Laboratorio-de-experimentación-bioquímica-4-1.docx

PRÁCTICA 4 |LABORATORIO DE EXPERIMENTACIÓN BIOQUÍMICA- BIOLÓGICA| |UNIVERIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO| |FACULTAD DE QUÍMICA|

EQUIPO

LÓPEZ TRUJILLO RUBÍ CONSUELO GREY SUÁREZ JUAN EMMANUEL MACÍAS FLORES SAUL JOSUÉ

PROFESOR

DRA. ESCOBAR CABRERA JESICA

Organelos Celulares y Demostración de Fosfatasa ácida Laboratorio de Experimentación Bioquímica- Biológica / Facultad de Química Universidad Autónoma de Querétaro, México. 6/Febrero/2018 Resumen. Se realizaron varios cortes de vegetales con el fin de observar y caracterizar a los plastos, se utilizó, jitomate, papa y algas de acuario para observar los plastos de las células. Además, se realizó la disección de un ratón de laboratorio con el objetivo de extraer los testículos y posteriormente con ellos realizar la observación de los lisosomas, a esta muestra se le aplicaron las condiciones necesarias como B- fosfatasa, luego un tratamiento con para precipitar con fosfato de plomo. PALABRAS CLAVE: Lisosomas, plastos, organelos celulares, enzimas. Introducción. Existe una gran diversidad de células eucariotas, pero muchos rasgos entre estas son comunes. Por ejemplo, los plastos, que son encontrados en la mayoría de las células vegetales. Los plastos son pequeños cuerpos involucrados en la síntesis o almacenamiento de los productos alimenticios en las plantas. Hay tres tipos básicos: Leucoplasto que carece de color y permite la conversión de la glucosa en azucares complejos, grasas o proteínas. Cromoplasto que alacena los pigmentos de la célula vegetal, como el caroteno, que le da color a las zanahorias. Cloroplasto, los plastos más importantes, pues contienen clorofila, el pigmento que produce la fotosíntesis. Por otra parte, en las células animales podemos encontrar lisosomas en el citoplasma. Se originan en el aparato de Golgi, éste consta de una estructura membranosa que poseen alrededor de 40 hidrolasas distintas capaces de hidrolizar constituyentes macromoleculares de la célula, proteínas, polisacáridos y ácidos nucleicos. Como todos los demás orgánulos intracelulares los lisosomas no contienen únicamente colección de enzimas, sino que también poseen una única membrana. Esta membrana posee proteínas de trasporte que permite que los productos finales de la digestión de las macromoléculas como los aminoácidos, los azucares y los nucleótidos son trasferidos hacia el citosol, desde donde la célula puede excretarlos o utilizarlos. La membrana contiene también una bomba de H+impulsada por ATP, que como la ATPasa e la membrana endosomica bombea protones hacia el lisosoma y de esta manera mantiene su contenido de un pH acido. La mayoría de las proteínas de la membrana del lisosoma están altamente glucosiladas de manera inusual; los azucares que cubren gran parte de la superficie de la proteína que enfrentan a la luz, las protegen de la digestión por las proteasas lisosómicas.

Para identificar a los lisosomas se hace por un método citoquímico, el cual consiste en la tinción positiva de la fosfatasa ácida (la enzima más común en los lisosomas y usada para liberar grupos fosfatos adheridos a otras moléculas). El lisosoma es una vesícula membranosa que contiene enzimas hidrolíticas que permiten la digestión intracelular de macromoléculas. En este método, la enzima fosfatasa ácida hidroliza el βglicerofosfato. Al tener plomo como medio de reacción, el fosfato liberado, es precipitado como fosfato de plomo, el cual es de color blanco o transparente. Debido a su complicada distinción, es transformado a sulfuro de plomo, el cual tiene una coloración café o negra característica. (J, 2009)

Figura 1. Las vesículas brotan de una membrana y se fusionan con otras; trasportan los componentes de la membrana y la proteína solubles entre los compartimientos celulares

Hipótesis Las células vegetales contienen distintos orgánulos por lo cual al observar un corte de tejidos de zanahoria y jitomate (cromoplastos), papa (leucoplastos) y algas (cromoplastos) se podrá identificar la forma y característica distintiva de estos plastos. Los lisosomas, se pueden identificar con técnicas que incluyen en trabajo sobre la fosfatasa acida una de las

enzimas encontrada en este orgánulo y bajo tratamiento con B-glicerofosfato, y precipitando con sulfato de plomo para que se observe el color marrón bajo el microscopio.

Medio-reacción

Objetivos General. Observar y conocer la función de los plastos y lisosomas en células vegetales y animales. Así como conocer el manejo de animales de laboratorio. Específicos   

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Distinguir entre cloroplasto, cromoplasto y leucoplastos. Observar e identificar características específicas de cada tipo de plasto en las células vegetales. Reconocer la estructura y coloración de los plastos en una vista de células vegetales bajo el microscopio óptico Observar la estructura del lisosoma, bajo el microscopio óptico, para su caracterización. Aprender las técnicas adecuadas para la correcta identificación de lisosomas, orgánulos encargados de la digestión intracelular. Aprender el adecuado manejo de animales de experimentación.

Resultados Observación de los plastos en las muestras de vegetales.

Figura 2. Observación de leucoplastos en la papa.

Figura 3. Observación de cromoplastos en jitomate.

Procedimiento para organelos.

Figura 4. Observación de cromoplastos en zanahoria.

Figura 5. Observación de cloroplastos en alga.

Procedimiento para fosfatasa ácida.

Figura 6. Observación de pigmentación de sulfato de plomo en testículos de ratón.

Discusión La célula vegetal o animal que posee o no plastos, los cuales son organelos distintivos entre estos tipos celulares. Los plastos son organelos típicos de la arquitectura de la célula vegetal, que surgen a partir de los proplastos de las células embrionarias, dando origen a tres tipos de plastos, rodeados por una membrana doble y con funciones metabólicas propias del mundo vegetal. Las funciones y características de los plastos se encuentran compartimentalizado, dando lugar a microambientes metabólicos delimitados por una membrana. (Rodríguez-Fuentes, 2012). Es por eso por lo que en cada muestra vegetal se observaron diferentes plastos; en la papa leucoplastos, zanahoria y jitomate cromoplastos y cloroplastos en el alga, estos fueron apreciados gracias al microscopio. Además, fue posible distinguir su pared celular de las células vegetales de la papa y del alga. En tanto los lisosomas, fue posible demostrar su presencia en el tejido testicular del ratón; debido a la reacción de la fosfatasa ácida con el medio de reacción, dando un color café, característico del sulfuro de plomo. sin embargo, tuvo muy poca pigmentación café del sulfuro de plomo. esto se debe a que el pH en el medio de reacción no era de pH de 5, o al menos eso se intuye. Los lisosomas reconocidos como vesículas que contienen enzimas hidrolíticas cuyo pH óptimo es ácido (4.8 a 5.2), (Jimenez, 2003). Ya que el medio de reacción no tenía el pH optimo por tal la fosfatasa ácida no hidrolizó de manera adecuada al substrato Bglicerofosfato. Esto provoca que el fosfato no se haya liberado de manera adecuada y se precipite como fosfato de plomo, mediante la presencia de plomo en el medioreacción. En consecuencia, al exponerlo a la solución de sulfuro, la reacción fue ineficiente y no se apreció la coloración café del sulfuro de plomo en grandes cantidades como se esperaba. Conclusiones. 

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Los plastos de las células tienen diferentes coloraciones y funciones debido al ambiente en el que son expuestos, de ahí su clasificación en leucoplastos, cloroplastos y cromoplastos. Los lisosomas contienen distintas enzimas con funciones específicas cada una. Estos deben de estar en un medio de reacción adecuado para que realicen sus funciones y reacciones correspondientes, esto con el fin de hidrolizar moléculas que ayuden al metabolismo de la célula.

Bibliografía J, M. T. (2009). Bioquímica, las bases moleculares de la vida. México: McGraw Hill.

Jimenez. (2003). Biologia Celular Y Molecular. México: Pearson Educación. Rodríguez-Fuentes, N. (2012). Portal academico IEMS. Obtenido de Estructura y función de los plastos: http://academicos.iems.edu.mx/cired/docs/es/bl/fu ncion_de_los_plastos/observacion_e_identificacion_ de_plastos.pdf