Tea Microbiología Final Ddt.pptx

“Año del del Diálogo y Reconciliación Nacional” Universidad Nacional De Piura Facultad De Ciencias Escuela Profesional De Ciencias Biológicas Determinación de microorganismos y especies de larvas de zancudos en ovitrampas en la Universidad Nacional de Piura.

TEMA:

ALUMNOS:

CURSO:

PROFESORA:

• • • • • •

Acaro García Laura Alexandra. Céspedes Saavedra Kebin David Garabito Pacherres Karen Yasmid Nuñez Sosa Renzo Aarón Pasapera Rimaicuna Fran Esler Pintado Juárez Jesús Alejandro MICROBIOLOGÍA. Blga. M. Dorothy Torres de León M Sc

INTRODUCCIÓN Las ovitrampasvitrampas, son trampas de ovipostura para insectos, confeccionadas con material plástico de color oscuro que simulan criaderos, donde, a través de la presencia de los huevos, se puede inferir la densidad de mosquitos adultos en un área evaluada. Las ovitrampas son envases de forma cónica, de material plástico liviano y de color negro con capacidad para un volumen de 500mL, con base plana que permite mantener la posición vertical y pueden ser apiladas para su fácil transporte. El envase posee una etiqueta donde se registra el código y las coordenadas de longitud,

fechas de inspección y siglas del

responsable (Velázquez et al, 2015) Las ovitrampas han sido usadas desde 1965 en la vigilancia de Ae. aegypti, como un instrumento para determinar la distribución del mosquito, para medir la fluctuación estacional de las poblaciones y evaluar la eficacia de la aplicación de insecticidas. También se utilizan como una estrategia de muestreo presencia-ausencia, lo cual permite una estimación de la densidad mediante la proporción de muestras positivas.

 Objetivos 

Objetivo General

Determinar microorganismos y diferentes tipos de zancudos en ovitrampas de la Universidad Nacional de Piura. 

Objetivos Específicos

•

Determinar la carga microbiana en las ovitrampas de la UNP.

•

Identificar los diferentes tipos de zancudos en las ovitrampas de la UNP.

•

Lograr aislar microorganismos presentes en las ovitrampas.

 El principio o base fisiológico de la efectividad de las ovitrampas, consiste en que las hembras grávidas de Ae. aegypti deben localizar sitios para ovipositar, ya que esta especie coloca los huevos individualmente en las superficies de las paredes internas y por encima del nivel del agua en receptáculos naturales o artificiales (Vargas, 2002)  La vigilancia se debe mantener en todos los escenarios, las intervenciones pueden ser de tipo control focal o nebulización espacial. Después de las intervenciones se evalúan las mismas y se continúa la vigilancia. El cambio de escenario implicará un cambio de acciones además de cambio en la temporalidad en la colocación de las ovitrampas a fin de conseguir sostenibiidad en la estrategia de vigilancia e intervención (Reiter, 2001)  Los componentes y las dinámicas de estos sistemas se han descrito muy poco, pero estas tiene implicaciones importantes para la producción mosquitos adultos así como la formulación de los pesticidas microbianos. Las larvas de Aedes son filtradoras de microorganismos de la columna de agua y de la superficie de sus pequeños hábitats acuáticos. La energía del hábitat larval es proveída por la materia orgánica de las hojas de arboles o plantas que caen al criadero (Kaufman et al. 2000).

Antecedentes Las ovitrampas han sido usadas desde 1965 en la vigilancia del Ae. aegypti. Las ventajas del uso de ovitrampas en la vigilancia entomológica del vector causante del dengue radica en su buena sensibilidad (detectan el vector en baja densidad y practicidad) en un área urbana (Villaseca, et al, 2002), siendo un método sensible

y económico. La identificación del riesgo entomológico actualmente está basada en el cálculo de los índices tradicionales Stegomyia para medir las densidades de la población de Ae. aegypti. Estos indicadores no toman en cuenta las

variaciones en la producción de adultos entre los tipos de contenedores de agua (Domínguez, 2010).

 Se han realizado varios estudios encaminados en el uso de sustancias atrayentes para colector y estimar abundancias poblacionales relativas de diferentes especies de mosquitos, aprovechando su capacidad para detectar a sus hospederos a través del olor. Para atraer a las hembras preparadas para ovopositar se han usado infusiones de hiervas y hongos y extractos de huevos de Ae. Aegyti. En Virginia y Nuevo México se utilizaron infusiones con estiércol de vaca y conejo, así como hierba y paja de trigo, resultando más atractivas las infusiones de hierbas y paja de trigo, que los excrementos de vaca y conejo, para las especies Culex pipiens y C. restuans. En Brasil, utilizaron extractos de hoja de marañón, cascaras de papa y pasto de guinea, encontraron que Ae. Aegyti, deposito un mayor número de huevos en las ovitrampas con dichos atrayentes (Tovar, 2016).  Las ovitrampas empleadas en este estudio consistían en un recipiente plástico de color negro, de 15 cm de alto por 32 cm de circunferencia, que contenía 700 cm3 del medio atrayente por evaluar (infusión de heno al 10 y 20 % y agua declorada. En la margen superior interna de la ovitrampa se colocó el sustrato para la ovoposición, el cual consistió en un trozo de tela de 8 x 32 cm de toalla, dacrón y franela de color rojo (Quimbayo et al, 2014).

Conceptos:  Ovitrampa, es un dispositivo hecho de un bote plástico de color negro, el cual es llenado a partes de volumen y recubierto sobre el borde de agua con papel filtro. Se usa para colectar huevos de vectores de dengue como Ae. aegypti y es la medida de elección para monitorear poblaciones y riesgos entomológicos de transmisión(Conde O. 2003).  Esto de realizo a través de muestreo y monitoreo, técnicas probabilísticas que garantizan con cierta certidumbre la representatividad de los resultados de una porción de la población de estudio. Es decir, que es el proceso de selección de una muestra (Murrieta, 2006). Y así poder determinar los seres vivos microscópicos, capaces de realizar sus procesos vitales tales como crecer, alimentarse, producir energía y reproducirse, es decir microorganismos que habitan en la ovitrampa .

Problema  ¿Es posible determinar los microorganismos y las especies de zancudos en las ovitrampas colocadas alrededor de la Universidad Nacional de Piura?

Hipótesis  Existen microorganismos (esporulados) y diferentes tipos de zancudos en las ovitrampas de la Universidad Nacional de Piura

Material y Método  Área de estudio

Georeferenciación de las ovitrampas Puntos de muestreo

código

Coordenadas

Siglas del responsable

Comedor

0001

5°10'37.8"S 80°37'11.4"W

FP

Piscigranja

0002

5°10'48.7"S 80°36'59.4"W

RÑ

Zootecnia

0003

5°10'52.6"S 80°37'01.3"W

RÑ

Vivero

0004

5°10'39.0"S 80°37'07.6"W

FP

Laboratorio de microbiología

0005

5°10'38.5"S 80°37'06.2"W

AA

Auditorio

0006

5°10'45.7"S 80°37'09.0"W

AP

Facultad de educación

0007

5°10'40.1"S 80°37'05.8"W

KG

Biblioteca de biología

0008

5°10'47.9"S 80°37'05.2"W

KC

Ex estudios generales

0009

5°10'42.9"S 80°37'05.7"W

KG

petróleo

0010

5°10'47.4"S 80°37'02.9"W

AP

Contrucción ovitrampas

Recolección de muestras  Para Análisis de huevos y lavas de zancudos  Tras verificar la presencia de huevos, se procedió a contabilizarlos por cada tira de papel con ayuda de un estereoscopio, luego será inmersa en bandejas con agua, para permitir la eclosión de las larvas y pueda realizarse la identificación taxonómica.  Para Análisis de microorganismos :  Se recolectaron muestras de cuatro puntos estos eran comedor, piscigranja, laboratorio de microbiología y vivero esto debido a que los otros puntos no se pudo lograr preservarlos a causa que fueron encontrados tirados y otros desaparecidos.  Para la toma de da muestras se utilizaron tuberculinas ya que estas tenían 1 ml funcionando como pipetas, estas fueron llevadas con mucho cuidado al laboratorio para su respectivo análisis.

En el Laboratorio  Análisis de larvas de zancudo: Estereoscopio; en un periodo corto de siete (7) días, se observa la presencia de larvas, es un indicador de alta infestación del vector en un área de 200m lineales. Por tanto, requiere intervención de control vectorial inmediato.  Análisis de microorganismos: Agar selectivo de Bacillus cereus Peptona

1.0

Manitol

10.0

Cloruro de sodio

2.0

Sulfato de magnesio

0.1

Fosfato disódico

2.5

Fosfato monopotásico

0.25

Azul de bromotimol

0.12

Piruvato de sodio

10.0

Agar

14.0

pH final: 7.2 ± 0.2

 Diluciones sucesivas: 10-1 (1 ml)  Tratamiento térmico: Para el tratamiento térmico se colocaron los tubos en una vaso de precipitado con agua a una temperatura de 80°c para eliminar células vegetativas y solo queden los esporulados (bacterias de interés) esto se mantiene constante para ello se hace uso de una cocina y termómetro industrial. El tiempo que tiene que permanecer es de 10 minutos luego de trascurrido este se procede a colocarlos en agua fría para después incubar

Resultados  Para zancudos: Solo se encontró 1 sola especie de larva Culex pipiens

Puntos de muestreo

Semana 1 Comedor 0 Piscigranja 0 Zootecnia 0 Vivero 0 Laboratorio de 0 microbiología

Presencia de huevos Semana Semana Semana 2 3 4 0 0 0 0 11 5 0 0 0 4 0 6 0 0 0

total 0 16 0 10 0

Auditorio Facultad de educación

0 0

0 0

0 0

0 0

0 0

Biblioteca de biología Ex estudios generales petróleo total

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0 0

0 4

0 11

0 11

0 26

 Para microorganismos: El diagnóstico primario se basa en la apariencia de la colonia, precipitación de la lecitina hidrolizada y en la falta de utilización del manitol por Bacillus cereus. Las colonias típicas de B. cereus son crenadas, cerca de 2 mm de diámetro y tienen un color azul brillante tornasol (peacock blue) rodeado por un precipitado de yema de huevo del mismo color. Estos hallazgos diferencian B. cereus de otras especies de Bacillus excepto B. thuringiensis. Estos microorganismos producen una reacción de aclaramiento sobre la yema de huevo en contraste al precipitado que produce B. cereus. Además se recomienda un examen microscópico para evaluar la presencia de glóbulos de lípidos en las células vegetativas que es una prueba rápida y confirmatoria de B. cereus.

Discusión Los medios que permiten el crecimiento de determinados microorganismos, son llamados medios selectivos, un ejemplo de estos medios sería el medio selectivo para Bacillus cereus, que fue utilizado para aislar microorganismos obtenidos de las ovitrampas de zancudo, en sus componentes de este medio están: hidrolizado de carne, peptona de caseína, D-Mannitol, cloruro sódico y agar agar, en cuanto a la preparación se disuelve 46 g de medio en 900 ml de agua destilada, se caliente hasta la ebullición agitando, para su total homogenización. Autoclavar a 121 °c durante 15

minutos. El color final del medio es salmón. Enfriar a 50 °c y añadir 10 ml de polimixina B 106 UI (SMS009) (reconstruidas en 100 ml de agua estéril) y 50 ml de emulsión de yema de huevo (SBH010) o bien 50 ml de yema de huevo con polimixina B (SAJ001), asépticamente. Mezclar y repartir en placas, sin recalentar (Sarmiento, 2015).

• Según lo mencionado por el autor el color final del medio debe ser un color salmón, pero al preparar el agar no se tornó de este color, sino que se tornó de color verde petróleo oscuro, esto por la presencia de sustancias químicas indicadoras de pH,

además al agregar la yema de huevo el agar se tornó de un color amarillo, se repartió en placas y así permaneció. Según Sanz (2011), la tinción de Gram es una de las tinciones diferenciales de más

uso en bacteriología, pues debido al distinto efecto de la combinación de los colorantes, mordiente y disolventes sobre los distintos microorganismos está relacionado con la composición química de su pared celular. Por esta razón a las bacterias que se le aplicara la tinción deben de proceder de cultivos jóvenes (12 a 18

horas para las bacterias más comunes) con células de fase exponencial de crecimiento.

• Al realizar la tinción de Gram, se logró evidenciar la presencia de bacterias Gram positivas pues se colorearon de violeta, estas bacterias eran Bacilos ya que presentaban la forma de bastones y fue el resultado del aislamiento de microorganismos a partir de las ovitrampas. Dentro de los bacilos Gram positivos (BGP) se encuentran algunos de los patógenos más agresivos para el ser humano, la gran mayoría de las especies bacterianas de este grupo no son patógenos primarios. Muchos forman parte de la flora normal del cuerpo humano y se encuentran ampliamente distribuidos en el ambiente. El género Bacillus es prototipo de la familia Bacillaceae, son BGP grandes y esporulados, no exigentes y en general móviles. Incluye bacterias aerobias y anaerobias facultativas, se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza (Macedo y Vola, 2008).

• Según lo dicho por los autores, los Bacillos están ampliamente distribuidos en el ambiente, razón por la cual se lograron observar a partir del contenido de las ovitrampas de zancudos.

Conclusiones:  En el aislamiento de microorganismos a partir de las ovitrampas,a traves de la tinción de Gram, se logró identificar presencia de bacterias Gram positivas, estas bacterias eran Bacilos ya que presentaban la forma de bastones .  Se identificó colonias típicas de B. cereus crenadas, con un aprox 2 mm de diámetro y un color azul brillante tornasol predominante rodeado por un precipitado de yema de huevo del mismo color.  Se logro identificar 1 sola especie de larva Culex pipiens, denominado el mosquito común es una especie cosmopolita. Su gran capacidad de adaptación a distintos nichos ecológicos en estado de larva y su gran resistencia en estado adulto a las variaciones de temperatura, le hace ser uno de los mosquitos de más amplia distribución y abundancia.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS  Galera, M. A. (2010). Evaluación de ovitrampas como sistema de vigilancia entomológica en sitios públicos de Chetumal, Quintana Roo.

 Quimbayo M, R.-U. G.-H. (2014). Obtenido de http://www.scielo.org.co/pdf/bio/v34n3/v34n3a16.pdf  Zamora, I. T. (2016). Fluctuacion de Aedes Aegypti (Lennaeus, 1762), subceptibilidad a insectidas y el efecto de atrayentes, para su posible manejo en baja califronia sur, Mexico". La paz , baja california sur.

 Conde O. 2003. Estudio de la Longevidad y Ciclo Gonotrófico del Ae aegypti, cepa Girardot encondiciones de laboratorio. (Tesis de Licenciatura) Bogotá Pontificia Universidad Javierina.  Colvard J. 1978. El comportamiento alimentario de los mosquitos. Investigación y Ciencia. Edición en español Scientific American, Núm. (23): 86-93.  Hernández A. M. 2007. Epidemiologia Diseño y Análisis de Estudio. Ed. Médica Panamericana .Pág. 387.

 Velázquez, A., Minaya, P., Reyes, N., Laguna, V.,2015. Protocolo sanitario de urgencia mediante el uso de ovitrampas para establecimientos de salud. Ministerio de salud. MINSA. Peru.pp: 10-11  Vargas V. M. 2002. Uso de ovitrampas en los programas de prevención y control del dengue. Rev. Col. de MQC de Costa Rica. Pag: 122-124  Kaufman MG, Walker ED, Odelson DA, and MJ Klug. 2000. Microbial community ecology insect nutrition. American Entomologist 46(3):173-184.  Reiter P. y M.B Nathan, 2001. Guías para la Evaluación de la Eficacia del Rociado Espacial de Insecticidas para el control del vector del Dengue. Organización Mundial de la Salud. Pp:10-25.  Cervera, S. A. (2011). Practicas de microbiologia. universidad de la Rioja.  M. Macedo, M. V. (2008). Principales grupos de bacilos Gram positivos aerobios.  Sarmiento, L. (27 de marzo de 2015). Microkit: medios de cultivo. Obtenido de Microkit: medios de cultivo.