Micro Aplic 9

Universidad de Puerto Rico en Humacao Facultad de Ciencias Naturales Departamento de Biología

INFORME DE LABORATORIO # 9

Sharon M. Boschetti-Medina 801-01-0907 BIOL 4316 Sec.002 Prof. Wanda L. Rodríguez Toro

26/03/07 Titulo: Aislamiento y Detección de Patógenos Alimentarios Objetivos: ♦ Familiarizarse con el protocolo tradicional para aislar y detectar patógenos en alimentos. ♦ Analizar muestras de alimentos procesados y no procesados para detectar la presencia de patógenos tales como enterobacterias, entre otros mediante metodología tradicional. ♦ Determinar el efecto que tiene el uso de metodos de conservación sobre el crecimiento de patógenos en alimentos. Observaciones: Producto: ♦ Muslo de pollo cocido ♦ Muslo de pollo crudo

Diluciones:

Medios de Cultivo Medio Baird-Parker

Hektoen Enteric

Listeria Selective Agar Base (Oxford)

MacConkey Agar

Mannitol Salt Agar

Descripción Para el aislamiento y enumeración de staphylococcus aureus en alimentos. Este medio contiene cloruro de litio y telurito para inhibir el crecimiento de la flora microbiana que le acompaña, mientras que el piruvato y la glicina estimulan selectivamente el crecimiento de staphylococcus. Para deteccion e aislamiento de bacterias patogenas intestinales incluyendo Salmonella y Shiguella en varios materiales, como heces, alimentos entre otros. Contiene dos indicadores: bromothymol blue y acidic fushin. Para bacterias lactosa-positiva y lactosa negativa respectivamente. Agar selectivo para la deteccion y aislamiento de Listeria monocytogenes. Cloruro de Litio, acriflavina, sulfato de colistina, cefotetan, ciclohexamida y fosmomicina son los ingredientes que inhiben el crecimiento de bacterias comunes. Listeria monocytogenes hidrolisa esculina y forma un complejo negro con iones de hierro III, produciendo así colonias marronverdes con un aureola (aro) negra. Agar selectivo para el aislamiento de salmonella, shiguella y bacterias coliformes de heces, orina, y alimentos. Las sales de bilis y el cristal violeta inhiben el crecimeinto de la flora microbial gram positiva. La lactosa y el indicador de ph neutral rojo se usan para detectar degradación de lactosa. Colonias lactosa negativa son incoloras; colonias lactosa-positivas son rojas y rodeadas de una zona turbida que se da gracias a la precipitación de las sales de bilis por la baja en el pH. Agar que s eutiliza para detectar

Sabouraud

Selenite Cystine Broth

staphylococci patogenicos en el alimento. Solo microorganismos tolerantes a altas concentraciones de sal, incluyendo staphylococci, pueden crecer en este medio. La degradación del mannitol a acido se relaciona con la patogenicidad de staphylococcus aureus y por lo tanto sirve como indicador para esta especie. Medio utilizado para la detección y enumeración de hongos y levaduras. La alta proporción en glucosa va a inhibir el crecimiento de las bacterias facilitando el crecimiento de hongos. En este sentido tras la siembra por agotamiento o estría de las placas Petri o tubos se incuban preferentemente a 28ºC en estufa de cultivo durante 24-48 horas. Tras este tiempo y dependiendo del tipo de microorganismo se observará el crecimiento de colonias que será muy diferente según el tipo de levadura, aunque éstas suelen presentar un aspecto cremoso brillante o mucoso, y el tipo de hongos que suelen dar colonias que fácilmente pueden cubrir toda la placa o el tubo y presentan un aspecto más o menos algodonoso (por la presencia de sus micelios). Caldo que se utiliza para el enriquecimiento de salmonella en alimentos, heces entre otros. La selenita inhibe el creciemiento de bacterias coliformes y enterococci en las primeras 6-12 horas de encubación, su efecto inhibidor va declinando gradualmente. Salmonella, Proteus y Pseudomonas son ihnibidos ligeramente.

XLD Agar

Medio usado para el aislamiento y diferenciacion de patogenos enterobacteriaceae, especialmente las especies shiguella y salmonella. La degradacion de xylose, lactosa y sucrosa a acido causa que el rojo fenol cambie de rojo a amarillo. Bacterias que contengan lisina decarboxilasa y cadaverina son reconocidas por una coloración violeta alredeor de las colonias dado por un aumento de pH. Estas reacciones ocurren de manera simultanea o sucesiva lo cual puede ocasionar que el indicador de pH exhiba varias sombras de color o que de amarillo cambie a rojo nuevamente en incubacion prolongada. Este medio de cultivo en poco selectivo.

Resultados: (28/03/07) Contaje de Placas Pollo Cocido Medio MacConkey XLD Hektoen Enteric Baird Parker Mannitol Salt Oxford Sabouraud Pollo Crudo Medio MacConkey XLD Hektoen Enteric Baird Parker Mannitol Salt Oxford Sabouraud

10-1 77/77 59/3 8/2 113/113 106/89 162/7 TNTC 10-1 80/2 130/127 100/88 29/29 63/59 86/21 167

10-2 45/45 9/0 1 12/12 39/29 30/0 15 10-2 15/2 37/37 33/26 7/7 7/0 28/3 123

10-3 0 0 0 2/2 3/2 10/0 2 10-3 0 0 0 0 3/0 0 145

Descripción Pollo Cocido Medio 10-1 10-2 MacConkey Hubo cambio de color Crecimiento en la placa, mucho moderado. Colorias crecimiento, areas rojas y turbidas rosadas, amarillas y indicativas de rojas indicativas de crecimiento de posible presencia de patogenos. Salmonella, Salmonella y Enterobacter y E.coli. Enterobacter . XLD Cambio de color rojo a Cambio moderado en amarillo y zonas el color; hay areas anaranjadas. Indicativo anaranjadas de posible presencia de amarillas y rojas. Enterobacter, Posible presencia de Klebsiella, Salmonella Salmonella y entre otros. enterobacter. Hektoen Cambio de color en el Crecimiento Enteric medio (de marron a moderado. Cambio rojo) indica prescencia de color en el medio, de patogenos como pero no como el coliformes, shiguella y primero, es mas sutil. providencia. Prescencia de patogenos Baird Parker Poco cambio en el color Poco crecimiento y del medio. Presencia poco cambio en el de microorganismos, color del medio. posibles patógenos. Prescencia de Staphylococcus aureus. Staphylococcus aureus.

Mannitol Salt

Cambio en el color de medio a amarillo con zonas rojas. Posible prescencia de Staphylococcus aureus.

Placa completamente roja; crecimiento de posibles patógenos ; E.coli está presente.

10-3 No hubo crecimiento.

No hubo crecimiento.

No hubo crecimiento.

Poco crecimiento y poco cambio en el color del medio. Prescencia de Staphylococcus aureus.

Pequeña porción de la placa en rojo. Poco crecimiento.

Oxford

Sabouraud

Selenite Cysteine Broth

Cambio de color transparente a amarillento y opaco. Mucho creciemiento . Presencia notable de Listeria monocytogenes.Colina s negras-marron. Mucho crecimiento de hongo y levaduras, colonias color crema y amarillenta

XLD Hektoen Enteric

Mannitol Salt Oxford

No hubo crecimiento.

Crecimiento No hubo moderado de hongos crecimiento. y levaduras; colonias color crema y amarillenta Cambió de color, esto es indicativo de presencia de salmonella.

Pollo Crudo Medio MacConkey

Baird Parker

Poco crecimiento;Presenci a de Listeria monocytogenes

10-1 Cambió de color, algunas son rosas. Muchas colonias. Cambió de color por áreas; rojoamarillo (4) Cambio minimo, colonias de color verde y amarillas. Cambio de color. Colonias negras numerosas. La mayoría de la placa estaba amarilla. Presencia de patogenos; dos colonias de Listeria.

10-2 Igual que la placa anterior solo que el crecimiento es menor. Cambio minimo; rojo-rosa.

10-3 No hay señales de crecimiento.

Cambio minimo, colonias de color verde y amarillas. Cambió de color. Colonias negras pequeñas numerosas. Cambio de color, areas rosas y otras amarillas. Varias colonias, algunas son blancas.

No hay señales de crecimiento.

No hay señales de crecimiento.

No hay señales de crecimiento. Media porción de la placa estaba de color amarillo. Varias colonias, algunas son blancas.

Sabouraud

Selenite Cysteine Broth

Mucho Crecimiento No hay señales de crecimiento de moderado de crecimiento. hongo y hongos y levaduras, levaduras; colonias color colonias color crema y crema y amarillenta amarillenta Cambió de color, esto es indicativo de presencia de salmonella.

Ilustración de las placas (Pollo Cocido Solamente)

Sabouraud

XLD

Oxford

Mannitol Salt Agar

Hektoen Enteric

Baird Parker

MacConkey

Selenite Cystein Broth

Conclusión: Ningún alimento debe albergar organismos o sustancias que sean perjudiciales a la salud del consumidor. Las enfermdades alimentarias tienen varias causas, pero la de mayor interés es la de índole mmicrobiológico. En este experimento se tomaron muestras de pollo tanto crudo como cocido con el propósito de realizar un análisis adecuado para la detección de patógenos. El método utilizado para este experimento fue el método tradicional de medios selectivos, diferenciales y enriquecidos para determinar si podría haber un patógeno en la muestra y de ser así, intentar identificar que tipo de patógenos era. Los resultados entre los dos grupos fueron variados, pero en todos se logró identificar patógenos. Especialmente en las placas de Oxford, XLD, MacConkey, Mannitol Salt Agar entre otros. A pesar de ello estos medios permitieron el crecimeinto de bactertias no patógenicas también. Entre las bacterias las mas comunes fueron listeria monocytogenes, E.coli, salmonella, y staphylococcus aureus; todas causantes de enfermedades alimentarias quie rayan de entre las mas simples(vomitos, diarreas) hasta las mas graves(hospitalización...). Los microbios pueden introducirse en cualquier punto de la cadena alimentaria, desde su producción hasta la cocina del consumidor. Es importante tener en cuenta como el manejo de los alimentos es llevado a cabo. De acuerdo a las precauciones que se tomen a la hora de manejar el alimento, este puede verse contaminado con facilidad o ser estéril. Al final la importancia raya en el bienestar y salud del consumidor .

CFU: