aproximadamente 10 mL, determine los mg de colesterol en el volumen total de muestra. K2. Considerando la masa promedio de una yema de huevo, determine los mg de colesterol por 100 mg de yema de huevo. K3. Determine el % de colesterol presente en el huevo, tomando en cuenta una masa total promedio de huevo.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: a) Investigar: : Propiedades y funciones de colesterol, triglicéridos y lipoproteínas b) Investigar: Valores de referencia para los diferentes parámetros analizados. c) Investigar: asociaciones de alteraciones en los niveles de lípidos plasmáticos y riesgos a la salud. d) Investigar las vías por las cuales los mamíferos obteienen el colesterol e) ¿Cuáles son y cuáles son sus diferencias de los dos tipos de lipoproteínas que contienen colesterol? f) ¿Por qué el valor definido clínicamente sobre los niveles de colesterol total deben ser plasmáticos? Después de la práctica: a) Reportar los resultados de colesterol, triglicéridos y lipoproteínas e interpretar estos resultados en función de estimación de riesgo. Método de Evaluación De la Práctica Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Del Aprendizaje Independiente Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Química clínica. Teoría, análisis y correlación. 3ª ed. Ed. Pesce Kaplan publicaciones. https://profesoramaribelarnes.files.wordpress.com/2009/11/lab-5

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1 sesión de 3 h

Duración (mins/horas):

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

4 Metabolismo de proteínas

Nombre de la Práctica

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE FOSFATASA ALCALINA.

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: a) Analiza las funciones biológicas de la fosfatasa alcalina. b) Determina la actividad enzimática de la fosfatasa alcalina y el efecto de la concentración de enzima sobre la velocidad de reacción c) Establece asociaciones con las diferentes patologías que se presentan cuando la actividad de la fosfatasa alcalina se encuentra alterada. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 2 tubos de ensayo de 13x100 1 gradilla. Pipetas de vidrio (5,0 ml). Pipeta automática P-1000 (puntas). Propipeta. Rotulador para vidrio. 16 tubos de ensayo de vidrio (1,5x 16 cm) Cronómetro. Tubos especiales para medir en el colorímetro (celdas) 4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol.

Bitácora de trabajo Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa Solicitar material en tiempo y forma

Equipo: Baño termostatizado a 30ºC. Colorímetro ajustado a 405 nm (celda par lectura). Sustancias: Tampón de ensayo (para ajustar a pH alcalino) pH 10.4 Solución sustrato (éster de fosfato artificial, el p-nitrofenilfosfato) Enzima: fosfatasa alcalina de mucosa intestinal bovina, comercial (reactivo). Actividades Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

Efecto del tiempo de reacción en la aparición de producto. 1.- A 5 tubos de ensayo y se añaden los reactivos que se detallan en la Tabla 1. Se agitan suavemente e incuban en baño termostatizado a 30 ºC los tiempos indicados.

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio con 1 semana de anticipación sus materiales 2. El docente verifica que el alumno ingresó su solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h de anticipación 3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio entreguen el material a los alumnos contra vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, posterior al briefing 4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta con el 100% de los materiales solicitados 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de trabajo limpia y despejada

Tabla 1: Efecto del tiempo de reacción en la aparición de producto Tubo No

1

2

3

4

5

Tampon mL

2

1

1

1

1

Sustrato mL

1

1

1

1

1

Enzima mL

….

1

1

1

1

15

20

Agitar suavemente e incubar a 30°C Tiempo min

5

5

10

2.- A medida que se cumplen estos tiempos, se retira el tubo correspondiente del baño a 30 ºC y se le añade inmediatamente 1 ml de fosfato mezclando las soluciones para detener la reacción. 3.- A continuación, se mide la absorbancia a los distintos tubos a 405 nm usando el nº 1 como blanco. Efecto de la concentración de enzima sobre la velocidad de reacción

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EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la cronología. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO INSTRUCCIONAL. 7. Llenado de bitácora electrónica:https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3

2.1. A una serie de 5 tubos de ensayo se les añade los distintos reactivos según se indica en la Tabla 2, obteniéndose así concentraciones crecientes de enzima en los mismos. Tras agitar suavemente se incuban en baño termostatizado el tiempo indicado: Tabla 2. Efecto de la concentración de enzima sobre la velocidad de la reacción. Tubo No

1

2

3

4

5

Tampon mL

2.5

2.3

2.1

1.9

1.7

Sustrato mL

1

1

1

1

1

Enzima mL

….

0.2

0.4

0.6

0.8

Agitar suavemente e incubar a 30°C 10 minutos

DEBRIEFING (10 MINUTOS) 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de dudas. 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica. b) Investigar: Función biológica de la fosfatasa alcalina. c) Investigar: valores de referencia para la actividad enzimática de la fosfatasa alcalina. d) Investigar: principales patologías que se presentan cuando existen alteraciones en la actividad de la fosfatasa alcalina. Después de la práctica: a) Reportar los resultados de actividad de la fosfatasa alcalina, en este caso representaremos la aparición de producto frente al tiempo (Figura 2), obteniendo la curva de progreso de la reacción. b) El cálculo de la concentración de producto (p-nitrofenol) se basa en la ley de Lambert-Beer (Caso 1) c) Aplicando esta ecuación a las absorbancias obtenidas para cada uno de los tubos, teniendo en cuenta que I = 1 cm y ε = 18,5 mM-1 cm-1, se obtiene la concentración producto formado en cada uno de ellos (caso 2) Método de Evaluación De la Práctica

Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Química clínica. Teoría, análisis y correlación. 3ª ed. Ed. Pesce Kaplan publicaciones.

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UVM México Práctica Número:

Escuela de Ciencias de la Salud Duración (mins/horas):

10

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

4 Metabolismo de proteínas

Nombre de la Práctica

ANÁLISIS CUANTITATIVO DE ENZIMAS

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: a) Determina la presencia de enzimas en productos de origen animal o vegetal mediante reacciones químicas específicas. b) Identifica la acción de la catalasa, peroxidasa y tirosidasa. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 16 tubos de ensayo de 13x100 1 gradilla. 1 pinzas para tubo de ensayo. 1 agitador de vidrio. 2 pipetas serológicas de 5 ml. 2 pipetas serológica de 2 ml. 2 propipetas. 1 espátula. 1 mortero 1 embudo de vidrio 1 vaso de precipitado de 100 ml 4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Jabón para manos. Papel filtro. Pipeta pasteur desechable. Charola para pesar. Cronómetro Gasa

Bitácora de trabajo Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa MATERIAL POR EQUIPO: Papa cruda . Trocitos de tomate. Jugo de limón. Zanahoria. Rábano. Carne cruda. Rallador.

Equipo: Agitador Vortex Baño maría Balanza digital Sustancias: 70 ml Peróxido de Hidrógeno (agua oxigenada 3%, 0.5 y 2.0%). 1 ml Solución alcohólica de bencidina al 0.15% 5 ml Pirogalol al 1% 1 ml Tirosina al 1% Agua destilada. Hielo. Actividades Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

4) 5)

I. RECONOCIMIENTO DE LA CATALASA. Pesar aproximadamente 1 g de cada uno de los tejidos a analizar. Introducir los fragmentos de tejido en tubos de ensayo. Añadir a cada tubo 5 ml de H2O2. Registrar las observaciones de mayor o menor actividad en cada uno de los tejidos. Identificar el tejido más reactivo. Realizar esquema de las observaciones.

1)

II. DESNATURALIZACIÓN DE LA CATALASA. Pesar aproximadamente 1 g de cada uno de los

1) 2) 3)

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio con 1 semana de anticipación sus materiales 2. El docente verifica que el alumno ingresó su solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h de anticipación

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Escuela de Ciencias de la Salud

3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio entreguen el material a los alumnos contra vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, posterior al briefing 4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta con el 100% de los materiales solicitados 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de trabajo limpia y despejada.

2) 3) 4) 5) 6)

EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la cronología. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO INSTRUCCIONAL. 7. Llenado de bitácora electrónica: https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3

1)

2) DEBRIEFING (10 MINUTOS) 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de dudas. 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.

1)

2) 3) 4) 5) 6) 7)

tejidos a analizar. Introducir los fragmentos de tejido en tubos de ensayo. Introducir los tubos con los tejidos en un baño de agua hirviendo durante 10 minutos. Añadir a cada tubo 5 ml de H2O2. Registrar las observaciones de mayor o menor actividad en cada uno de los tejidos. Comparar resultados con el experimento anterior, anotar observaciones. III. DETERMINACIÓN DE LA PEROXIDASA. PRUEBA DE LA BENCIDINA: Pesar aproximadamente 2 g de rábano. Con ayuda de un mortero, triturar el tejido agregando 3 ml de agua destilada. Filtrar a través de una gasa y agregar 1 mi del extracto acuoso a un tubo de ensayo. Añadir 5 gotas de la solución alcohólica de bencidina. Agregar dos gotas de peróxido de hidrógeno al 0.5% y agitar suavemente. Anotar los resultados. PRUEBA DEL PIROGALOL: Con ayuda de un rallador, rallar una papa fresca. Tomar una pequeña cantidad de la papa rallada sin exprimir y colocarla en un tubo de ensayo. Añadir 1 ml. de pirogalol al 1% y 2 gotas de peróxido de hidrógeno al 2%. Observar la aparición de un precipitado. Anotar los resultados. IV. DETERMINACIÓN DE TIROSINASA. Con ayuda de un rallador, rallar una papa fresca, exprimirla a través de una gasa doble e inmediatamente filtrar el extracto en un embudo. Vaciar a un tubo de ensayo 1 ml del extracto y añadir 3 gotas de solución de tirosina. Mezclar y colocar el tubo en un baño de agua a 40ºC. Cada 2 min agitar el tubo para que el líquido tenga mejor contacto con el oxígeno del aire. Observar y anotar los cambios de coloración de la mezcla reaccionante. Limpieza y entrega de materiales. Limpieza y orden del laboratorio.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica. b) Investigar: Importancia de las enzimas en el metabolismo celular. Reacciones que catalizan las enzimas analizadas. c) Investigar: fundamento de las pruebas realizadas. Factores que alteran la actividad enzimática. Después de la práctica: a) Reportar la actividad enzimática de la catalasa en los diferentes tejidos analizados. Listar en orden de mayor a menor actividad. b) Interpretar y discutir los resultados en función de la eficiencia de reacción de acuerdo a las condiciones de los ensayos. Método de Evaluación De la Práctica

Del Aprendizaje Independiente

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Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Nelson DL, Cox MM. Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Manzoul, SM, Mohammed, H. (2010). Bioquímica. Editorial El Manual Moderno. México.

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UVM México Práctica Número:

Escuela de Ciencias de la Salud Duración (mins/horas):

11

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

4 Metabolismo de proteínas

Nombre de la Práctica

OBTENCIÓN DE CASEÍNA A PARTIR DE LECHE

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: a) Describe las características estructurales y funcionales de las proteínas. b) Aísla la caseína de la leche mediante la técnica de precipitación isoeléctrica. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 2 tubos de ensayo de 18x150 1 gradilla. 1 pinzas para tubo de ensayo. 1 embudo de filtración rápida 1 matraz kitasato de 500 ml. 1 embudo de vidrio. 1 agitador de vidrio. 2 vasos de precipitados de 400 ml. 2 pipetas serológicas de 10 ml. 1 termómetro 1 mortero 1 probeta de 50 ml. 2 probetas de 25 ml. 2 propipetas. 1 barra magnética. 1 espátula. 4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Jabón para manos. Papel filtro. Charola para pesar.

Bitácora de trabajo Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa Leche entera de vaca.(100 ml/equipo)

Equipo: Parrilla con agitación Potenciómetro Bomba de vacío Sustancias: 30 ml 20 ml 20 ml 10 ml 2 ml

Ácido acético 2M Etanol al 96º Éter etílico NaOH 0.1 % Reactivo de Biuret. Agua destilada. Actividades

Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

1.- En un vaso de precipitados de 400 ml colocar 50 ml de agua destilada, calentar hasta alcanzar una temperatura de 38 ºC. 2.- Adicionar 100 ml de leche y colocar cuidadosamente una barra magnética. 3.- Colocar el vaso en una base magnética. Introducir el electrodo de un potenciómetro en la solución y encender cuidadosamente la agitación. Determinar el pH inicial y mantener el electrodo en modo de lectura dentro de la solución. 4.- Con ayuda de una pipeta, agregar gota a gota Ácido

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio con 1 semana de anticipación sus materiales

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2. El docente verifica que el alumno ingresó su solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h de anticipación 3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio entreguen el material a los alumnos contra vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, posterior al briefing 4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta con el 100% de los materiales solicitados 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de trabajo limpia y despejada

EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la cronología. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO INSTRUCCIONAL. 7. Llenado de bitácora electrónica: https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 DEBRIEFING (10 MINUTOS) 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de dudas. 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.

acético 2 M, hasta que el pH de la solución sea de 4.8, donde ocurrirá la precipitación de la caseína. 5.- Una vez obtenido el precipitado se detiene la agitación, se retira el electrodo y se deja reposar la solución durante 10 minutos. 6.-Eliminar por decantación la mayor parte del sobrenadante. Filtrar la porción restante a través de un embudo de vidrio cubierto con papel filtro, recogiendo el filtrado en un vaso de precipitados para su posterior eliminación. 7 – Lavar el residuo que quedó en el embudo con 20 ml. de etanol, agitando con una varilla de vidrio, teniendo cuidado de no romper el papel. 8.-Colocar el cono de papel que contiene el residuo entre varias hojas de papel secante, presionar para eliminar los restos de etanol. 9.- Colocar el precipitado seco en un vaso de precipitados y agregar 20 ml de éter etílico, agitar bien la suspensión para deslipidizar la proteína. 10.- Filtrar nuevamente la suspensión a través de un embudo de filtración rápida cubierto con papel filtro. El filtrado se descarta. El residuo de color blanco es la CASEÍNA. 11.- Transferir la caseína a un mortero y pulverizarla. Pesar y guardar en una bolsa de papel celofán. 12.- Colocar una pequeña porción de la caseína obtenida en un tubo de ensaye de 18x150. Disolverla en 5 ml de NaOH al 0.1 % y realizar la prueba de Biuret. PRUEBA DE BIURET: Agregar 1 ml del Reactivo de Biuret a la solución proteica, agitar y observar el color desarrollado. Correr un control positivo usando albúmina de huevo. 13.- Limpieza y entrega de materiales. 14.- Limpieza y orden del laboratorio.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica. b) Investigar: composición de la leche. Punto isoeléctrico. Precipitación isoeléctricac) Investigar: fundamento de la prueba de BIURET. Después de la práctica: a) Reportar el peso en gramos de la caseína obtenida. % de caseína en gramos/100 ml. de leche. b) Mostrar los resultados de la prueba de Biuret para la caseína y el control positivo. Método de Evaluación De la Práctica Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Del Aprendizaje Independiente Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Strong FM, Koch GH. (1981). Biochemistry Laboratory Manual. Third Edition. McGraw-Hill

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UVM México Práctica Número:

Escuela de Ciencias de la Salud Duración (mins/horas):

12

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

4 Metabolismo de proteínas

Nombre de la Práctica

REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: Identifica químicamente la presencia de algunos aminoácidos y determinar su presencia en las proteínas utilizadas. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 20 tubos de ensayo de 18x150 2 gradillas. 1 pinzas para tubo de ensayo. 1 mechero 2 matraces erlenmeyer de 25 ml. 2 matraces volumétricos de 25 ml. 3 vasos de precipitados de 50 ml. 2 pipetas serológicas de 10 ml. 6 pipetas serológicas de 5 ml. 2 propipetas. 1 espátula. 4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Jabón para manos. Papel indicador. Pipetas pasteur desechables. Charola para pesar.

Bitácora de trabajo Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa

Equipo: Centrífuga Agitador Vortex Baño maría Balanza digital Sustancias: Soluciones de aminoácidos al 0.1%. (3 de diferentes características: polar, apolar, con carga (+), con carga (-), aromáticos, alifáticos). Soluciones de proteína al 0.1%. (2 diferentes, por ejemplo albúmina y caseína). 5 ml HNO3 concentrado 5 ml NaOH 10 M 2 ml HgCl2 0.2 M 5 ml H2SO4 concentrado 2 ml PbOAc 0.2 M 3 ml Ninhidrina 0.1% (en n-butanol) 5 ml Reactivo de Biuret 10 ml Reactivo de Hopkins-cole 2 ml Reactivo de Millon Agua destilada. Hielo. Actividades Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

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BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

1. PRUEBA DE MILLON. En una serie de tubos transferir 2 ml de las soluciones de aminoácidos preparadas. Añadir 5 gotas del reactive de Millon, mezclar y calendar cuidadosamente la mezcla durante 10 minutos en un baño de agua hirviendo. Anotar observaciones.

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio 2. REACCIÓN XANTOPROTEICA. con 1 semana de anticipación sus materiales En una serie de tubos transferir 1 ml de las soluciones de 2. El docente verifica que el alumno ingresó su aminoácidos preparadas. Añadir cuidadosamente 1 ml. de solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio ácido nítrico concentrado, mezclar bien y calentar con mínimo 24 h de anticipación ligeramente a la llama del mechero. Enfriar y observar el 3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio color desarrollado. Los tubos pueden ser enfriados al entreguen el material a los alumnos contra vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, chorro del agua. posterior al briefing Posteriormente adicionar gota a gota y con agitación 4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta NaOH 10 M (ó NH4OH concentrado) hasta que la mezcla con el 100% de los materiales solicitados sea fuertemente alcalina. Observar el cambio de color. 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de trabajo limpia y despejada 3. PRUEBA DE BIURET. EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la En una serie de tubos transferir 1 ml de las soluciones de aminoácidos preparadas. Agregar 2 ml. del Reactivo de cronología. Biuret y mezclar. Observar el color desarrollado. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. 4. REACCIÓN DE HOPKINS-COLE. 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica En una serie de tubos transferir 2 ml de las soluciones de 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. aminoácidos preparadas. Agregar 2 ml. de reactivo de 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO Hopkins-cole y mezclar. Agregar lentamente por las INSTRUCCIONAL. paredes del tubo 1 ml. de H2SO4 concentrado, de manera 7. Llenado de bitácora electrónica: que llegue al fondo y se estratifique. NO MEZCLAR. Dejar https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 reposar. Observar el color producido entre la zona de contacto de DEBRIEFING (10 MINUTOS) las dos fases, y solo en caso necesario agitar muy 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. suavemente el tubo para conseguir que se produzca la 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de reacción generadora de color. dudas. 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. 5. PRECIPITACIÓN CON SALES METÁLICAS. 1. En una serie de tubos transferir 3 ml de las soluciones de proteínas preparadas. Alcalinizar con NaOH diluído hasta un pH entre 7 y 8. 2. Agregar 5 gotas de Acetato de Plomo 0.2 M. Describir los resultados obtenidos. 3. Repetir el paso 1 en otra serie de tubos. 4. Agregar 5 gotas de Cloruro mercúrico y anotar las observaciones. 6.

PRUEBA DE LA NINHIDRINA.

En una serie de tubos transferir 2 ml de las soluciones de aminoácidos preparadas. Agregar 0.5 ml. de Ninhidrina al 0.1%, mezclar y calentar a ebullición directamente a la flama del mechero. Anotar el color desarrollado. Limpieza y entrega de materiales. Limpieza y orden del laboratorio. Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica. b) Investigar: Características y propiedades de aminoácidos.

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c) Investigar: fundamento de las pruebas de Biuret, de Hopkins-cole, de Millon, de ninhidrina, de la reacción xantoproteica y la precipitación con sales metálicas. Después de la práctica: a) Reportar en una tabla los resultados de cada una de las pruebas para los aminoácidos probados. Método de Evaluación De la Práctica Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Del Aprendizaje Independiente Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Nelson DL, Cox MM. Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Strong FM, Koch GH. (1981). Biochemistry Laboratory Manual. Third Edition. McGraw-Hill

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Práctica Número:

Escuela de Ciencias de la Salud

Duración (mins/horas):

13

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

4 Metabolismo de proteínas

Nombre de la Práctica

CROMATOGRAFÍA DE AMINOÁCIDOS.

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: a) Analiza las características estructurales y funcionales de los aminoácidos. a) Aplica los fundamentos de la cromatografía en capa fina como una herramienta para la separación e identificación de aminoácidos. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 1 placa cromatográfica de sílica gel en soporte de aluminio. cm). 1 cámara de elusión. 1 micropipeta de 1000 μl 1 micropipeta de 50 μl Puntas para micropipeta de 1000 y 50 μl. 1 matraz volumétrico de 50 ml. 4 tubos eppendorf. 1 vasos de precipitados de 50 ml. 1 probeta de 500 ml. 2 probetas de 50 ml. 1 espátula. 1 charola para pesar. 4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Jabón para manos.

Bitácora de trabajo (10x10 Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa Regla, tijeras, lapis. Un trozo de papel aluminio, un frasco con atomizador.

Equipo: Parrilla de calentamiento. Agitador Vortex Sustancias: 1 ml

Soluciones de aminoácidos al 1% en H2O (Alanina, Aspartato e Histidina) 300 ml Butanol:Ácido acético:Agua (8:2:2) 5 ml Ninhidrina al 0.3%. Agua destilada. Actividades Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

1)

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio con 1 semana de anticipación sus materiales 2. El docente verifica que el alumno ingresó su solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h de anticipación 3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio entreguen el material a los alumnos contra vale de

Colocar la placa cromatográfica sobre una parrilla de calentamiento durante 15 minutos.

2)

Trazar una línea horizontal a 1.5 cm. de la base de la placa con regla y lápiz. Distribuír 4 marcas (M1, M2, M3 y X) sobre la línea con una separación de 2 cm. INDISPENSABLE USAR GUANTES. (Fig. 2).

3)

Con una micropipeta aplicar 1 gota de cada una de las soluciones de aminoácidos y la muestra problema. Dejar secar completamente.

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solicitud y credencial del responsable del equipo, posterior al briefing 4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta con el 100% de los materiales solicitados 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de trabajo limpia y despejada.

4)

Colocar la placa en forma vertical en la cámara cromatográfica conteniendo el disolvente y cubrirla con papel aluminio.

5)

Dejar que el disolvente fluya libremente hasta un cm antes de llegar al borde superior.

EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la cronología. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO INSTRUCCIONAL. 7. Llenado de bitácora electrónica: https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 DEBRIEFING (10 MINUTOS) 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de dudas. 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.

6)

Sacar la placa y marcar con un lápiz la línea donde llegó el disolvente, la distancia entre esta línea y el borde inferior se llama FRENTE DE DISOLVENTE.

7)

Secar la placa al aire y rociarla con ninhidrina con un aspersor ó atomizador.

8)

Colocar la placa en una parrilla de calentamiento hasta que aparezcan las manchas correspondientes.

9)

Con un lápiz delinear las manchas reveladas por la ninhidrina.

10) Medir la distancia del centro de la mancha al punto de aplicación. Esta distancia es el FRENTE DE SOLUTO. 11) Calcular el Rf para cada mancha e intentar identificar la identidad de la muestra problema.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica. b) Investigar: tipos de cromatografía, cálculo de Rf c) Investigar la clasificación de aminoácidos, reacción entre aminoácidos y ninhidrina, aminoácidos cuya ausencia o disminución se asocie con alguna patología.

Después de la práctica: a) Calcular el Rf de las diferentes muestras utilizadas.

b) En base a la comparación de los patrones de separación identificar la muestra problema (X) proporcionada por el profesor. Método de Evaluación De la Práctica Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Del Aprendizaje Independiente Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Feduchi E, Blasco I, Romero CS, Yáñez E. (2011) Bioquímica. Conceptos esenciales. Primera edición. Editorial Médica Panamericana. Madrid. Manzoul, SM, Mohammed, H. (2010). Bioquímica. Editorial El Manual Moderno. México.

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Práctica Número:

Escuela de Ciencias de la Salud

14

Duración (mins/horas):

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

8. Metabolismo de nucleótidos y de otras sustancias nitrogenadas

Nombre de la Práctica

EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS A PARTIR DE LEVADURA

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: a) Analiza las características estructurales y funcionales de los Ácidos nucleicos. b) Aísla, fraccionar e identificar mediante pruebas colorimétricas el azúcar y el grupo fosfato contenidos en la molécula de acidos nucleicos. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 5 tubos de ensayo de 18x150 1 gradilla. 1 pinzas para tubo de ensayo. 1 mechero 1 embudo Buchner. 1 matraz kitasato de 500 ml. 1 matraz kitasato de 250 ml. 1 agitador de vidrio. 3 vasos de precipitados de 250 ml. 1 vasos de precipitados de 50 ml. 2 pipetas serológicas de 10 ml. 2 pipetas serológicas de 5 ml. 1 pipeta serológica de 1 ml. 1 probeta de 100 ml. 2 probetas de 50 ml. 2 propipetas. 1 barra magnética. 1 espátula. 4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Jabón para manos. Papel filtro. Papel indicador. Pipeta pasteur desechable. Gasa Charola para pesar.

Bitácora de trabajo Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa Levadura de panadería.(20 gr/equipo)

Equipo: Parrilla con agitación Bomba de vacío Agitador Vortex Baño maría Sustancias: 30 ml 10 ml 8 ml 50 ml 5 ml 5 ml 5 ml 3 ml 2 ml 5 ml 1 ml

NaOH al 30% FeCl3 al 10% Cloroformo Etanol al 95% HCl concentrado. NaOH 1 N HCl 0.1 N Reactivo de Bial (Orcinol al 0.3% en HCl) H2SO4 3 N H2SO4 10 N (NH4)6Mo7O24.4H2O al 2.5% (con 30% de H2SO4 10 N, aforar con agua)

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Escuela de Ciencias de la Salud

0.1 ml

SnCl2.2H2O al 2.5% (en glicerol)

1 ml 1 ml

KH2PO4 0.1 M Glicerol. Agua destilada. Hielo.

Actividades Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

I.- EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS 1.- Colocar 20 gramos de levadura de panadería en un vaso de precipitados de 250 ml, agregar 30 ml de NaOH al 30%. Agitar con una varilla de vidrio durante 20 minutos hasta formar una suspensión. 2.- Adicionar 20 ml de agua destilada y mezclar. Añadir 10 ml de FeCl3 al 10% y mezclar nuevamente. 3.- Filtrar la suspensión a través de un embudo de filtración implementado con una capa de gasa. Exprimir la pasta usando guantes. Recoger el filtrado en un vaso de precipitados de 250 ml. 4.- Lavar la pasta adicionando 15 m de agua destilada recuperando el lavado en el vaso de precipitados donde recuperó el filtrado anterior. 5.- Si la mezcla de los dos filtrados está turbia filtre nuevamente utilizando papel filtro. 6.-El residuo de la gasa se elimina. 7 – A la mezcla de filtrados de les adiciona 50 ml de etanol al 95% con agitación constante. 8.-Añadir con agitación HCl concentrado hasta acidificar la solución, utilice papel indicador para verificar el pH. Con esto se precipitan los ácidos nucleicos. 9.- Filtrar la suspensión obtenida a través de papel filtro, lavar el residuo con agua destilada recuperando ambos filtrados en un vaso, este filtrado se desecha. 10.- El residuo retenido en el papel filtro son los ACIDOS NUCLEICOS, serán utilizados para realizar los siguientes ensayos:

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio con 1 semana de anticipación sus materiales 2. El docente verifica que el alumno ingresó su solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h de anticipación 3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio entreguen el material a los alumnos contra vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, posterior al briefing 4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta con el 100% de los materiales solicitados 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de trabajo limpia y despejada

EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la cronología. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO INSTRUCCIONAL. 7. Llenado de bitácora electrónica: https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 DEBRIEFING (10 MINUTOS) 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de dudas. 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.

II.- HIDRÓLISIS DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS 1.-Disolver una pequeña porción del ácido nucleico obtenido en 5 ml de NaOH 1N. Calentar en baño de agua hirviendo durante 15 minutos. Dejar enfriar. 2.-Acidificar la solución hasta un pH 3.5 con HC1 0.1N manteniendo de tubo de ensayo en un baño de hielo. Con este hidrolizado se lleva a cabo la PRUEBA DE BIAL: a) En un tubo de ensaye de 18 x 150 se colocan 3 ml del Reactivo de Bial, añadir 1 ml del hidrolizado anterior. Calentar al mechero con agitación, hasta que las primeras burbujas alcancen la superficie. Observar el color desarrollado por la solución. III.-IDENTIFICACIÓN DE FOSFATOS 1.-En un tubo de ensaye de 18 x 150 colocar una porción del ácido nucleico obtenido. Añadir 2 ml de H2SO4 3N. Hervir lentamente durante 5 min para hidrolizar los ácidos nucleicos. Enfriar. 2.-Transferir 1 ml del hidrolizado a un tubo de 18 x 150. Añadir 0.5 ml de H2S04 10N, 1 ml de solución de molibdato de amonio al 2.5% y 5 gotas de cloruro estannoso. Dejar reposar durante 10 minutos. Observar el color desarrollado. Correr como controles una solución de KH2PO4 0.1M y agua destilada en lugar de muestra. 3.- Limpieza y entrega de materiales. 4.- Limpieza y orden del laboratorio.

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Escuela de Ciencias de la Salud Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica. b) Investigar: : composición de ácidos nucleicos, diferentes métodos de extracción de ácidos nucleicos, c) Investigar: fundamento de la prueba de Bial y el método del cloruro estannoso. Después de la práctica: Reportar la eficiencia de la extracción mediante los resultados de identificación de azúcares y fosfatos. Método de Evaluación De la Práctica Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Del Aprendizaje Independiente Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Manzoul, SM, Mohammed, H. (2010). Bioquímica. Editorial El Manual Moderno. México.

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Práctica Número:

Duración (mins/horas):

15

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

9 Adaptaciones metabólicas

Nombre de la Práctica

DETERMINACIÓN DE CALCIO EN LECHE

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: a) Analiza las funciones biológicas del calcio. a) Cuantifica los niveles de calcio a partir de leche de vaca Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material: 3 tubos de ensayo de 13x100 1 gradilla 1 pinzas para tubo de ensayo. 4 matraces volumétricos de 10 ml. 2 matraces volumétricos de 25 ml. 2 vasos de precipitados de 50 ml. 2 vasos de precipitados de 25 ml. 1 probeta de 25 ml. 1 propipeta. 1 agitador de vidrio. 1 pipeta de 5 ml 1 pipeta de 10 ml 4 pipetas Pasteur 4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Jabón para manos. Papel filtro. Papel aluminio Espátula.

Bitácora de trabajo Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa Traer suero de leche o leche para la extracción del suero.

Equipo: Balanza digital. Baño maría. Centrífuga Sustancias: 2 ml suero de leche 2 ml Oxalato de amonio al 10%. 2 ml H2SO4 concentrado. 2 ml Solución stock de KMnO4 10% 2 ml Solución de trabajo de KMnO4 1 N Agua destilada. Actividades Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido

DETERMINACIÓN DE CALCIO (mediante el método Clark Collip)

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio con 1 semana de anticipación sus materiales

En el caso de la determinación de calcio en leche, en primer lugar, debemos de separar el calcio presente del resto de componentes de la muestra. Para ello se trata una muestra de la misma con ácido tricloroacético y se agita la disolución. Se observa la aparición de 2 fases, una fase líquida, el suero, que contiene el calcio, y otra fase, con aspecto de sólido

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2. El docente verifica que el alumno ingresó su solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h de anticipación 3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio entreguen el material a los alumnos contra vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, posterior al briefing 4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta con el 100% de los materiales solicitados 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de trabajo limpia y despejada. EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la cronología. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO INSTRUCCIONAL. 7. Llenado de bitácora electrónica:https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 DEBRIEFING (10 MINUTOS) 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de dudas. 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.

pastoso, que contiene el resto de los constituyentes de la leche (básicamente proteínas y grasas). Se separan ambas fases empleando un embudo de vidrio y filtro de pliegues. El precipitado obtenido se lava con agua destilada, recogiéndose las aguas de lavado junto con el filtrado, que contendrá el calcio originalmente presente Procedimiento: 1.- Colocar en un tubo de ensayo 2 ml de suero de leche 2.- Agregar 3 ml de Oxalato de amonio al 10% 3.- Agitar y mezclar 4.- Recoger el precipitado con un papel filtro y colocarlo en un vaso de precipitado 5.- Una vez obtenido un precipitado, agregar 2 gotas de H2SO4 concentrado. 6. Agitar lentamente con movimientos circulares 7.- Agregar una gota de KMnO4 para obtener un color rosado (se pueden agregar hasta 15 gotas para cambio de color rosado) 8.- El resultado es el mismo en la solución blanca con 2ml de suero y 2 gotas de ácido sulfúrico agregando KMnO4 (1gota).7mg de ca/100 ml leche al gastar 15 gotas de KMnO4 de la muestra problema equivalente a 0.75 ml y 1 gota de KMnO4 en la muestra blanca equivalente a 0.05 ml. 9.- Realizar por duplicado con Solución de trabajo de KMnO4 1 N y al 10% 10.- Limpieza y orden del laboratorio

. Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica. b) Investigar: niveles normales de calcio en suero y en orina, procedimiento para la prueba de calcio en orina, función del retículo endoplásmico en el almacenamiento del calcio, papel del calcio en la función muscular, enfermedades relacionadas al calcio (por lo menos una). c) Determinar cuál es la ingesta recomendada de calcio diariamente d) Para que se utiliza el ácido tricloroacetico Después de la práctica: a) Calcular cuánto fue el valor de calcio obtenido por cada 1 ml y cada 100 ml de muestra. b) Comparar los valores obtenidos con los valores de referencia reportados en la literatura. c) Descrbir como ocurren las reacciones en cada paso del procedimiento Método de Evaluación De la Práctica Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Del Aprendizaje Independiente Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Nelson DL, Cox MM. Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Clark EP y Collip JB. A study of the Tisdall method for the determination of blood serum calcium with a suggested modification. J Biol Chem. 1925, 63:461-464.

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Práctica Número:

Duración (mins/horas):

16

1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura

Procesos metabólicos

Unidad de Contenido

9 Adaptaciones metabólicas

Nombre de la Práctica

INTEGRACIÓN METABÓLICA

Competencia asociada a la práctica.

El estudiante: a) Integra las vías metabólicas de los carbohidratos, lípidos y proteínas en un paciente sano. b) Correlaciona el papel de las hormonas en la regulación de las vías. c) Analiza los resultados de pruebas clínicas en un sujeto normal. d) Relaciona las vías que se encuentran alteradas en un paciente diabético. Materiales

De la Institución/Docente:

Para el Alumno(s):

Material:

Bitácora de trabajo

DETERMINACIÓN DE GLUCOSA: 1 caja de Tiras reactivas One Touch® Ultra®. 1 caja de Lancetas estériles One Touch® Ultra®. 1 recipiente para material punzocortante. 1 recipiente para material biológico infeccioso. 4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Torudas de algodón con alcohol. Jabón para manos.

Equipo de seguridad (Guantes desechables, cubrebocas, lentes de seguridad) Investigación previa Dos voluntarios sanos en ayuno de 4 horas por lo menos. Una dieta rica en carbohidratos y una dieta rica en proteínas.

DETERMINACIÓN DE COLESTEROL Y TRIGLICÉRIDOS: 1 caja de tiras reactivas para determinación de colesterol. 1 caja de tiras reactivas para determinación de triglicéridos. 1 caja de lancetas estériles. DETERMINACIÓN DE UREA 2 micropipetas (10 y 1000 μl). Puntas para micropipetas. Celdas para espectrofotómetro. 1 pipeta serológica de 5 ml. DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO. 2 micropipetas (50 y 1000 μl). Puntas para micropipetas. Celdas para espectrofotómetro. DETERMINACIÓN DE CREATININA. 2 micropipetas (50 y 1000 μl). Puntas para micropipetas. Celdas para espectrofotómetro. Equipo: 2 Glucómetros One Touch® Ultra® 2 Acutrend Roche para determinación de colesterol y triglicéridos Espectrofotómetro Sustancias: Kit para determinación de urea. Kit para determinación de creatinina. Kit para determinación de ácido úrico. Actividades Para el Docente/Facilitador:

Para el Alumno(s):

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BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Presentación e ingreso al laboratorio 2. Diagrama de bloques 3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o examen rápido PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio con 1 semana de anticipación sus materiales 2. El docente verifica que el alumno ingresó su solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h de anticipación 3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio entreguen el material a los alumnos contra vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, posterior al briefing 4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta con el 100% de los materiales solicitados 5. El docente verifica que el alumno tenga el área de trabajo limpia y despejada

EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la cronología. 2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 3. Resuelve dudas durante la ejecución. 4. Promueve el buen Comportamiento del equipo durante la ejecución de la práctica 5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO INSTRUCCIONAL. 7. Llenado de bitácora electrónica: https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 DEBRIEFING (10 MINUTOS) 1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de dudas. 3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.

Una persona experta en la toma de muestras sanguíneas extrae entre 8 y 10 ml de sangre de dos voluntarios en ayuno, quien ya aceptó y firmó una carta de consentimiento informado. Nota: Posteriormente es recomendable que los voluntarios tomen un refrigerio. I.- DETERMINACIÓN DE GLUCOSA. 1.- Dos voluntarios llegarán con un ayuno de por lo menos 4 horas. Uno deberá traer una dieta rica en carbohidratos y el otro una dieta rica en proteínas. 2.- A cada uno de los voluntarios se les determinará la concentración de glucosa en sangre por medio de un glucómetro en los siguientes tiempos: 0 minutos (antes de ingerir los alimentos). 30, 60 y 120 minutos, después de ingerir los alimentos. 3.- Graficar los resultados (tiempo vs concentración de glucosa). II.- DETERMINACIÓN DE COLESTEROL Y TRIGLICÉRIDOS 1.- De la misma forma que para la determinación de glucosa, a cada uno de los voluntarios se les determinará la concentración de colesterol y triglicéridos en sangre por medio de un Acutrend en los siguientes tiempos: 0 minutos (antes de ingerir los alimentos). 120 minutos, después de ingerir los alimentos. 3.- Graficar los resultados (tiempo vs concentración de colesterol y/o triglicéridos). III.-DETERMINACIÓN DE UREA (Método Berthelot modificado) 1.- Preparar el reactivo o reactivos de trabajo con la mezcla que indiquen las instrucciones del kit de determinación de urea. 2.- Encender el espectrofotómetro y calibrarlo (con agua destilada) a la longitud de onda que indique el kit de determinación de urea (600 nm). 3.- Identifica con una marca o un número, tres celdas para espectrofotómetro de la siguiente manera: B (reactivo blanco), M (muestra), P (patrón). 4.- Agrega 5 μl de orina en la celda M y 5 μl de solución patrón en la celda P. 5.- Vierte 500 μl del reactivo de trabajo R1 en las 3 celdas B, M y P. 6.- Mezcla las celdas B, M y S. Incuba 5 minutos a 44emperature ambiente. 7.- Agrega 90 l del reactivo R2 (Hipoclorito) en cada una de las celdas. Mezcla, incuba 10 min a temperatura ambiente. 8.- Lee las celdas B, M y P a una longitud de onda de 600 nm. 9.- Determina la concentración de urea en la celda M de acuerdo a la siguiente fórmula: Conc. de Urea = Amuestra x Conc. del patrón mg/dl Apatrón Conc. Patrón = 50 mg/dl IV. DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO (Método Uricasa-PAP). 1.- En caso de ser necesario, preparar el reactivo o reactivos de trabajo con la mezcla que indiquen las instrucciones del kit de determinación de ácido úrico.

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Escuela de Ciencias de la Salud 2.- Encender el espectrofotómetro y calibrarlo (con agua destilada) a la longitud de onda que indique el kit de determinación de ácido úrico (520 nm). 3.- Identifica con una marca o un número, tres celdas para espectrofotómetro de la siguiente manera: B (reactivo blanco), M (muestra), P (patrón). 4.- Agrega 50 μl de orina en la celda M y 50 μl de solución patrón en la celda P. 5.- Vierte 500 μl del reactivo de trabajo en las 3 celdas B, M y P. 6.- Mezcla las celdas B, M y S. Incuba 15 minutos a temperatura ambiente. 7 - Lee las celdas B, M y P a una longitud de onda de 520 nm. 8.- Determina la concentración de ácido úrico en la celda M de acuerdo a la siguiente fórmula:

Conc. de Ácido úrico = Amuestra x Conc. del patrón mg/dl Apatrón

Conc. Patrón = 8.5 mg/dl

V. DETERMINACIÓN DE CREATININA (Método de Jaffé) 1.- En caso de ser necesario, preparar el reactivo o reactivos de trabajo con la mezcla que indiquen las instrucciones del kit de determinación de creatinina. 2.- Encender el espectrofotómetro y calibrarlo (con agua destilada) a la longitud de onda que indique el kit de determinación de creatinina (510 nm). 3.- Identifica con una marca o un número, tres celdas para espectrofotómetro de la siguiente manera: B (reactivo blanco), M (muestra), P (patrón). 4.- Agrega 50 μl de orina en la celda M y 50 μl de solución patrón en la celda P. 5.- Vierte 500 μl del reactivo de trabajo en las 3 celdas B, M y P. 6.- Mezcla las celdas B, M y S. Pon en marcha el cronómetro. 7 - Leer las celdas B, M y P a una longitud de onda de 510 nm al cabo de 30 segundos (A1) y al cabo de 90 segundos (A2) de la adición de la muestra. 8.- Calcular la diferencia en la absorbancia 2 respecto a la 1: ΔA=A2-A1 9.- Determina la concentración de creatinina en la celda M de acuerdo a la siguiente fórmula: Conc. de Creatinina = ΔAmuestra x Conc. del patrón mg/dl ΔApatrón

Conc. Patrón = 2 mg/dl 10.- Limpieza y entrega de materiales. 11.- Limpieza y orden del laboratorio. Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica: a) Lectura de la práctica. b) Investigar: metabolismo de carbohidratos, lípidos y proteínas. Regulación hormonal del metabolismo. Copyright © UVM México, 2015. Todos los Derechos Reservados.

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c) Investigar: fundamento de las pruebas para determinación de urea, ácido úrico y creatinina. d) Investigar: el motivo por el cuál es necesario realizar dos mediciones para calcular las concentraciones de creatinina. Después de la práctica: a) Reportar la respuesta de los dos sujetos en las concentraciones de los diferentes metabolitos analizados. b) Interpretar los resultados de las diferentes pruebas y asociar los cambios que ocurren en un paciente diabético. Método de Evaluación De la Práctica Investigación previa 20% Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Del Aprendizaje Independiente Examen rápido sobre la investigación previa (40%)

Referencias y Bibliografía Recomendada Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman. Feduchi E, Blasco I, Romero CS, Yáñez E. (2011) Bioquímica. Conceptos esenciales. Primera edición. Editorial Médica Panamericana. Madrid. Manzoul, SM, Mohammed, H. (2010). Bioquímica. Editorial El Manual Moderno. México. Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Química clínica. Teoría, análisis y correlación. 3ª ed. Ed. Pesce Kaplan publicaciones.

Elaboró

Dra. Martha Estela Salcido Neyoy.

Contacto:

Ext. 11454

Cargo/Grado:

Docente de asignatura

Campus:

Querétaro

Fecha:

20 de Julio de 2017

Revisó (validó): Comité Nacional de Validación de QFBT

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ANEXOS ANEXO 1: RÚBRICA DE EVALUACIÓN Parámetro 1.Formato tipo artículo en formato electrónico 5%

2. Ortografía 5%

Excelente 10 pts

Bueno 8 pts

Regular 6 pts

Deficiente 0 pts

Excelente

Bueno

Regular

Deficiente

Hubo incumplimiento en uno de los tres requisitos: -Cumple con el formato que se anexa al final de este manual -Se entregó en tiempo - Se entregó en formato electrónico

Hubo incumplimiento en dos de los tres requisitos: -Cumple con el formato que se anexa al final de este manual -Se entregó en tiempo - Se entregó en formato electrónico

Hubo incumplimiento en los tres requisitos: -Cumple con el formato que se anexa al final de este manual -Se entregó en tiempo - Se entregó en formato electrónico

Bueno

Regular

Deficiente

Presenta entre 1 y 3 errores ortográficos

Presenta entre 3 y 6 errores ortográficos

Bueno

Regular

Deficiente

Hubo incumplimiento en dos de los tres requisitos: -En el resumen describe con sus propias palabras en máximo 1 cuartilla los objetivos del trabajo, la metodología general con los resultados más relevantes. -Redacta los verbos en pasado -Incluye las palabras claves relacionadas a la práctica

Hubo incumplimiento en los tres requisitos: -En el resumen describe con sus propias palabras en máximo 1 cuartilla los objetivos del trabajo, la metodología general con los resultados más relevantes. -Redacta los verbos en pasado -Incluye las palabras claves relacionadas a la práctica

Deficiente

-Cumple con el formato que se anexa al final de este manual -Se entregó en tiempo - Se entregó en formato electrónico

Excelente -No presenta errores de ortografía

3. Resumen y palabras clave 5%

Excelente -En el resumen describe con sus propias palabras en máximo 1 cuartilla los objetivos del trabajo, la metodología general con los resultados más relevantes. -Redacta los verbos en pasado -Incluye las palabras claves relacionadas a la práctica

4. Introducción 15%

Hubo incumplimiento en uno de los tres requisitos: -En el resumen describe con sus propias palabras en máximo 1 cuartilla los objetivos del trabajo, la metodología general con los resultados más relevantes. -Redacta los verbos en pasado -Incluye las palabras claves relacionadas a la práctica

Excelente

Bueno

Regular

-Realiza una revisión bibliográfica donde plantea ordenadamente el tema de investigación, su importancia e implicaciones partiendo de lo general a lo particular. -Incluye las referencia bibliográficas o hemerográficas en

-Realiza una revisión bibliográfica completa donde plantea desordenadamente el tema de investigación (no se cumple la regla de lo general a lo particular), - o no incluye las referencia bibliográficas o hemerográficas en el texto

-Realiza una revisión bibliográfica incompleta - o no incluye las referencia bibliográficas o hemerográficas en el texto

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El reporte incluye más de 6 errores ortográficos

- La revisión bibliográfica es incongruente al tema y no se incluyen las referencias bibliográficas o hemerográficas en el texto

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Escuela de Ciencias de la Salud el texto

5. Planteamiento del problema

El planteamiento responde a la pregunta ¿qué voy a investigar?

6. Justificación

El planteamiento responde a la pregunta ¿por qué voy a investigar?

7. Objetivos 5%

El planteamiento responde a la pregunta ¿para qué voy a investigar?

8. Hipótesis

La hipótesis constituye un juicio de posibilidad que expresa la relación causa efecto (si vs entonces) que se pretende verificar.

9. Método 5%

Excelente -Describe el procedimiento experimental de forma que responde a la pregunta ¿Cómo lo voy a investigar?

10.Resultados 15%

11. Análisis de resultados 20%

12.Conclusiones 20%

El planteamiento responde parcialmente a la pregunta ¿qué voy a investigar? El planteamiento responde parcialmente a la pregunta ¿por qué voy a investigar? El planteamiento responde parcialmente a la pregunta ¿para qué voy a investigar? La hipótesis constituye un juicio de posibilidad que expresa la relación causa efecto (si vs entonces) que se pretende verificar parcialmente correcto.

El planteamiento responde deficientemente a la pregunta ¿qué voy a investigar? El planteamiento responde deficientemente a la pregunta ¿por qué voy a investigar? El planteamiento responde deficientemente a la pregunta ¿para qué voy a investigar? La hipótesis constituye un juicio de posibilidad que expresa la relación causa efecto (si vs entonces) que se pretende verificar de manera deficiente.

Bueno

Regular

-Describe el procedimiento experimental de forma que responde parcialmente correcto a la pregunta ¿Cómo lo voy a investigar?

-Describe el procedimiento experimental de forma que responde de forma deficiente a la pregunta ¿Cómo lo voy a investigar?

No responde a la pregunta ¿qué voy a investigar? No responde a la pregunta ¿por qué voy a investigar? No responde a la pregunta ¿para qué voy a investigar? La hipótesis no constituye un juicio de posibilidad que exprese la relación causa efecto (si vs entonces) que se pretende verificar.

Deficiente -No describe el procedimiento experimental

Excelente

Bueno

Regular

-Recopila y ordena los datos obtenidos presentándolos en párrafos, cuadros o gráficos claramente identificados. -Incluye las fórmulas y sustituciones empleadas

-Recopila y ordena los datos obtenidos presentándolos en párrafos, cuadros o gráficos pero no los identifica claramente -O no incluye las fórmulas y sustituciones empleadas

-Recopila y ordena los datos obtenidos presentándolos en párrafos, cuadros o gráficos pero no los identifica claramente -No incluye las fórmulas y sustituciones empleadas

Excelente

Bueno

Regular

Deficiente

-Interpreta y analiza los resultados obtenidos comparativamente con la bibliografía consultada -Indica las aplicaciones teóricas

-Interpreta y analiza los resultados obtenidos pero no comparativamente con la bibliografía consultada -O no indica las aplicaciones teóricas

- Interpreta y analiza los resultados obtenidos pero no comparativamente con la bibliografía consultada -No indica las aplicaciones teóricas

-No Interpreta y no analiza los resultados obtenidos -Ni tampoco indica las aplicaciones teóricas

Excelente

Bueno

Regular

Deficiente

-Redacta con sus propias palabras si se cumplen o no los

-Redacta con sus propias palabras si se cumplen o no los

-No redacta con sus propias palabras si se cumplen o no los

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Deficiente -No presenta los resultados obtenidos

-No redacta las conclusiones o las copia de textos

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Escuela de Ciencias de la Salud objetivos en base al análisis de los resultados

13.Referencias 5%

objetivos pero no considera completamente el análisis de los resultados

objetivos -o No considera el análisis de los resultados

Excelente

Bueno

Regular

-Presenta por lo menos 3 bibliografías consultadas, en orden alfabético , siguiendo el formato APA

-Presenta menos de 3 bibliografías consultadas - o no las presenta en orden alfabético - o no sigue el formato APA

-Presenta menos de 3 bibliografía consultada, sin orden alfabético , - o no sigue el formato APA

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Deficiente -No presenta bibliografía

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ANEXO 2: REPORTE DE PRÁCTICA

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ANEXO 3: SOLICTUD DE REACTIVOS Y MATERIALES UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MEXICO Región Ciudad de México Campus: Hoja de solicitud de reactivos y materiales de laboratorio Titulo de la práctica Fecha de la práctica Fecha de entrega de solicitud Numero de equipos Semestre Horario Profesor

Materia Carrera Laboratorio REACTIVOS

Descripción del Reactivo

Cantidad por grupo

Observaciones

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