Microbiologia Industrial.docx

Metodología Preparación Solución con Levadura Con un asa redonda se procedió a tomar una muestra de levadura presente en un medio de cultivo (PDA), el cual se suspendió en tubo de 5 mL con agua destilada y se agito para conseguir una solución homogénea, después coge una alícuota de 100 µL de la solución y es transferido a un tubo eppendorf el cual contiene 900 µL de agua destilada + 10 µl de Azul de metileno, se homogeniza y se toma la muestra la cual va a ser leída en cámara de Neubauer

Preparación Solución con esporas de Aspergillus sp Se extrajo una alícuota de 100 µL de una solución de 5 mL la cual contenía esporas de Aspergillus sp y es transferido a un tubo eppendorf el cual contiene 900 µL de agua destilada + 10 µl de Azul de metileno, se homogeniza y se toma la muestra la cual va a ser leída en cámara de Neubauer

Resultados

Imagen 1: Conteo celular de levaduras saccharomyces cerevisiae en cámara de Nuebauer Factor de dilución 10:100 = 10 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠 𝑥 50000 𝑥 𝐹𝐷 𝑚𝐿

𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 = 33 𝑥 50000 𝑥 10 𝑚𝐿 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 = 1,65 𝑥 107 𝑚𝐿

𝑉𝑖𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 % =

𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 − 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑚𝑢𝑒𝑟𝑡𝑎𝑠 𝑥 100 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠

𝑉𝑖𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 % =

33 − 0 𝑥 100 33

𝑉𝑖𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 % = 100 %

Concentración Inicial de la solución celular 𝐶1𝑉1 = 𝐶2𝑉2 𝐶1 =

1,65 𝑥 107 𝑥 1000µ𝐿 100µ𝐿

𝐶1 = 1,65 𝑥 108

Imagen 2: Conteo de esporas Aspergillus sp. En cámara de Neubauer Factor de dilución: 10:100 = 10 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠 𝑥 50000 𝑥 𝐹𝐷 𝑚𝐿

𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 = 32 𝑥 50000 𝑥 10 𝑚𝐿 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 = 1,6 𝑥 107 𝑚𝐿

𝑉𝑖𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 % =

𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 − 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑚𝑢𝑒𝑟𝑡𝑎𝑠 𝑥 100 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠

𝑉𝑖𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 % =

32 − 0 𝑥 100 32

𝑉𝑖𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 % = 100 %

Concentración Inicial de la solución celular 𝐶1𝑉1 = 𝐶2𝑉2 𝐶1 =

1,6 𝑥 107 𝑥 1000µ𝐿 100µ𝐿

𝐶1 = 1,6 𝑥 108

Discusión En la práctica presente se determinó la densidad celular y la viabilidad celular de una muestra de levadura Saccharomyces sp y una muestra de esporas de Aspergillus sp. las cuales se encontraban suspendidas en una solución, para ello se usó la técnica de conteo en cámara de Neubauer el cual consisten en un bloque de cristal del tamaño de un porta objetos que contiene 25 cuadrados en su zona central divididos a su vez en 16 cuadrados cuaternarios, de los cuales se contaran de los 25 cuadrados solo 5 los 4 de las esquinas y el del centro, para la determinación de la viabilidad celular se realizó una tinción simple con azul de metileno a cada solución celular con el fin de que el colorante penetre la pared de las células muertes tiñéndolas completamente de tal manera que las células vivas se observan sin teñir1, en la imagen 1 se observa el número de levaduras presentes en la muestra colocada en la cámara de Neubauer el cual se contó de la dilución un total de 33 células lo cual al aplicar la formula de células totales nos da 1,65 x 107 células/ mL presentes en la solución contenida en el tubo eppendorf y con un total de células viables de 100 % , ya a que al momento de realizar el conteo no se vio ninguna levadura teñida de color azul, debido a que el medio de cultivo en el cual estaba contenido la levadura era reciente y no tenia muchos días, por lo cual se puede decir que todas las células totales presentes en la solución se encuentran vivas, con el resultado de celulas totales presentes en esta solución se puede calcular por medio de una formula de concentraciones el totales de celulas presentes en la solución madre la cual se obtuvo como

resultado 1,65 x 108 Células/mL; en la imagen 2 se observa la cantidad de esporas presentes en la muestra colocada en la cámara de Neubauer el cual se obtuvo un conteo de 32 esporas, al aplicar la formula para determinar la cantidad de células totales en la solución se obtuvo un resultado de 1,6 x 107 células / mL con una viabilidad de 100 %, se realizo el calculo respectivo para determinar la concentración inicial de la solución madre a partir del resultado de la dilución y se obtuvo un total de 1,6 x 108 esporas presentes en la solución madre preparada en el laboratorio; tanto la cámara de Neubauer como la escala de Mc Farland sirven para determinar la densidad celular presente en una solución, por métodos distintos, uno por medio de espectrofotometría la cual las células presentes absorben la luz generada por el equipo la cual nos da una absorbancia especifica la cual será sustituida en nuestra ecuación de la recta obtenida en nuestra curva de calibración de nuestros patrones obtenidos anteriormente para determinar la concentración de nuestra solución en la cual estarán presentes tanto las células vivas como las células muertas, mientras que con la cámara de Neubauer se puede llegar a calcular una viabilidad celular y la densidad celular sin necesidad de realizar una curva de calibración previamente, sin embargo la escala de Mc Farland es muy utilizado para la preparación de suspensiones de bacterias debido a su pequeño tamaño lo cual hace difícil poder contarlas en una cámara de Neubauer.

Bibliografía: [1] Camara de recuento Laboratorio clínico. BRAND [En Línea] www.brand.de/fileadmin/user/pdf/GK900/Zaehlkammern/GK900_05_Clinical_Lab_Zaehlkammer n_s.pdf