Practica Nº 4, 5, 6 Micro

PRACTICA Nº 4 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO I.

INTRODUCCION Se han desarrollado y aplicado diversos procesos de desinfección y esterilización para limitar o eliminar a los microrganismo, con el fin de tener medios libres de los mismos. La esterilización es un método de eliminación total de todo tipo de organismo y que asegura la ausencia absoluta de cualquier forma viviente, mientras que la desinfección es un proceso que solamente elimina formas vegetativas de los microorganismos. En un medio de cultivo se ofrecen un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes, preparados en el laboratorio, que suministran los compuestos necesarios para el desarrollo de los microorganismos. Algunas bacterias pueden crecer satisfactoriamente en casi cualquier medio de cultivo, otras bacterias necesitan medios especiales y existen algunas que no pueden crecer en ninguno de los medios desarrollados hasta ahora. Los distintos tipos de medios de cultivo varían según las necesidades de los microorganismos objeto de estudio, pero todos han de cumplir los siguientes requisitos: Existe una gran variedad de medios para el cultivo de los microorganismos en el laboratorio, la mayoría de ellos pueden adquirirse ya elaborados, necesitando algunos sólo la adición de agua o la esterilización. Los medios de cultivo pueden clasificarse: a) POR SU CONSISTENCIA: 1.

Medios Líquidos o Caldos.

2.

Medios Sólidos:

3.

Medios Semisólidos.

b) POR SU ORIGEN 1.

Medios naturales.

2.

Medios sintéticos.

3.

Medios semisintéticos:

c) POR SU COMPOSICIÓN: 1.

Medios Enriquecidos.

2.

Medios de Enriquecimiento.

II.

3.

Medios Selectivos.

4.

Medios Diferenciales:

OBJETIVOS 

Conocer los distintos procesos de esterilización y desinfección.



Comprender la utilidad de la esterilización y desinfección, en la preparación de medios de cultivo.



Preparar medios de cultivo líquidos y sólidos.



Determinar el uso de esos medios para aislar e identificar a los microorganismos.

PRACTICA Nº 5 SIEMBRA , AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS CULTURALES DE LA COLONIAS PARA SU IDENTIFICACIÓN I.

INTRODUCCION Sembrar es inocular los microorganismos en medios de cultivo apropiados para que se desarrollen o reproduzcan en condiciones óptimas. Tiene por finalidad conservar la vitalidad del germen para posteriormente determinar sus propiedades bioquímicas. Para realizar la siembra es necesaria una amplia superficie de medio nutritivo, éste se logra en las placas petri, para que los microorganismos formen colonias aisladas y en menor medida en el agar inclinado en tubos.

II.

OBJETIVO. 

Determinar el uso de los medios para aislar e identificar a los microorganismos.



Realizar toma de muestra y siembra en medios de cultivo.



Efectuar extendido y coloración de Gram de muestra biológica.



Correlacionar los resultados obtenidos con la coloración de Gram y la siembra en los medios de cultivo.



Evaluar las características Culturles de las Colonias para su identificación.

PRACTICA Nº6 STAPHYLOCOCCUS I.

INTRODUCCION Estos microrganismos se caracterizan por su morfología particular, de cocos agrupados a manera de racimos, teniendo comportamiento tintorial Gram positivo. Dentro de las pruebas que se usan para su identificación están la catalasa y la coagulasa, que permitirán su identificación y diferenciación con otros géneros y especies. Así mismo radica su importancia, por el desarrollo de microrganismos multidrogoresistente.

II.

III.

OBJETIVOS 

Determinar la importancia clínica de este género y de las especies más prevalentes.



Reconocer los distintos métodos de identificación.



Observar y diferenciar en los preparados, las características propias de cada especie.



Reconocer la resistencia y sensibilidad a los antibióticos.

MARCO TEÓRICO Familia micrococcaceae Morfología: 

Cocos



Gram +

Características 

Inmóviles



Anaeróbicos facultativos, pueden crecer en presencia o ausencia de oxígeno



Fermentadores de glucosa



Catalasa (+) positiva, prueba importante



Desarrollo: medios con NACl 10%



Temperatura: 18 – 40°C , promedio 37°

IMPORTANCIA CLÍNICA Staphylococcus Aureus

COAGULASA (+)

Staphylococcus Epidermidis

COAGULASA (-)

Staphylococcus Saprophyticus

COAGULASA (-)

Cuadro Clínico  Síndrome de piel escaldada  Foliculitis  Neumonía  Ántrax  Osteomielitis  Meningitis  Sepsis

CULTIVO AGAR SANGRE o

37°

o

Beta hemólisis

o

Staphylococcus Aureus. Amarillo

o

Staphylococcus Epidermidis: Sin pigmentación gris o blanquecina

AISLAMIENTO

AGAR SANGRE

AGAR MANITOL (SALADO)

Colonias convexas, lisas, reddondas, brillantes, blancas o amarillas 2-3 mm

PRUEBAS DIFERENCIALES

Caalasa

DNA -asa

Fermentacion manitol

Hemolsis

Coagulasa

Agar manitol salado

(+) Grumos

POSITIVA

(+) Staphococcus Aureus

COAGULASA

Fermentación del manitol

(-) Coagulasa tubo NEGATIVA

Staphylococcus No aureus

(-) Staphylococcus No Aureus

DIFERENCIACIÓN ANTIBIÓTICA ANTIBIÓTICO

RESISTENCIA

SENSIBILIDAD

Bacitracina

Staphylococcus

SBHA Micrococcus

Neomicina

SBH

Staphylococcus

NOVOBIOCINA

Staphylococcus Saprophyticus

Staphylococcus Epidermidis

El Ssa se encuentra dentro de los estafilococos coagulasa negativo las colonias tienen una pigmentación amarilla y no son hemolíticas

Identificado presuntivamente en el laboratorio por su resistencia a la Novobiocina de 5 mcg y usualmente es sensible a la mayoría de antibióticos urinarios a excepción del ácido nalidiico El Ssa se adhiere mejor a las células uroepiteliales que el S. aureus y el S. epidermidis

Staphylococcus Saprophyticus como patógeno urinario El segundo aegnte más frecuene de cistitis

Agente causal de infecciones agudas del tracto urinario en muejres ambulatorias en edad sexual activa

Se realizaron pruebas de coagulasa, producción de hemólisis en agar sangre (5% sangre de carnero), sensibilidad al disco de novobiocina 85ug) y la confirmación por la producción de ácidos a partir de xilosa, manosa, araabinosa y sacarosa. Se determinó sensibilidad a penicilina, oxacilina, nitrofurantoina