Practica 08. Digestion De Carbohidratos.docx

DEMOSTRACIÓN DE LA DIGESTIÓN Y ABSORCION DE CARBOHIDRATOS GLICEMIA PRE Y POST PRANDIAL. I. INTRODUCCION: La glucosa sanguínea es una de las fuentes de energía más importantes en el organismo y en algunos tejidos altamente especializados. En el cerebro y los glóbulos rojos es la única fuente de energía. Por todo esto, el organismo dispone de una compleja maquinaria metabólica que permite asegurar la constancia de la concentración de glucosa en la sangre y, con ella, la constante disponibilidad de este sustrato a los tejidos. La glucosa en sangre, proviene de dos orígenes: de origen exógeno de los alimentos, y de origen endógeno, que proviene del hígado por glucogenólisis. Por otra parte, hay gasto de glucosa cuando es removida de los tejidos periféricos (para su consumo) y por excreción renal por la orina, por lo tanto la concentración de glucosa en sangre depende del balance entre el aporte y el gasto de la misma en el organismo. Diversos factores que inciden sobre la absorción, producción endógena de glucosa así como la utilización y excreción de la misma, contribuyen a mantener constante la concentración de glucosa en sangre. En el caso del hígado, el transporte de glucosa al interior de las células es por difusión pasiva, siendo el hepatocito permeable para este metabolito. En casi todos los demás tejidos la glucosa no puede penetrar en el interior de las células por simple difusión, sino que lo hace por un mecanismo de difusión controlada, en particular en el tejido adiposo, el corazón y el músculo esquelético. El mecanismo por el cual ocurre este pasaje activo de la glucosa a través de las células de la mucosa intestinal no es muy conocido. Se cree que está íntimamente ligado al transporte de sodio. Este proceso, por ello, se llama cotransporte, y depende de su funcionamiento de que exista una alta concentración de sodio en fluído extracelular. En este caso la glucosa entra en la célula, posiblemente porque se une a la misma proteína transportadora que lleva el sodio. A su vez, el sodio, por la bomba de sodio y potasio, volvería a salir de la célula. Este mecanismo requiere ATP como fuente de energía. La entrada de la glucosa en estas células está supeditada a que, al salir del Na+ mantenga alta concentración en el líquido extracelular. Este es un caso interesante en que un sistema de transporte a través de la membrana favorecería a otro. Los valores normales de glucosa en sangre son variables de acuerdo al método utilizado. Según el método de Folin Wu. Varía entre los 80 – 120 mg%; con el método de la glucosa oxidasa la concentración varía entre 70 – 110 mg/dl. El conocimiento de la glicemia es importante no sólo porque permite tener una idea integral del mecanismo de homeostasis metabólica existente, sino porque las variaciones de ella son expresiones de diversos estados patológicos que se deben investigar y diagnosticar para su tratamiento. La finalidad de la siguiente práctica es demostrar la digestión y absorción de la glucosa, cuantificando la glicemia pre y postprandial, por el método de Glucosa oxidasa; tanto en personas normales como en casos patológicos

II. REACTIVOS A UTILIZAR: -

Estándar: Solución de glucosa 1 g/l GOD/POD: Solución de glucosa oxidasa (1,000 U/ml) y Peróxidasa (120 U/ml). Reactivo 4- AF: Solución de 4 – aminofenazona 25 mmol/l en Buffer Tris 0.92 mol/l. Reactivo Fenol: Solución de Fenol 55 mmol/l. Preparación del Reactivo de trabajo: 500 partes de agua destilada, 50 partes de Reactivo 4- AF, 50 partes de Reactivo Fenol y llevar a 1,000 partes con agua destilada. Agregar 3 partes de enzimas GOD/POD previamente homogenizadas. Mezclar por inversión sin agitar. Rotular y fechar.

III. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES (Procedimiento) Se tomarán dos muestras de sangre : La primera: La persona debe mantener de 4 a 8 horas de ayuno al momento de obtener la muestra. La segunda: Esta muestra se tomará después de una hora, como máximo, después de la ingesta alimenticia. En esos momentos, se extraerán 5 ml. de sangre de la flexura del codo, con jeringa hipodérmica de 10 ml. y con aguja N° 20. Colocar las muestras en tubos de ensayo, se deja reposar 10 minutos, luego se centrifuga a 3000 RPM por 10 minutos. Separar el suero. La determinación de la glicemia se realizará por el método Enzimático de la glucosa oxidasa. Utilizar 4 tubos de ensayo: B (Blanco), S (Standard), Dpre. (Desconocido preprandial) y Dpost. (Desconocido post prandial), colocar:

COMPONENTES Standard Muestra (suero preprandial) Muestra (suero postprandial) Reactivo de trabajo

B ------------1 ml

S 10 ul --------1 ml

Dpre. ----10 ul ----1 ml

Dpost. --------10 ul 1 ml

Incubar todos los tubos 5 minutos en baño de agua a 37 ºC o 25 minutos a 15-25 °C. Leer en Espectrofotómetro a 505 nm llevando el aparato a cero con el blanco. Cálculo de los resultados :

Glucosa (g/l) = D x f

donde

1.00 g/l f = -----------

S y D = Dpre. y Dpost. Antes de multiplicar D x f, Restar a D el Blanco (B) y el resultado se multiplica por f.

IV. CUESTIONARIO: 1. ¿Actualmente, cuál es el rango considerado normal para la glicemia basal? Explique las variaciones en los valores, que usted puede encontrar por ejemplo en una intolerancia a la glucosa.

2. ¿Cómo esperaría encontrar los valores de la glicemia dosada en la sangre venosa y en la sangre arterial? Fundamente las variaciones que se pueden encontrar.

3. ¿Conoce otros métodos para determinar la glicemia? Explique su fundamento 4. ¿Cuál son los criterios bioquímicos, relacionados con la glicemia, para el diagnóstico de diabetes mellitus?

5. ¿Qué variaciones fisiológicas de glicemia puede usted señalar?