Práctica Nº 1

PRÁCTICA Nº 1 TEMA: “Generalidades” OBJETIVO: Conocer el funcionamiento del laboratorio, sus insumos e instalaciones así como las normas de bioseguridad.

equipos,

FUNDAMENTOS DE LA PRÁCTICA: Actualmente sabemos que los microorganismos patógenos se encuentran en todas partes y la relación que existe con la enfermedad, depende de la ruptura del crecimiento equilibrado de aquellos, por eso de la importancia del estudio de la Microbiología. Varios son los organismos microscópicos que se van a observar e identificar (bacterias, hongos, levaduras, virus, protozoos y algas microscópicas), para la consecución de este objetivo son necesarios varios equipos entre ellos: microscopio, incubadoras, esterilizador, cámara de flujo laminar, además pruebas de diagnóstico pruebas de ASTO, pruebas de PCR, pruebas de VDRL, pruebas de MICROELISA, etc.

En el laboratorio de microbiología disponemos implementos que son detallados a continuación:

  



además

de

varios

Frascos tapa rosca, que contienen los medios de cultivo en polvo para preparar Cajas petri estériles, tienen la capacidad para 15 ml de medio de cultivo aproximadamente, en el cual al ser sembrado crecen los microorganismos, se incuba en posición invertida. Asas de inoculación, compuestas de mango y filamento de platino o nicromo que terminan en aguja o aro calibrado para tomar volúmenes de 0,01 y 0,001 ml. Aplicadores de algodón estériles, que sirven para tomar la muestra. Mechero Bunsen, encargado de suministrar la fuente de calor durante las siembras, además de esterilizar las asas para transferir cultivos vivos de un recipiente a otro.



Placas portaobjetos y laminillas cubreobjetos, para llevar a cabo los frotis y su observación microscópica.

MEDIDAS DE PREVENCIÓN Y BIOSEGURIDAD En los procesos de diagnóstico microbiológico es necesario llevar una disciplina de seguridad, observando las normas que para el efecto se han determinado. La realización de procedimientos en el laboratorio expone al personal a riesgos de tipo físico, químico y biológico, en todo caso todas las muestras deben ser manejadas como material potencialmente infeccioso por lo que se deben seguir las siguientes medidas de prevención:

•

Precauciones Estándares o Universales: Lavado de manos; en el lugar de trabajo no ingerir alimentos, no maquillarse, no fumar, no beber, no manipular lentes de contacto, no ingresar prendas personales, no pipetear con la boca; informarse de la toxicidad, riesgo y antídoto de los reactivos. Tener siempre a la vista elementos de seguridad como lavaojos, ducha, extintor, salida de emergencia.

•

Uso de barreras o equipo de protección del personal: uso de guantes, protección ocular y mascarilla, protección corporal con mandil.

•

Medios de eliminación de material contaminado: Los desechos generados deben ser separados en tres tipos: Generales o comunes (funda negra), Corto punzantes (recipiente plástico grueso de boca ancha: jeringas, agujas, lancetas, tubos de vidrio rotos), e

Infecciosos (funda roja: torundas, gasas, pruebas usadas); luego se deben eliminar de acuerdo a las normas de bioseguridad vigentes. Derrame accidental de una muestra.- Si se produjo salpicaduras de muestras y reactivos deberá ser cubierto con papel u otro material absorbente al que se le agrega un desinfectante líquido y se comunica al responsable de laboratorio. Que es un (AES)? Accidente de exposición a sangre o fluido corporal: Se denomina a todo contacto con sangre o fluido corporal y que lleva una solución de continuidad (pinchazo o herida cortante) o un contacto con mucosas con la piel lesionada (eczema, excoriación, etc.) La asistencia de un accidente de exposición a sangre o fluido corporal permite definir: - La víctima o personal de salud accidentado. - El material causante del accidente. - El procedimiento determinante del mismo. - Sangre o fluido potencialmente contaminado. Conducta frente a un (AES).- Avisar inmediatamente al responsable del laboratorio, registrar la fecha, identificar el personal que participó y el material biológico involucrado DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO La evolución de la ciencia ha permitido utilizar de diferente manera a bacterias en beneficio del hombre, sin embrago muchos agentes que forman parte de la flora normal pueden causar infecciones y para ello tienen que superar las defensas externas del huésped y penetrar por vías respiratorias, tubo digestivo, vías genitourinarias o a través de la piel. No todos los microorganismos que penetran en el huésped causan infección y enfermedad, en algunos casos colonizan el huésped permaneciendo latentes hasta que las defensas del huésped disminuyan y puedan ejercer una acción patógena. El medico debe seleccionar con gran cuidado los métodos de laboratorio y buscar la corroboración de un diagnostico etiológico en el lapso mas breve, con el costo mas bajo posible y con el menor numero de molestias al paciente. El laboratorio de microbiología debe ser un aliado en el cometido diagnostico. El éxito del diagnóstico acertado de cualquier enfermedad, depende de la óptima obtención de la muestra, que permita el aislamiento del agente infeccioso causante, la supervivencia y proliferación del mismo. La identificación del microorganismo potencialmente patógeno debe considerarse en el contexto del lugar de obtención y de la flora normal de cada sitio en particular; los resultados deben correlacionarse con la información clínica, para dar una interpretación significativa. Métodos directos de diagnóstico: • Microscopía de Frotis fresco • Microscopía de Frotis con tinciones diferenciales • Cultivo • Identificación genética mediante biología molecular

Métodos indirectos de diagnóstico: • Pruebas que valoran la reacción Antígeno (bacteria, virus) - Anticuerpo: Ej. Técnicas simples: precipitación, aglutinación, fijación del complemento, etc. Técnicas con conjugados: Inmunofluorecencia (I-F) Radioinmunoensayo (R.I.A) Inmunoenzimoensayo (ELISA).

• Pruebas que valoran la inmunidad celular: Tuberculina, Histoplasmina, Lepromina, etc. • Efecto citopático de los microorganismos. Ej. Disminución de los CD4 por el VIH; Coilocitos por infección del Papiloma virus en cérvix. METODOS DE ESTERILIZACION:

Glutaraldehido

1. • • •

Métodos físicos. Esterilización por calor húmedo (autoclave). Esterilización por calor seco (estufas). Esterilización por radiación gamma. 2. Métodos químicos: • Esterilización por óxido de etileno (Eto). • Esterilización por ácido peracético. • Esterilización por plasma de peróxido de hidrógeno. • Esterilización por formaldehído y glutaraldehído.

TEMA DE CONSULTA: Otros métodos de esterilización. Efectividad del uso de las mascarillas en la prevención de la influenza AH1N1

BIBLIOGRAFÍA • Jawetz Ernest, Microbiología médica, 17ª edición en español, Manual moderno, México, México 2002.

• Bailey & Scott, Diagnóstico microbiológico,

11ª

edición,

Editorial

Panamericana, Buenos Aires – Argentina, 2 004.

• Salazar Wilson, Guías de práctica de Laboratorio de Microbiología, Depart. • • •

•

• •

de publicaciones de la Facultad de Ciencias Médicas, Quito – Ecuador, 2007. Lynch, Raphael, Mellor, ET. AL., Métodos de laboratorio, Segunda edición, Nueva editorial Interamericana, México - México, 1.972, 924, 925. Sanchez Carlos, Romero Fernando. Manual de Urianálisis. 1996. U. Central p: 11-12 http://books.google.com.ec/books? vid=ISBN8466513760&id=WB3lngLAYjAC&pg=RA1-PA192&lpg=RA1PA192&ots=TrAt71pbCc&dq=laboratorio+de+microbiologia+microbiologi a&sig=_jD5YfPjLSsdc46UXQD2JbcxGHk http://books.laboratorio+de+microbiologia+microbiologia&sig=uL9wA6g Mr2b6FN7B1gOXH4loZx Harrison T, Principios de medicina interna, 17ª edición en español, Mc Graw Hill interamericana editores, México D.F, 2009 Gracia F, guía para el manejo de la exposición ocupacional del VHI, VHB Y VHC y recomendaciones para profilaxis post-exposición, hallado en:, MSP PANAMA, Edición 2002