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DISCUSIÓN INFORME N7: Las reacciones enzimáticas se llevan a cabo en un determinado medio, ya sea intra o extracelular, donde las condiciones pueden variar, y por lo tanto la velocidad de reacción puede verse modificada. Entre algunos factores que modifican la actividad enzimática se encuentran el efecto de la concentración de la enzima, Ph, tiempo de incubación y la temperatura. La concentración de la enzima es un factor importante para la reacción enzimática pues es proporcional a la velocidad, además se sabe que se obtiene la Vmáx cuando la enzima se encuentra en concentraciones saturantes respecto al sustrato. Sin embargo, la velocidad enzimática aumentará si hay un aumento en la concentración de la enzima siempre que haya sustrato. En el Ensayo N°1 se fue incrementando la concentración de la enzima sin embargo la cantidad de sustrato (glicerofosfato) era igual en cada una de las pruebas por lo que solo se pudo obtener una velocidad máxima. El ph óptimo o intervalo de ph es diferente para cada enzima, en el caso de la fosfatasa alcalina éste se encuentra entre 8-11 y el Ph obtenido a través de la gráfica es 8.6. Pues de acuerdo a Nelson y Cox una variación en éste produce una alteración en la conformación de la enzima, dándose un cambio en el estado de ionización de grupos del sitio activo y llegando a no ser funcional. Esto es debido a que la conformación de una proteína depende también, de las atracciones y repulsiones entre los aminoácidos cargados negativamente y los cargados positivamente. Además algunas cadenas laterales de aminoácidos pueden actuar como ácidos o bases débiles que desarrollan funciones críticas en el sitio activo del enzima. En el ensayo se observó que a niveles menores de su ph óptimo las velocidades de reacción enzimática se ve afectada disminuyendo su valor. En el ensayo de la influencia del tiempo de incubación en la velocidad enzimática, se observó que hay una velocidad máxima al no dejar incubar, pues se supondría que la enzima tiene la mayor cantidad de sustrato, mientras que al ir aumentando el tiempo de incubación (10 y 20 min) la velocidad disminuye notablemente. De acuerdo a Peña en Bioquímica , se señala que la velocidad se reduce pues la enzima al ser una proteína comience a desnaturalizarse al cabo de cierto tiempo, o que el producto de reacción tenga algún efecto inhibidor sobre la actividad de la enzima. En caso de la influencia de la temperatura en la velocidad de reacción se observó una disminución de esta a 37°C y 50°C, mientras que un aumento gradual de ésta se dio a 4°C y 20°C. Ante esto, Fornaguera y Gómez señalan que un aumento de la temperatura incrementa el movimiento de las cadenas de aminoácidos y de los grupos laterales que conforman la enzima, ocasionando así un incremento de la fuerza y la frecuencia de las colisiones entre las moléculas de enzima y las moléculas que los rodean. Sin embargo, a temperaturas muy elevadas, dichas colisiones pueden romper los puentes de hidrógeno y las fuerzas de van der Waals, dándose la pérdida de la estructura funcional de la enzima, y por ende una disminución de la velocidad de reacción.

CONCLUSIONES: La concentración de la enzima es proporcional a la velocidad, por lo tanto, habrá una mayor velocidad siempre y cuando haya sustrato, sin embargo El Ph afecta a la velocidad de reacción ya que a Ph menor que el óptimo la velocidad disminuye, por lo tanto se debe ocnsiderar que el Ph óptima de fosfatasa alcalina se encuentra entre 8 y 11. Un mayor tiempo de incubación puede reducir la velocidad de reacción, pues muchos productos formadas pueden actuar como inhibidores, o la enzima puede desnaturalizarse durante un intervalo de tiempo. Las enzimas tienen una temperatura óptima en la cual poseen mayor actividad catalítica, manifestándose esta en la velocidad, por lo tanto fuera de esta temperatura la enzima puede sufrir una perdida de su estructura funcional.

REF BIBLIOGRAFICAS: 1. Nelson D, Cox M. Lehninger Principios de Bioquímica. 6ta ed. Barcelona: Ed. Omega; 2013. 2. Fornaguera J, Gómez G. Bioquímica. Madrid: EUNED; 2005.Pág 65 3. Peña A, Arroyo A. Gómez A. Tapia R. Bioquímica. 2da ed. México: Editorial Limusa S.A; 2004.Pág 194-196 4. Mercado G, Duarte N, Álvarez E, De la Rosa L, Wall A. Fosfataasa alcalina (E.C.3.1.3.1): bioquímica y aplicaciones en las ciencias biomédicas, ecológicas y alimentarias. Tecnociencia. 2012:4(2): 112-122.