Metodologia 1.docx

Preparación de concentración bacteriana 105 - 104 Materiales:     

Balón aforado de 50 ml (6 und) Pipeta aforada de 5 ml Probeta de 50 ml Asa redonda Jeringa estéril de 60 ml

Se agregan 20 ml de caldo según el microorganismo, posteriormente con un asa se frota la caja hasta desprender la bacteria, luego se extrae el liquido y se transfiere a un balón aforado de 50 ml y se enrasa, después este se lleva a la escala 0,5 de Mc Farland para obtener una concentración de 108 de la cual se partirá de ahí para realizar las diluciones seriadas hasta obtener una concentración de 105 - 104 1. Concentración 107: se toman 5 ml de la concentración 108 y se transfieren a un balón aforado de 50 ml el cual contiene 45 ml del caldo según el microorganismo utilizado 2. Concentración 106 : se toman 5 ml de la concentración 107 y se transfieren a un balón aforado de 50 ml el cual contiene 45 ml del caldo según el microorganismo utilizado 3. Concentración 105 : se toman 5 ml de la concentración 106 y se transfieren a un balón aforado de 50 ml el cual contiene 45 ml del caldo según el microorganismo utilizado 4. Concentración 104 : se toman 5 ml de la concentración 105 y se transfieren a un balón aforado de 50 ml el cual contiene 45 ml del caldo según el microorganismo utilizado 5. Concentración 103 : se toman 5 ml de la concentración 104 y se transfieren a un balón aforado de 50 ml el cual contiene 45 ml del caldo según el microorganismo utilizado.

Preparación de concentración enzimática 1 con extracto 1 0 mg/ml , 175 mg/ml , 350 mg/ml , 700 mg/ml Materiales:          

42 tubos eppendorf 1 micropipeta de 100-1000 µl Balón aforado de 50 ml Espátula Probeta Caldo MRS Caldo BHI Penicilina Amoxicilina Beaker de 250 ml

Para la preparación delas diferentes concentraciones enzimáticas se prepara una solución madre con la mayor concentración requerida ( 700 mg/ml) para posteriormente realizar las diferentes diluciones. 1. Preparación de la solución madre: se toman 35 gramos los cuales van a ser diluidos en un balón aforado de 50 ml hasta completar su volumen final. 2. Concentración (700 mg/ml): se toman 5 ml de la solución madre y se transfieren a un tubo eppendorf 3. Concentración (350 mg/ml): se toman 2.5 ml de la solución madre y se transfiere a un tubo eppendorf el cual contiene 2.5 ml del caldo según lo requiera (BHI – MRS) 4. Concentración (175 mg/ml): se toman 1.25 ml de la solución madre y se transfiere a un tubo eppendorf el cual contiene 3.75 ml del caldo según lo requiera ( BHI – MRS) 5. Concentración ( 0mg / ml): se agregan 5 ml del caldo según lo requiera ( BHI – MRS) CONTROL NEGATIVO 6. Control positivo para Streptococcus Mutans según la literatura la concentración mínima inhibitoria del microorganismos con la penicilina es de 0,5 - 10 µg/ml [1] [2] y para la amoxicilina 0.5-0.12 µg/ml [1] 7. Control positivo para Lactobacillus Casei según la literatura la concentración mínima inhibitoria del microorganismos con la penicilina es de 10 µg/ml y para la amoxicilina 10 µg/ml [3] Repetir este procedimiento para cada microorganismos y extracto (S.mutans y L.casei) con su respectivo caldo de cultivo por duplicado. Para cada serie de concentración se agregan 0,5 ml del microorganismo a evaluar.

Referencia: [1] Identificación y caracterización microbiológica, fenotípica y genotípica del Streptococcus mutans: experiencias de investigación [2] RECUENTO E IDENTIFICACIÓN DE Streptococcus mutans DE SALIVA EN NIÑOS CON CARIES DENTAL: SEGUIMIENTO A 3 Y 6 MESES DESPUÉS DE UN PROCESO EDUCATIVO [3]