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ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO FACULTAD CIENCIAS ESCUELA DE CIENCIAS QUIMICAS CARRERA DE QUIMICA GUIA DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA

LUGAR DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: LABORATORIO DE BIOQUIMICA Y BROMATOLOGIA PRÁCTICA No.1 FERMENTACION DE LA GLUCOSA POR LEVADURAS (sacharomyces cereviceae)

DOCENTE: BQF. ESTELA MENDEZ LEMA MSc.

1. DATOS GENERALES: NOMBRE: (estudiante(s)

CODIGO(S): (de estudiante(s)

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GRUPO No.: …………. FECHA DE REALIZACIÓN: aa/mm/dd

FECHA DE ENTREGA: aa/mm/dd

TEMA. FERMENTACION DE GLUCOSA POR LEVADURAS

OBJETIVOS. OBJETIVO GENERAL. Observar la fermentación de Glucosa por levaduras. OBJETIVOS ESPECÍFICOS. Al menos dos objetivos INTRODUCCIÓN. La glucolisis consiste en una secuencia de 10 reacciones enzimáticas que catalizan la transformación de una molécula de glucosa a dos de piruvato, con la producción de dos moles de ATP y dos de ADH por mol de glucosa. Se trata de la ruta metabólica mejor conocida, que desempeña un papel clave en el metabolismo energético al proporcionar una parte importante de la energía utilizada por la mayoría de los organismos. Sirve en su función principal para preparar la glucosa y otros carbohidratos para su posterior degradación oxidativa.

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS. MATERIALES: • Un vaso de precipitación. • Gradillas para tubos de ensayo • 4 tubos de ensayo • Pipetas de 10 mL • Pipetas de succión. • Micropipeta de 1 mL • Dos espátulas • Incubadora o termostato a 37ºC.

REACTIVOS: • Solución de Glucosa al 1% • Reactivo de Fehling • Levaduras de panadero seca activa EQUIPOS: PROCEDIMIENTO. 1. En un vaso de precipitación de 25 ml. Pipetear 10 ml de la solución de glucosa y añadir 0,3 g (la punta de la espátula) de levadura. Mezcle perfectamente hasta que la mezcla sea homogénea. Incubar a 37 ºC. Realizar una prueba de benedict a esa mezcla a los 30 min. A la hora y media de incubación. 2. Para verificar que la solución de glucosa es un azúcar reductor, realizar una prueba de Fehling a la solución de glucosa.

3. Para verificar que la levadura no contiene la presencia de ningún azúcar reductor realizar un blanco de la siguiente manera: mezclar 0,3 g (la punta de una espátula) de levadura con 10 ml de agua destilada. Efectué una prueba de Fehling tomando 0,5 mL de esta solución de levadura. INTERPRETACION 1. Muestra no fermentada: reacción de Fehling positiva (rojo ladrillo) 2. Muestra fermentada: reacción de Fehling negativa (azul)

GRÁFICOS.

RESULTADOS. Los obtenidos en la practica BIBLIOGRAFIA Citar la fuente bibliográfica general, específica que sustentan la práctica con bibliografía existente en bibliotecas y debidamente actualizada. Según normas APA (mínimo 3 bibliografías)

CUESTIONARIO. 1. Que es la glucolisis? 2. Cuales son los productos finales de la glucolisis en presencia o ausencia de oxigeno? 3. Cual es el princio de la reacción de Fehling? 4. Cuantos ATPs son sintetizados en la glucolisis? 5. En donde se lleva a cabo la glucolisis? 6. Que es la fermentación?

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LUGAR DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: LABORATORIO DE BIOQUIMICA Y BROMATOLOGIA PRÁCTICA No.2

TEMA: DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD SUCCINATO DESHIDROGENASA

DOCENTE: BQF. ESTELA MENDEZ LEMA MSc.

1. DATOS GENERALES: NOMBRE: (estudiante(s)

CODIGO(S): (de estudiante(s)

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GRUPO No.: …………. FECHA DE REALIZACIÓN: aa/mm/dd

FECHA DE ENTREGA: aa/mm/dd

TEMA. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD SUCCINATO DESHIDROGENASA

OBJETIVOS. OBJETIVO GENERAL. Comprobar el funcionamiento del ciclo de Krebs por medio de la actividad de una de las enzimas involucradas en dicho ciclo. OBJETIVOS ESPECÍFICOS. Dos objetivos relacionados con la practica

INTRODUCCIÓN. La conversión de succinato a fumarato, la tercera oxidación del ciclo del acido cítrico, es catalizada por el succinato deshidrogenasa, una flavoproteina y oxidoreductasa que contiene FAD. La parte final del ciclo consiste en la reorganización de moléculas a 4 átomos de carbono hasta la regeneración del axalacetato. Para que eso sea posible, el grupo metilo presente en el succinato tiene que convertirse a un carbonilo. Estos tres pasos además de regenerar axalacetato, permiten la extracción ulterior de energía mediante la formación de FADH2 y NADH. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS. MATERIALES: Material de laboratorio • Mortero • 2 tubos • Gradilla • 2 pipetas de 5ml • 1 pipeta de 1ml • 1 termometro de 0 a 100 ºC • arena de vidrio Material biológico • Aceite vegetal 10ml • Musculo fresco de res o pollo 1g REACTIVOS: • Acido succínico al 3% neutralizado con hidróxido de sodio al 10% hasta pH 7.4 , 50 ml • Azul de metileno al 0,001%, 25 ml • Acido tricloroacetico al 20%, 10 ml EQUIPOS: Baño maria

PROCEDIMIENTO. 1. Triturar cuidadosamente con arena de vidrio 1 g. de musculo en el mortero añadiendo de 3 a 4 ml de la disolución de ácido succínico y filtrara a través de una gasa la mezcla. 2. El líquido homogenizado se reparte en dos porciones iguales, las cuales se pondrán en tubos de ensayo.

3. En el tubo control se añade 1 ml de disolución de ácido tricloroacetico para destruir la enzima. 4. Añadir a ambos tubos de 1 a 2 gotas de azul de metileno y agitar. 5. Sobre la superficie del líquido de cada tubo se vierte de 0,5 a 1 ml de aceite con el fin de aislar el oxígeno del aire. 6. Los tubos se incuban a baño maría a 50ºC durante 10 minutos. 7. Una vez transcurrido todo ese tiempo en el tubo de ensayo experimental se observa la decoloración de azul de metileno.

GRÁFICOS.

RESULTADOS. Anotar los cambios de color de los tubos Explicar porque el azul de metileno puede actuar como indicador cuando la enzima está presente y activa. BIBLIOGRAFIA Citar la fuente bibliográfica general, específica que sustentan la práctica con bibliografía existente en bibliotecas y debidamente actualizada. Según normas APA (mínimo 3 bibliografías)

CUESTIONARIO. 1. ¿Porque se utiliza musculo como material biológico de experimentación? 2. Nombre las enzimas del ciclo de Krebs e indique el tipo de reacción que cataliza cada una. Indique cuales actúan como oxido reductasas y cual es su cofactor? 3. En la reacción en la cual el succinol-coenzima A es convertida a succinato una molecula de GTP es producida. Es sabido que la producción de GTP es equivalente a la de ATP. ¿Cómo puede explicar esto considerando los siguientes cambios de reacción.? 4. Que es la succinato deshidrogenasa y en que via metabolica ejerce su acción. 5. Cuales son los productos de su actividad.

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LUGAR DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: LABORATORIO DE BIOQUIMICA Y BROMATOLOGIA PRÁCTICA No.3 TEMA: EXTRACCIÓN DE ADN. DOCENTE: BQF. ESTELA MENDEZ LEMA MSc.

1. DATOS GENERALES: NOMBRE: (estudiante(s)

CODIGO(S): (de estudiante(s)

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GRUPO No.: …………. FECHA DE REALIZACIÓN: aa/mm/dd

FECHA DE ENTREGA: aa/mm/dd

TEMA. EXTRACCIÓN DE ADN.

OBJETIVOS. OBJETIVO GENERAL. • Extraer el ADN de las células del hígado de pollo. OBJETIVOS ESPECÍFICOS. (Escribir al menos 2 objetivos específicos).

INTRODUCCIÓN. El ADN se encuentra en el interior del núcleo celular, disperso y muy replegado, unido a proteínas para formar la cromatina. Así, para extraerlo será necesario homogeneizar el tejido y romper las células para separar el núcleo, romper también la envoltura nuclear para liberar su contenido, luego separar el ADN de las proteínas que lo protegen y, por último, precipitarlo para extraerlo de la solución. Una vez realizado esto, el ADN aparecerá como un agregado de fibras blanquecinas que se adhieren a la varilla de vidrio. Finalmente, se puede situar sobre un porta objetos, teñirlo con un colorante básico y observarlo al microscopio.

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS. MATERIALES: • Placas porta y cubre objetos • Papel filtro • Gasa • Mortero • Embudo • Probeta 50 ml • Vaso de precipitación 250 ml • Varilla de agitación • Arena lavada • Cacerola • Detergente líquido (transparente de preferencia) • Hielos • Hígado de pollo (fresco)

REACTIVOS: • Solución de NaCl 2M • Etanol (frío) • Agua destilada • Azul de metileno EQUIPOS: • Microscopio compuesto.

PROCEDIMIENTO. 1. 2. 3. 4. 5.

6. 7.

8. 9. 10.

Triturar completamente en frío la muestra de hígado en el mortero junto con arena. Añadir 50 ml de agua destilada y remover suavemente pero mezclando a fondo. Filtrar varias veces el resultado a través de una gasa primero, y luego a través de papel filtro. Añadir al filtrado resultante un volumen igual de solución de NaCl 2M. Añadir 1 ml de detergente líquido y revolver suavemente, mezclando bien pero evitando que se forme espuma. Repetir la mezcla varias veces dejando reposar un minuto cada vez. Si se forma espuma se puede retirar con una esquina de papel de filtro o con un gotero. Volver a filtrar. Añadir 50 ml de alcohol muy frío, teniendo cuidado de hacerlo inclinando el vaso de precipitación y dejando resbalar muy lentamente el alcohol por la pared de aquel para formar una capa sobre la solución anterior. Es muy importante evitar que se mezclen ambas soluciones, pues será en la interfase donde precipitará el ADN. El ADN irá apareciendo poco a poco en la interfase agua-alcohol en forma de grumos blancos. Recoger mediante la varilla de vidrio unas hebras blancas que corresponden a miles de fibras de ADN, introduciéndola ligeramente bajo la interfase y haciéndola girar suavemente mientras se extrae. Tomar una muestra del ADN recogido, depositarla sobre un porta objetos y teñir con azul de metileno durante 1 a 3 minutos. Observar al microscopio.

GRÁFICOS. RESULTADOS. a. Tomar en cuenta el proceso de formación de las hebras blancas que corresponden a miles de fibras de ADN. b. Comparar con la imagen vista al microscopio.

CUESTIONARIO. 1. 2. 3. 4. 5.

¿Cuál es la estructura de la molécula de ADN? ¿Qué función tiene el ADN en los organismos? ¿Con qué finalidad se adiciona la solución de NaCl 2M? ¿Cuál es el objetivo de añadir el detergente? ¿Para qué se adiciona el etanol?