Microinforme10.docx

Universidad Nacional Autónoma de México. Facultad de Estudios Superiores Zaragoza.

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA CARRERA: QFB MICROBIOLOGÍA GENERAL I MULTIPLICACION BACTERIANA (REQUERIMIENTOS FISICIQUIMICOS).

GRUPO: 2652

ASESORA: QFB GEORGINA BERMEJO TORRES. EQUIPO: 9 ALUMNO: BECERRIL BONILLA JUAN SEMESTRE: 2019-2

MULTIPLICACION BACTERIANA (REQUERIMIENTOS FISICIQUIMICOS). Objetivos: Identificar las necesidades fisicoquímicas de los microorganismos observando cómo influyen estos en la multiplicación bacteriana. Diagramas de flujo:  Efecto de la temperatura

Inicio

Cepas: K. pneumoniae S.aureus E. coli C.equi

Dividir en cuatro ambas placas



partes

Dos placas de medio de agar nutritivo.  Material: Asa bacteriológica.

En ambas placas sembrar por estría simple, en su respectivo cuadrante cada cepa.

Placa 1.Encubar

Placa 2.Encubar

a 37ºC por 48 horas.

a 25ºC por 48 horas.

Leer las placas e identificar si hubo o no crecimiento bacteriano.

Efecto del pH.

Inicio

Cepas: pH 6  y pH 9 S.aureus  P. vulgaris S. typhi E. coli

Dividir en cuatro ambas placas.

partes

1 placa de medio agar nutritivo a pH 6. 1 placa de medio agar TCBS a pH 9. Materiales: Asa bacteriológica.

En ambas placas: sembrar por estría cerrada, en su respectivo cuadrante cada cepa.

Encubar ambas placas a 37ºC por 48 horas.

Leer las placas e identificar si hubo o no crecimiento bacteriano.

Requerimiento de oxigeno

Inicio

Cepas: E. coli P. aeruginosa  Clostridium spp

  

Dividir las dos placas en tres zonas.

1 placa de medio agar tioglicolato. 1 placa de medio agar tioglicolato en caja Petri de plástico. Materiales: Asa bacteriológica.

En ambas placas: sembrar por estría cerrada, en su respectivo cuadrante cada cepa.

Placa 1.Encubar a una atmosfera sin oxígeno en una caja de anaerobiosis por 48 horas.

Placa 2.Encubar en aerobiosis a 37ºC por 48 horas.

Leer las placas e identificar si hubo o no crecimiento bacteriano.

 Efecto de la presión osmótica

Inicio

Cepas: C. equi  S. aureus  E. coli K. pneumoniae

Dividir las dos placas en cuatro zonas.

1 placa de medio agar nutritivo con 7.5% más de sal. 1 placa de medio agar nutritivo normal. Materiales: Asa bacteriológica.

En ambas placas: sembrar por estría cerrada, en su respectivo cuadrante cada cepa.

Encubar ambas placas a 37ºC por 48 horas.

Leer las placas e identificar si hubo o no crecimiento bacteriano.

 Efecto de la humedad

Inicio

Cepas: S. aureus E. coli

Sembrar ambos tubos de agar nutritivo uno con S. aureus y otro con E. coli.

En dos tubos se pone agar nutritivo con 3% de agar como baja humedad. 2 tubos con agar nutritivo. Materiales: Asa bacteriológica.

Sembrar S. aureus y E. Coli en agar nutritivo con 3% de agar con baja humedad.

Incubar los 3 tubos a 37ºC por 48 horas.

Comparar el desarrollo en ambos tubos.

Resultados Efectos de la temperatura (cuadro 1)

Cepas Crecimiento bacterianas de utilizadas bacteriano a temperatura ambiente k. Hubo Pneumoniae crecimiento

Crecimiento bacteriano a temperatura de 37 grados Hubo crecimiento

S.aureus

Hubo crecimiento

Hubo crecimiento

E. coli

Hubo crecimiento

Hubo crecimiento

C.equi

Hubo crecimiento

Hubo crecimiento

Efectos del pH ( cuadro 2)

Crecimiento observado a temperatura ambiente de siembra de E. coli, K. pneumoniae , S. aureus, C. equi.

Crecimiento observado a 37 grados de siembra de E. coli, K. pneumoniae, S. aureusCequii.

Cepas Crecimiento Crecimiento bacterianas bacteriano bacteriano utilizadas a pH 6 a ph 9 agar tcbs E. coli hubo No hubo crecimiento crecimiento

P. vulgaris

Hubo crecimiento

Hubo crecimiento Coloración amarilla

S.aureus

hubo crecimiento

hubo crecimiento coloración amarilla

S. thypi

Crecimiento observado en el laboratorio a pH 6 después de incubar de E. coli y P. vulgaris

Crecimiento observado en laboratorio a pH 6 después de incubar de S. aureus. y S. typhi

Crecimiento observado en el laboratorio a pH 9 en agar tcbs después de incubar de E. coli y P. vulgaris

Crecimiento observado en el laboratorio a pH 9 en agar tcbs después de incubar de S. aureus y S. typhy

Crecimiento No hubo moderado crecimiento

Requerimiento de oxigeno ( cuadro 3) Cepas utilizadas

Crecimiento bacteriano en agar triglicolato medio aerobio

Crecimiento bacteriano en agar triglicolato medio anaerobio

E. coli

Hubo crecimiento

Hubo crecimiento

P. aeruginosa

Hubo crecimiento

No hubo crecimiento

Clostridium spp

No hubo crecimiento

Hubo crecimiento

Efecto de la presión osmótica ( cuadro 4)

Crecimiento observado en laboratorio en agar triglicolato medio aerobio de E. coli, P. aeruginosa, clostridium spp

Crecimiento observado en laboratorio en agar triglicolato medio aanaerobio de E. coli, P. aeruginosa, clostridium spp

Cepas utilizadas

Crecimient o observado en agar nutritivo Hubo crecimiento

Crecimiento observado en agar nutritivo con 7.5 % de sal No hubo crecimiento

K. pneumoniae

Hubo crecimiento

No hubo crecimiento

S. aureus

Hubo crecimiento

Hubo crecimiento

E. coli

No hubo Crecimiento crecimiento moderado

C. equi

Crecimiento observado en agar nutritivo en sembrado en cuadrantes de C. equi, K. pneumoniae, S. aureus, E. coli.

Crecimiento observado en agar nutritivo en sembrado con 7.5 % de sal en cuadrantes de C. equi, K. pneumoniae, S. aureus, E. coli.

Efecto de la humedad ( cuadro 5) Cepas bacterianas utilizadas

Crecimiento Crecimiento bacteriano observado en observado en agar nutritivo en agar nutritivo en agar nutritivo 3 % tubo

S. Aureus

Hubo crecimiento Hubo crecimiento

E. Coli

Hubo crecimiento Hubo crecimiento

Crecimiento bacteriano observado en agar nutritivo en tubo de S. aureus

Crecimiento bacteriano observado en agar nutritivo en tubo de E. coli

Crecimiento observado en agar nutritivo en agar nutritivo al 5 % de S. aureus

Crecimiento observado en agar nutritivo en agar nutritivo al 5 % de E. coli

Análisis de resultados Las bacterias para que se multipliquen a demás de los nutrientes necesitan factores fisicoquímicos óptimos, tales como: temperatura, pH, tensión de oxígeno, presión osmótica y humedad. Es por ello que en la presente practica se realizaron siembras de diferentes cepas, sometidas a variaciones de los factores fisicoquímicos ya mencionados anteriormente, con la finalidad de identificar las necesidades fisicoquímicas de los microorganismos. Efecto de la temperatura. La prueba de efecto de la temperatura se realizo solo para Dichas cepas k. pneumoniae, S.aureus, E. coli, C.equi sembradas por igual en dos placas de agar nutritivo una placa se incubo a 37ºC y la otra se incubo a 25ºC, todas las cepas incubadas crecieron en ambas temperaturas, los datos se encuentran descritos en el cuadro 1. Se reporto como "hubo crecimiento" con base en la observación de multiplicación bacteriana (crecimiento), y sí por el contrario esta no presento dicha característica se reporto como no hubo crecimiento. Como se describe en el cuadro 1 la cepa de K. pneumoniae presento multiplicación en ambas temperaturas de incubación. El resultado se atribuye a que esta bacteria puede crecer a una velocidad considerable en un rango de temperatura que se halla entre los 25º y 45ºC, siendo 37ºC la temperatura óptima de crecimiento y multiplicación. Esto no hace referencia a que la bacteria solo se multiplique a esa temperatura, si no que a 37ºC se multiplica mejor y con mayor velocidad. En el caso de E. coli y como se indica en el cuadro 1 presento multiplicación en ambas temperaturas. Los resultados obtenidos se deben a que dicha bacteria tiene la capacidad de multiplicarse preferentemente a 37 ºC, pero esto no indica que solo a esa temperatura pueda multiplicarse, si no que es la temperatura optima para su crecimiento. A si de esta manera se atribuye que creció a temperatura ambiente porque 25ºC está dentro de sus rangos de aceptación. En el caso de c. equi como se indica en el cuadro 1 presento multiplicacion en ambas temperaturas. Los resultados obtenidos se deben a que dicha bacteria tiene la capacidad de multiplicarse preferentemente a 37 ºC, pero esto no indica que solo a esa temperatura pueda multiplicarse, si no que es la temperatura optima para su crecimiento, aun que el rango de esta bacteria puede variar de 10°C a 45 °C que esta dentro del rango del crecimiento para crecimiento a 25 °C. Para S. aureus (con temperatura óptima de crecimiento de 35 a 40 °C.) Presentaron multiplicación bacteriana en ambas temperaturas como se indica en el cuadro 1 tanto a temperatura de 37 °C, tanto a 25 °C, esta bacteria también puede crecer a 25 grados ya que su rango de crecimiento va de 6.5 °C a 65 °C.

fecto del pH. Se realizo la prueba de multiplicación bacteriana en relación al efecto del pH con E. coli , P. vulgaris, S. typhi y S. aureus. Se llevo a cabo en dos placas; en agar nutritivo pH6 y en agar nutritivo pH 9 en medio tcbs La determinación del efecto de pH, como se indica en el cuadro 2,, cada una de las bacteria , P. vulgaris, S. aureus se multiplicaron en ambos pH (tanto pH6 como pH9). El resultado se debe a que el pH utilizado en cada placa para dicha práctica, se encuentran dentro del rango establecido para la clasificación de bacterias neutrófilas, es decir, se presento crecimiento en ambas placas con pH diferente pero no porque estas bacterias sean acidófilas o alcolófilas necesariamente, si no que están dentro del rango de pH para que estas se multipliquen, aunque su pH óptimo sea de 7. Las bacterias que unicamente crecieron a pH 6 en agar nutritivo fueron .E.coli y S. typhi y no crecieron en ph 9, el E. coli ya que puede crecer a ese ph 9 como maximo pero puede ser que la bacteria no tolero el medio o un mal sembrado del mismo. Para S. typhi tambien fue mal sembrada por que es una bacteria que puede tolerar hasta pH 9.5, pudo haber sido causado por error humano en sembrado. Se utilizo agar tcbs que es agar o agar tiosulfato citrato bilis sacarosa este agar se utilizo por que tiene indicadores como azul de bromotimol y azul de timol que al producir productos ácidos vira a amarillo y azul ver brillante indica que hay presente alcalinidad, en nuestro caso P. vulgaris y S. aureus son fermentadores de sacarosa y producieron esa coloración amarilla en el medio tcbs. Requerimiento de oxígeno. La prueba de tensión de oxigeno, se realizo con la finalidad de identificar en E. coli, P. aeruginosa, Clostridium spp la capacidad que tienen de tolerar la presencia o ausencia de oxigeno, según sea el caso y como es que repercute respecto a su multiplicación bacteriana. Como se indica en cuadro 3 se presento multiplicación bacteriana en ambas placas (condición aerobia y condición anaerobia) de E. coli ya que es una bacteria facultativa ya que puede crecer en medio aerobio como anaerobio, resultado, lo que les permite multiplicarse tanto en presencia de oxigeno como en tolerar condiciones bajas del mismo, lo qud hace que el agar trioglicolato se vea crecimiento de la bacteria . Respecto a P. auroginosa es un aerobio estricto que solamente ciertas ocasiones puede ocupar en el nitrato como podemos observar en el cuadro 3 solo hubo crecimiento en el agar trioglicolato en medio aerobio en medio anaerobio no hubo crecimiento. En la siembra de clostridium spp hubo solamente crecimiento en la placa de crecimiento anaerobio y no en la de aerobio, eso concluye que el clostridium spp es

anaerobio unicamente que si coincide por que es una bacteria que solamente puede crecer en medio anaerobio.  Efecto de la presión osmótica. Para llevar a cabo esta prueba se utilizo se empleo C. equi, S. aureus, E. coli, K. pneumoniae se pusieron e una placa de agar nutritivo y otra placa de este mismo pero con 7.5% de sal, esto con la finalidad de observar si las bacterias son capaces de tolerar ambientes con elevada concentración de sales o solutos en general sin que este le afecta a su crecimiento bacteriano. Como se obserba en el cuadro 4 ambas placas las bacterias sì presentaron multiplicacion bacteriana tanto en el agar nutritivo y el agar sal 7.5 % para ra las bacterias E. coli, y S. aureus aun que en menor cantidad en la placa de agar sal 7.5 % con un poco de crecimiento moderado, puede atribuirse a que en estas bacterias sus membranas plasmaticas tienen cierta tolerancia a concentraciones elevada de sal. El crecimiento de K. pneumoniae y C. Equi en la placa de agar nutritivo si se llevo acabo pero en el agar nutritivo 7.5 % sal no crecieron esto puede ser debidio a que K. pneumoniae solo tolera una atmosfera de presion y tiene poca tolerancia a altas concentración de sal al igual que C. equi.  Efecto de la humedad. Los microorganismos no tienen la capacidad de retención de agua, como los organismos superiores, es por ello que su metabolismo y desarrollo depende de un medio en el que exista agua. Así de esta forma proporcionándoles un medio con humedad optima estos tendrán una mejor multiplicación y crecimiento bacteriano. Con la finalidad de observar cómo es que influye el factor de humedad en el crecimiento bacteriano, se utilizaron dos cepas: S. aureus y E. coli. que se sembraron cada una en un tubo con medio agar nutritivo y en tubos con agar nutritivo con 1.5 % con baja humedad se sembro E. coli y S.. aureus en dicho medios. Como se indica en el cuadro numero 5 las cepas S. aureus y E. coli crecieron y se multiplicaron perfectamente en medio agar nutritivo, debido a que poseen los nutrientes y la humedad optima para su multiplicación, pero tambien en los tubos de agar 1.5% Posiblemente por que todavía contaban con la humedad adecuada que les permitia como tal reproducirse. Conclusiones Los principales requerimientos de los microorganismos para su multiplicación bacteriana óptima, se divide en dos principales: los requerimientos químicos y los requerimientos físicos. Dentro de los requerimientos químicos el más importante es la tensión de oxigeno, debido a que no todas las bacterias necesitan oxígeno para multiplicarse (aerobias),

existen algunas que pueden multiplicarse en condiciones bajas de oxigeno o simplemente necesitan una atmosfera libre de el mismo para su optima multiplicación. El factor de pH es importante pero que la mayoria de las bacterias que determinamos tienen un amplio rango crecimiento tanto en medios básicos como ácidos. Que también las bacterias que determinamos son mesofilas con temperaturas de crecimiento dentro del rango de 30 a 45 grados centígrados. Se determina que dependiendo de cada bacteria va requerir ciertas condiciones para que pueda sobrevivir.

Referencias Madigan, T. M., Martinko, M. J., Dunlap, V. P. & Clark Brock. Biología de los microorganismos. (2009). España: Pearson Educación, S. A. Prescott, L. M., Harley, J. P. y Klein. Microbiología. (1999). España: Mc GrawHillInteramericana. Tortora, J.G., Funke, R.B. y Case. Introducción a la microbiología. (2007). San Francisco: Pearson Education Inc.