Clase No. 9 Pruebas De Identificación De Bacterias [modo De Compatibilidad].pdf

Pruebas de identificación:

Pruebas de Identificación de Bacterias

Esquema de trabajo para la identificación de una cepa bacteriana: 1.

Obtener un cultivo puro

2.

Gram de la bacteria en estudio Se determina:

Claudia Mérida

Forma de la bacteria Forma de agrupación Presencia de esporas y otras características morfológicas de interés

Cultivo de la bacteria para su aislamiento Determinar las características nutricionales

Pruebas de identificación: Esquema de trabajo para la identificación de una cepa bacteriana: 4.

Realización de pruebas primarias: Determinar el género, grupo de géneros o en algún caso familia a la que pertenece una bacteria aislada. Entre estas pruebas se encuentran: Gram Catalasa Oxidasa OF Fermentación de glucosa Esporas Crecimiento en aerobiosis y anaerobiosis Movilidad

Pruebas de identificación: Esquema de trabajo para la identificación de una cepa bacteriana: Realización de otras pruebas (secundarias): A efectos de llegar a especie. Estas dependerán del género o familia determinado. Entre estas se encuentran: producción de pigmentos producción de indol producción de coagulasa, etc.

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Pruebas de identificación: Bioquímicas

Pruebas de Identificación

Serológicas Automatizadas (Pruebas bioquímicas)

BIOQUÍMICAS

Métodos Moleculares (PCR)

Pruebas bioquímicas: Las pruebas bioquímicas han sido ampliamente utilizadas para diferenciar bacterias. Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar azúcares, la presencia de enzimas, la degradación de compuestos, la producción de compuestos coloreados, entre otras.

Pruebas bioquímicas: Triple azúcar Herro (TSI) Agar Lisina Hierro (LIA) Sulfuro, Indol, Movilidad (SIM) Movilidad, Indol, Ornitina (MIO) Movilidad, Indol, Urea (Ureasa) (MIU) Citrato Voges-Proskauer Rojo de metilo

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Pruebas de identificación API Creada en 1970, la gama API ha revolucionado completamente el campo de la bacteriología La gama API® introdujo una versión estandarizada y miniaturizada de las técnicas existentes, incluidas las complejas de realizar y de leer Con API®, la identificación bacteriana se volvió simple, rápida y fiable API® 20 E fue el primer sistema de identificación desarrollado que asociaba una galería de pruebas bioquímicas y una base de datos El concepto innovador de API® también supuso el desarrollo de un método de cálculo, conocido como la identificación numérica . Este método ha permitido el desarrollo de programas , que hacen la identificación más rápida y más precisa

Pruebas de identificación API Actualmente, la gama API es una de las gamas más amplia disponible. Incluye 15 sistemas de identificación que cubren prácticamente todos los grupos de bacterias y más de 550 especies diferentes. Las nuevas galerías desarrolladas permiten identificar bacterias cuya importancia aumenta paulatinamente como: Corynebacterias, Campylobacter, Listeria, Neisseria,

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Pruebas de Identificación

SEROLÓGICAS

Pruebas de identificación:

Pruebas Serológicas de Identificación de Bacterias

Esquema de trabajo para la identificación de una cepa bacteriana: Para realizar identificaciones más rápidas, o cuando las pruebas bioquímicas no son concluyentes, se recurre al uso de antisueros específicos

Las pruebas de aglutinación con partículas de látex han sido diseñadas para la identificación bacteriana y caracterización de los mecanismos de resistencia más frecuentes en la práctica clínica

Se usan sueros polivalentes y para la caracterización serológica se usan sueros monovalentes dentro de cada tipo de antígeno Existen en el comercio antisueros para caracterización de:

Son aplicables tanto sobre aislamientos en medios de cultivo como sobre muestra clínica directa

Salmonella sp Shigella sp. E.coli Haemophillus sp., etc.

Tienen una afinidad específica para los microorganismos

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Pruebas Serológicas de Identificación de Bacterias

Pruebas de identificación

AUTOMATIZADAS MICROSCAN

Preparación del panel

MicroScan Es un equipamiento semiautomático para el diagnostico en microbiología, que permite determinar la identificación a nivel de especie y la sensibilidad antimicrobiana in vitro de bacterias aisladas a partir de muestras clínicas. Marca: Auto Scan-4, Dade Behring- Microscan Se utilizan con los paneles MicroScan que contienen medios, diluciones seriadas de antibióticos y reactivos seleccionados Las concentraciones inhibitorias mínimas y las identificaciones bacterianas se determinan por cambios de color (lectura espectrofotometrica de absorbancia), o grado de turbidez (lectura de la absorbancia) en los pocillos de los paneles MicroScan El Autoscan-4 lee individualmente el panel inoculado con la suspensión bacteriana brindando en cinco segundos la identificación del microorganismo y su susceptibilidad a una amplia gama de antibióticos

PANELES CONVENCIONALES POSITIVOS Y NEGATIVOS

Prepare el inóculo ajustado a 0.5 McFarland

100 µl

25 ml Pluronic - D

3 ml salina estéril

Agregue aceite si es necesario

Agite Usando el RENOK Inocular/ Rehidratar el panel con 115 µl por pozo

Vacíe a:

Inoculador Botella de Prompt Incubar

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PREPARACIÓN DEL INÓCULO CON PROMPT

INOCULACIÓN DE PANELES

Método estandarizado • 5 x10(5) UFC/mL • Aprobado por la FDA

1) Desembolsar el Panel

2) Imprimir y pegar el código de barras al panel

3) Tomar la colonia

4) Un prompt para ID y sensibilidad.

Más fácil que crear el 0.5 McFarland 5) Vaciar suspensión bacteriana al inoculador

LECTURA DEL PANEL-REACCIONES BIOQUÍMICAS

6) Preparar una placa de pureza

7) Usar el Renok para 9) Cargar el panel inocular panel 8) Dispensar aceite mineral

Los resultados de un panel Positivo, después de la incubación de 18 horas y la adición de reactivos.

La identificación de las bacterias se basa en la actividad metabolítica, los tipos de pruebas bioquímicas que producen son predecibles la mayoría de las veces Los pozos del panel contienen medios para la identificación: substratos y/o inhibidores del crecimiento, que, dependiendo de las especies de bacterias presentes, exhiben cambios de color (reacciones bioquímicas cromogénicas) o incrementan la turbidez, después de la incubación

La parte superior del panel contiene 27 pozos con pruebas bioquímicas y nutrientes para que la bacteria crezca. Los resultados de las pruebas bioquímicas en cada pozo se usan para identificar el microorganismo. Si una bacteria produce un producto o una enzima en particular, el color del pozo cambia.

Los instrumentos automatizados leen las reacciones en el panel, comparando los valores de los controles almacenados, envían los datos y luego los analizan Los paneles también pueden leerse manualmente

Los resultados de un panel Negativo después de la incubación de 18 horas y la adición de reactivos.

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Pruebas de Identificación

Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)

Métodos Moleculares PCR

Reacción en Cadena de la Polimerasa La reacción en cadena de la polimerasa, cuyas iniciales en inglés son PCR (“Polymerase Chain Reaction"), es una técnica que fue desarrollada por Kary Mullis en 1986

Reacción en Cadena de la Polimerasa

Con esta metodología se pueden producir en el laboratorio múltiples copias de un fragmento de ADN específico

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Reacción en Cadena de la Polimerasa Este proceso se lleva a cabo en un equipo llamado termociclador.

Reacción en Cadena de la Polimerasa La detección del producto de la Reacción en Cadena de la Polimerasa se realiza normalmente mediante corrido electroforético.

Este aparato realiza los ciclos en los tiempos y temperaturas programadas de forma exacta.

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Reacción en Cadena de la Polimerasa Electroforesis:

Reacción en Cadena de la Polimerasa PCR en tiempo real: Preparación automatizada de muestra Por ejemplo: Carga Viral de VIH en COBAS ampliprep

Reacción en Cadena de la Polimerasa PCR en tiempo real: Amplificación y detección

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