Preparacion Y Esterilizaion De Medios De Cultivo

INTRODUCCIÓN

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos.

Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.

En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida.

Usualmente para preparar un medio sólido se parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel.(1)

PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVO: Al finalizar el trabajo práctico el estudiante estará en capacidad de:

Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y a partir de medios de cultivo sintéticos como los trabajados (agar, caldo). Indicar el método de esterilización apropiado. FUNDAMENTO: • • • •

La preparación adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los microorganismos en el laboratorio. Es un conjunto de nutrientes (fuentes de nitrógeno, minerales, etc.) que necesitan los microbios según su metabolismo. Son diferentes nutrientes de acuerdo a la necesidad de cada microbio. Contienen los diferentes tipos de combinaciones de nutrientes para la necesidad de los microbios.

MEDIOS DE CULTIVO { NUTRIENTES { GELLIDIUM (agar-agar) TIPOS:

SOLIDOS A) CONSISTENCIA: { LIQUIDOS SEMISOLIDOS

( 1,5% agar ) “AGAR” (0% agar) “CALDOS” (< 0.5% agar) “MEDIO”

B) COMPOCICIÓN: {

SIMPLES ENRIQUECIDOS BIOQUÍMICA TRANSPORTE ANTIBIOGRAMA SELECTIVOS DIFERENCIALES

CONSISTENCIA: • • • • •

MEDIOS SOLIDOS: Es cuando se va a emplear en ambiente y permite que su consistencia sea sólida por contener un polisacarido (el gellidium) que bajo ciertas condiciones forme un gel denominado agar agar o colapez. Sirve para aislar colonias. MEDIOS LÍQUIDOS: No tiene agar, jamás van a ser sólidos y se denominan caldos. Sirven para favorecer el crecimiento en masa de un determinado grupo de microbios. MEDIOS SEMISÓLIDOS: Tiene menos de 0.5% de agar y se le conoce como medio, sirve para determinar la capacidad que tienen de movilizarse los microbios. Sirve par evaluar el movimiento psicomotriz de los microbios como se mueven dejan un rastro.

COMPOSICIÓN: SIMPLES: Tienen nutrientes esenciales (fuente de carbono y energía) para el crecimiento de los microbios. ENRIQUECIDO: Tiene fuentes de carbono, proteínas, lípidos, sales, etc. Se le puede incorporar sangre, leche, huevo, etc. BIOQUÍMICA: Son medios para detectar la capacidad bioquímica del microorganismo. TRASNPORTE: Preserva las propiedades fisiológicas de los microorganismos .Sirve intactas para su transporte de una ciudad a otra y se mantenga en buenas condiciones. ANTIBIOGRAMA:

Es el comportamiento de microorganismos frente a los microbios. Permite el crecimiento de cualquier microbio, también la capacidad o resistencia frente a un fármaco. SELECTIVA: De acuerdo a sus componentes permite el crecimiento del medio seleccionado, selecciona que microbio crece y que no crece. DIFERENCIALES: Permite diferenciar fisiológicas, morfológicas, patógenas y no patógenas PREPARACIÓN PARA LA MUESTRA DE UN MEDIO DE CULTIVO:

CON AGAR PASOS A SEGUIR T P T ESTERILIZAR LAS PLACAS MEDIR EL AGUA DESTILADA PESAR EL MEDIO DE CULTIVO MEZCLAR EN MATRAZ MEZCLAR EN BALON CALENTAR EN HORNILLA DISOLVERAL AMBIENTE REPARTIR EN TUBOS LLEVAR AL AUTOCLAVE ENFRIAR PLACAS REPARTIR EL MEDIO DE CULTIVO A PLACAS ACONDICIONAS LOS TUBOS.

SIN AGAR TUBO

MATERIALES A USAR EN LA PRACTICA: • • • • • •

6 placas petri 6 tubos de 20 x 150 6 tubos de 13 x 100 Agar thayer martin Caldo BHI Agar simple

PROCEDIMIENTOS GENERALES: 1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio de cultivo asignado.

2. Pesar la cantidad exacta del medio o las porciones correctas de cada uno de los ingredientes. 3.Cerrar inmediatamente el frasco de medio de cultivo. 4. Disolver la porción pesada de acuerdo con las indicaciones del fabricante. 5.Si es necesario calentar se debe tener cuidado de no sobrecalentar.

I. PROCEDIMIENTOS CON LAS PLACAS PETRI:: •

Previo a todo el procedimiento se corta el papel kraft a la medida, se procede a envolver cada placa y sujetar con pabilo.

•

Luego se lleva a la esterilizadora.

Se debe de hacer asepsia personal y desinfección del área de trabajo.

1º AGAR THAYER MARTIN Cada placa petri contiene -----------------------17ml Nº de placas--------------------------------------- 6 102ml Redondeamos a 100ml *sabiendo que 39 gr es para 1000 ml de agua destilada.

EFECTUAMOS: 39---------------1000 ml X----------------100 ml X= 3.9 *Entonces usaremos 3.9 gr. De agar thayer martin. PESAMOS: Teniendo en cuenta que el papel pesa----------- 0.5 gr. Añadimos el agar-------------------------------------3.9gr 4.4 - Entonces usaremos 3.9 gr de agar.

MEZCLAR:

La medida de agua destilada a usar es de 100 ml, se mesclara con el 3.9 de agar en el matraz de elenmeyer de 250ml.

CALENTAR: Se lleva a la hornilla moviendo constantemente, evitando que ebullicione y rebaze, se encontrara listo al término de la primera ebullición.

Se colocara un tapón de algodón el la boca del matraz. Y cubrir con el papel kraft del agar líquido de llevar al autoclave. Dejar en el autoclave 15 min. Y se espero que enfrie 15min (tº 121 ºC x 15 min)

Pasado los minutos estimados se hace enfriar colocandolo en chorros de agua hasta que se encuentre en temperatura ambiente.

Cerca de un mechero de bunsen se procede a servir en las 6 placas, para evitar una contaminación no se debe alejar la boca del matraz del fuego que ocasiona el mechero de bunsen.

Esperamos que se gelifique, se envolverá y sujetara cada placa petri. Para una adecuada conservación se llevara a una refrigeradora a tº adecuada para su posterior uso.

II.-PROCEDIMIENTOS CON LOS TUBOS DE 20 X 150 CALDO DE CULTIVO BHI Cada tubo contiene------------------------------10ml Nº de tubos-------------------------------- 6 60ml *sabiendo que 37gr es para 1000 ml de agua destilada. EFECTUAMOS: X------------- 60ml X----------------37 ml X= 2.2

*Entonces usaremos 2.2 De Caldo BHI PESAMOS: Teniendo en cuenta que el papel pesa----------- 0.2gr Añadimos el agar---------------------------------2.2gr 2.4 - Entonces usaremos 2.4de caldo BHI MEZCLAR: La medida de agua destilada a usar es de 60ml, se mezclara con el 2.4 de caldo de cultivo. Se disuelve la mescla a tº ambiente. Se sirve el caldo en los 6 tubos. Se coloca tampones de algodón a cada tubo y se sujeta con el papel kraft y el pabilo.

Se lleva al autoclave, durante 15 min III.- PROCEDIMIENTO EN TUBOS DE 13 X 100: AGAR SIMPLE Cada tubo contiene ----------------------3.5ml Nº de tubos-------------------------------- 6 21.0ml *se redondea a 20ml

EFECTUAMOS: X-----------------1000ml X--------------------20gr X= 1.1gr *Entonces usaremos 1.1 de agar simple PESAMOS Teniendo en cuenta que el papel pesa----------- 0.2gr Añadimos el agar------------------------------------1.1gr

1.3 gr - Entonces usaremos 1.1 de agar simpl MEZCLAR: La medida de agua destilada a usar es de 20ml se mezclara con el 1.1gr de caldo de cultivo. CALENTAR: Se lleva a la hornilla moviendo constantemente, evitando que ebullicione y rebaze, se encontrara listo al término de la primera ebullición.

Se sirve el caldo de agar en los 6 tubos se colocara tampones de algodón, se cubre y sujeta con el papel y el hilo.

Se coloca los tubos en la lata y se lleva al autoclave.

Pasado el tiempo se retira del autoclave y se deja enfriar en posición recta.

Cuando ya a secado se envuelve la lata y se lleva a concervar.

RESULTADOS

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El agar THAYER MARTIN al retirar del autoclave se encontraban en estado líquido. El agar THAYER MARTIN en las placas quedaron gelificadas después del servido. El caldo de cultivo siempre permanecera líquido en los tubos. El agar simple mantiene una consistencia semisolida después de enfriarse.

DISCUSIÓN O COMENTARIOS:

1.-Devemos de tener cuidado con el material que vamos a pesar antes de mezclar,evitando cualquier contratiempo. 2.-Concluimos que todo típo de agar se lleva a calentamiento en la hornilla y que todo caldo se disuelve a tº ambiente 3.- Al dejar enfriar debemos de tener en cuenta:

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-medio líquido enfria en forma vertical. medio de cultivo semisolido en forma inclinada apoyado en una Madera para evitar el contacto del medio con el algodón.

BIBLIOGRAFIA: