Practica Huevo Embrionado

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE MEDICINA HUMANA ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGÍA MÉDICA

PRACTICA Nº 12: HUEVO EMBRIONADO, ANATOMIA Y VIAS DE INOCULACION. 1. Introducción Muchos de los virus y rickettsias patógenas para el hombre y los animales pueden propagarse en células vivas.

2. Huevo Embrionado Los virus pueden propagarse en las membranas extraembrionarias o en el propio embrión. Anatómicamente el huevo embrionado de gallina presentan en su estructura las siguientes partes:

1.2.2a.3.4.5.6.7.8.9.-

Embrión Cavidad amniótica Membrana amniótica Saco vitelino Albúmina Cavidad alantoidea Membrana corioalantoidea Membrana externa del huevo Cáscara Cámara de aire

2a

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1

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3. Vías de Inoculación Las vías de inoculación y la edad del embrión a usar, depende del virus que va a ser inoculado. Con el objeto de visualizar las cavidades se inoculará un colorante por vía alantoidea y otro por vía amniótica. También se inoculará por vía del saco de yema o saco vitelino

4. Materiales 4.1

Biológico

4.1.1

Huevos embrionados de 7 a 8 días y de 10 a 12 días

4.2

Material de vidrio

4.2.1

Placas de petri

4.3

Equipos e Instrumental

4.3.1

Jeringas de tuberculina con aguja

4.3.2

Ovoscopio

4.3.3

Pinzas de disección

4.3.4

Punzones de acero

4.3.5

Solución fisiológica

4.3.6

Tijeras curvas

4.4.

Soluciones y Colorantes

4.4.1

Alcohol yodado

4.4.2

Azul de metileno al 1 % en agua destilada

4.4.3

Cinta adhesiva

4.4.4

Fucsina al 1 % en agua destilada

5.- Procedimiento 5.1 Inoculación por vía alantoidea 5.1.1

Determinar mediante el Ovoscopio en huevos embrionados de 10 a 12 días, el límite de la cámara de aire y colorear una marca entre los vasos sanguíneos

de

la

membrana

corioalantoidea,

esta

estaría

aproximadamente a 1 cm. por debajo de la cámara de aire. 5.1.2

Cargar la jeringa con azul de metileno.

5.1.3

Desinfectar la cáscara con alcohol yodado sobre la cámara de aire

5.1.4

Perforar con el punzón estéril hacer un pequeño agujero con cuidado en las zonas marcadas.

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2

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5.1.5

Introducir

la

aguja

de

jeringa

de

1ml.

cargada

con

fucsina

(aproximadamente ¼ de la aguja) en un ángulo de 45 grados, e inocular 0,2 ml del colorante. 5.1.6

Cortar con tijeras la cáscara siguiendo la marca que señala la cámara de aire, levantar la membrana corioalantoidea y observar el líquido alantoideo coloreado, el cual se elimina vertiéndolo en un petri con cuidado

5.2

Inoculación por vía amniótica

5.2.1

Determinar mediante el Ovoscopio en huevos embrionados de 10 a 12 días, el límite de la cámara de aire y colorear una marca entre los vasos sanguíneos de la membrana corioalantoidea, esta estaría aproximadamente a 1 cm. por debajo de la cámara de aire.

5.2.2

Cargar la jeringa con fucsina

5.2.3

Desinfectar la cáscara con alcohol yodado sobre la cámara de aire por encima del embrión.

5.2.4

Realizar una perforación rectangular de 0,5 cm2

5.2.5

Dejar caer una gota de solución fisiológica estéril

5.2.6

Introducir con unas pinzas curvas a través de ésta área dentro de la cavidad alantoidea cogiendo al membrana amniótica hacia arriba, formar una pequeña “tienda” en cuya base se inyecta 0,2 ml de un colorante o del inóculo problema

5.2.7

Tapar la abertura con cinta adhesiva

5.3 Cosecha 5.3.1

Cortar con las tijeras la cáscara a nivel del límite de la cámara de aire.

5.3.2

Descargar el líquido alantoideo,

5.3.3

Extraer con pipeta Pasteur el líquido amniótico.

5.3.4

En caso de no haber líquido, hacer un lavado con suero fisiológico estéril (1mL) y luego se colecta este líquido

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ESQUEMAS DE LAS VIAS DE INOCULACION

En Cavidad Alantoidea

(5)

En Cavidad Amniótica (2)

En Saco Vitelino (3)

En Membrana Corioalantoidea (6)

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4