Lab 7
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- Words: 1,532
- Pages: 9
Universidad Católica de la Santísima Concepción Facultad de Medicina Medicina
Práctico N° 7 “Metabolismo lipídico”
Integrantes: Scarlet Rissi Helga Silva Jhonattan Soto Ramo: Bioquímica Carrera: Medicina (II) Profesores: BQ. Javier Grandón BQ. Mirna Muñoz BQ. Reginald Del Pozo
Concepción, 21 de Junio de 2007
Introducción
Los exámenes de laboratorio son muy importantes en clínica para el diagnóstico diferencial de distintas enfermedades que por otro procedimiento no sería posible. Dentro de estos exámenes, encontramos el Perfil Bioquímico, que mide 16 parámetros 16 parámetros (glucosa, urea, colesterol, etc.) a través de los cuales se busca investigar varias funciones fisiológicas, necesarias para el correcto funcionamiento del organismo. Pero en algunas ocasiones, como cuando se observa el colesterol elevado, este procedimiento no es suficiente, ya que el alza en los valores puede deverse a aumento de HDL o de LDL. Para dilucidar este problema, se necesita un examen conocido como “perfil lipídico” que consiste en la medición de colesterol total, colesterol HDL y triglicéridos totales. Este examen es un importante determinante del riesgo cardiovascular del paciente. El siguiente práctico de laboratorio, intentará emular lo más fielmente posible la determinación real de estos parámetros en una muestra problema (número 5) y en una muestra de suero de un alumno Objetivos: • Determinar la concentración de colesterol total, triglicéridos, colesterol HDL y colesterol LDL en muestras. • Familiarizarse con la determinación de los parámetros anteriormente mencionados. • Interpretar los resultados obtenidos. • Comprender la importancia de estos exámenes bioquímicos para la evaluación clínica del riesgo cardiovascular.
Materiales
• • • • • • •
Tubos de ensayo Cubetas para medición en espectrofotómetro Gradilla para tubos de ensayo y para cubetas Micropipetas (10-100μL, 100-2000 μL) Baño termorregulado Espectrofotómetro Vórtex
Reactivos: • • • • • • • •
Estándar de colesterol (200mg/dL) Reactivo enzimático de colesterol Reactivo enzimático para triglicéridos Estándar de triglicéridos (200mg/dL) Estándar de HDL (20mg/dL) Agua destilada Muestra de suero sanguíneo de alumno Muestra problema 5
Método Ponemos en una gradilla 21 tubos de ensayo separados en 3 filas de 7. Estos tubos corresponden a 1 blanco, 2 estándares, 2 tubos para nuestra muestra problema y 2 para nuestra propia muestra de suero. Cada columna corresponde a una experiencia distinta y se utilizará la misma distribución de los tubos. También debemos rotular los tubos previamente. Ponemos a cada tubo de las 2 primeras dos filas, 1 mL de reactivo enzimático de colesterol y a la tercera 1mL de reactivo enzimático para triglicéridos. Con esto ya tenemos la base para cada una de las experiencias. La distribución de los tubos, es la siguiente:
Gradilla vista desde arriba
Determinación de colesterol total Determinación de colesterol HDL Determinación de triglicéridos totales
Blanco
Estándar
Muestra problema 5
Muestra alumno
Determinación de colesterol total Preparar los tubos según la siguiente tabla:
Suero o plasma Estándar de colesterol 200mg/dL Reactivo enzimático para colesterol
Blanco
Muestra problema 5 (x2)
Muestra alumno (x2)
Estándar (x2)
***
10μL
10μL
***
***
***
***
10μL
1mL
1mL
1mL
1mL
Vorterear cada tubo luego de agregar los reactivos. Incubar durante 5 mins en baño termorregulado Determinación de colesterol HDL Preparar los tubos según la siguiente tabla Muestra Blanco problema 5 (x2) Estándar HDL *** *** (20mg/dL) Sobrenadante *** 100μL Reactivo enzimático de 1mL 1mL colesterol Agua destilada 100μL ***
Muestra alumno (x2)
Estándar (x2)
***
100μL
100μL
***
1mL
1mL
***
***
Vorterear luego de agregar los reactivos e incubar 10 min a 37ºC Determinación de triglicéridos totales:
Preparar los tubos según la siguiente tabla:
Suero o plasma Estándar de glicerol 200mg/dL Reactivo enzimático para colesterol
Blanco
Muestra problema 5 (x2)
Muestra alumno (x2)
Estándar (x2)
***
10μL
10μL
***
***
***
***
10μL
1mL
1mL
1mL
1mL
Vorterear luego de agregar los reactivos e incubar 5 min a 37ºC Una vez mezclados todos los tubos, se ponen en un baño termorregulado a 37ºC durante 5 min, excepto la fila de determinación de colesterol total que debe estar durante 10 min. Una vez terminado el proceso de incubación, vaciar el contenido de cada tubo en una cubeta para su posterior lectura en el espectrofotómetro a las siguientes longitudes de onda. Determinación de colesterol total Determinación de colesterol HDL Determinación de triglicéridos totales
500nm 500nm 505nm
Anotar los resultados obtenidos para luego realizar los cálculos necesarios.
Resultados
Absorbancia Concentración (mg/dL) Ejemplo de cálculo: 0.350 200 0.294 X
Absorbancia Concentración (mg/dL) Ejemplo de cálculo: 0.896 200 0.173 X
Absorbancia Concentración (mg/dL)
Colesterol total Muestra Estándar alumno 0.350 0.294 200
Muestra problema N° 5 0.690
168
0.294 x 200 X 0.350
X = 168
Triglicéridos Muestra Estándar alumno 0.896 0.173 200
394
Muestra problema N° 5 0.574
39
0.173 x 200 X 0.896
128
X = 39
Colesterol - HDL Muestra Estándar alumno 0.290 0.503 20
Muestra problema N° 5 0.240
69
33
HDL = (Absorbancia de la prueba/Absorbancia estándar) x 40 Ejemplo de cálculo: HDL = (0.503/0.290) x 40 69 Colesterol - LDL Muestra alumno Muestra problema N° 5 Concentración (mg/dL)
91
335
Colesterol LDL = Colesterol total – (Triglicéridos/5) – Colesterol HDL Ejemplo de cálculo: Colesterol LDL = 168 – (39/5) – 69 91
Discusión
La idea de este práctico es analizar el perfil lipídico tanto de nuestra compañera como de una muestra problema. El análisis lo realizaremos evaluando los distintos resultados obtenidos: Colesterol total: El valor normal de colesterol total debe ser menor a 200 mg/dl, valor de riesgo leve entre 200-250 mg/dl, mayor a esto hay riesgo severo. Nuestra compañera tiene 168 mg/dl de colesterol total, por lo que está normal. A diferencia de la muestra problema número 5 que tiene de colesterol total 394 mg/dl, por lo tanto se encuentra con el colesterol muy elevada en riesgo severo, hipercolesterolemia. Esto es preocupante ya que induce a un mayor riesgo de enfermedades cardiovasculares, debido a que el colesterol aumenta el riesgo de ateromas. Triglicéridos: Los valores normales son inferiores a 150 mg/dl, mayor a 150 mg /dl hay sopecha de riesgo a hipertrigliceridemia, y valores mayores a 200 mg/dl riesgo elevado, ya hipertrigliceridemia. Nuestra compañera tiene 39 mg/dl de triglicéridos por lo tanto está normal. La muestra problema tiene 128 mg/dl por lo tanto también está dentro de los rangos normales, sin riesgo de hipertrigliceridemia. Colesterol HDL: Este colesterol HDL tiene como valores normales: • En mujeres: >65 favorable; entre 45-65 riesgo normal y <45 indicador de riesgo. • En hombres: > 55pronostico favorable; riesgo normal entre 35-55; <35 indicador de riesgo. Nuestra compañera tiene 69 mg/dl por lo tanto se encuentra dentro del rango favorable. Por lo tanto, no conlleva alto riesgo de enfermedad cardiovascular. En cambio nuestra muestra problema tiene 33 mg/dl de Colesterol HDL, lo cual es muy bajo en ambos sexos, y asociado a esto tiene niveles anormales en los otros parámetros, por lo tanto desde ahora podemos inferir en un alto riesgo d sufrir enfermedades cardiovasculares.. Colesterol LDL: Los valores normales de colesterol LDL es menor a 155 mg/dl. Nuestra compañero tiene 91 mg/dl por lo tanto es normal, en cambio la muestra problema tiene una alto nivel de colesterol LDL (335 mg/dl) lo cual se debe también a la alta proporción de colesterol total y la baja proporción de colesterol HDL. Las partículas LDL cogen la grasa del hígado y la depositan en las paredes de los vasos sanguíneos en depósitos denominados placas. Las placas que contienen gran cantidad de grasa, pueden volverse inestables y, entonces, romperse provocando una obstrucción sanguínea distal (trombosis) que según
donde se localice puede dar lugar a infarto de miocardio o infartos cerebrales, he ahí su relación con enfermedades cardiovasculares.
Conclusión Como conclusión analizaremos de manera cardiovascular de ambos perfiles lipídicos obtenidos.
integrada
el
riesgo
Compañera: Todos los valores son normales, por lo que tiene solo un bajo riesgo cardiovascular. Esto puede indicar que la dieta que consume se encuentra bien balanceada con respecto a los lípidos, pero no debe confiarse en ello pues de todas formas se encuentra cerca de los límites en el colesterol total y en el colesterol HDL. A pesar de esto, se considera que los niveles elevados de lipoproteínas de alta densidad (HDL) influyen sobre el riesgo coronario independientemente de cuán altas o bajas sean las lipoproteínas de baja densidad (LDL). Un aumento del 1% en el tipo HDL se ha relacionado con una reducción del 2 al 3% en la incidencia de ataques cardíacos. Muestra problema: La muestra problema presenta casi todos los valores anormales, excepto los triglicéridos que están cercanos al límite. Pero el colesterol total y LDL están elevados y el colesterol HDL está disminuido. Todo conlleva a un alto riesgo cardiovascular, asociado especialmente a aterosclerosis dado por los altos niveles de Colesterol LDL por la generación de placas de colesterol. Por otro lado lo niveles bajos de HDL se asocian especialmente a ataques cardiacos aumentando las probabilidades de riesgo a enfermedades cardiovasculares. Sin duda este práctico tiene relevancia fundamental para un estudiante de medicina, ya que conlleva al diagnóstico de patologías de gran estudio a nivel nacional que son las enfermedades cardiovasculares.
Bibliografía •
Lehninger, Albert, “Principios de Bioquímica”, 1995, Ediciones Omega, S. A., Barcelona
•
Guía de trabajos prácticos, Carrera Medicina 2007.
•
http://www.alemana.cl/reader/alemana/pub/v03/S9701Articulos/news9148.ht ml
•
http://www.labtestsonline.es/tests/LipidProfile.html
Práctico N° 7 “Metabolismo lipídico”
Integrantes: Scarlet Rissi Helga Silva Jhonattan Soto Ramo: Bioquímica Carrera: Medicina (II) Profesores: BQ. Javier Grandón BQ. Mirna Muñoz BQ. Reginald Del Pozo
Concepción, 21 de Junio de 2007
Introducción
Los exámenes de laboratorio son muy importantes en clínica para el diagnóstico diferencial de distintas enfermedades que por otro procedimiento no sería posible. Dentro de estos exámenes, encontramos el Perfil Bioquímico, que mide 16 parámetros 16 parámetros (glucosa, urea, colesterol, etc.) a través de los cuales se busca investigar varias funciones fisiológicas, necesarias para el correcto funcionamiento del organismo. Pero en algunas ocasiones, como cuando se observa el colesterol elevado, este procedimiento no es suficiente, ya que el alza en los valores puede deverse a aumento de HDL o de LDL. Para dilucidar este problema, se necesita un examen conocido como “perfil lipídico” que consiste en la medición de colesterol total, colesterol HDL y triglicéridos totales. Este examen es un importante determinante del riesgo cardiovascular del paciente. El siguiente práctico de laboratorio, intentará emular lo más fielmente posible la determinación real de estos parámetros en una muestra problema (número 5) y en una muestra de suero de un alumno Objetivos: • Determinar la concentración de colesterol total, triglicéridos, colesterol HDL y colesterol LDL en muestras. • Familiarizarse con la determinación de los parámetros anteriormente mencionados. • Interpretar los resultados obtenidos. • Comprender la importancia de estos exámenes bioquímicos para la evaluación clínica del riesgo cardiovascular.
Materiales
• • • • • • •
Tubos de ensayo Cubetas para medición en espectrofotómetro Gradilla para tubos de ensayo y para cubetas Micropipetas (10-100μL, 100-2000 μL) Baño termorregulado Espectrofotómetro Vórtex
Reactivos: • • • • • • • •
Estándar de colesterol (200mg/dL) Reactivo enzimático de colesterol Reactivo enzimático para triglicéridos Estándar de triglicéridos (200mg/dL) Estándar de HDL (20mg/dL) Agua destilada Muestra de suero sanguíneo de alumno Muestra problema 5
Método Ponemos en una gradilla 21 tubos de ensayo separados en 3 filas de 7. Estos tubos corresponden a 1 blanco, 2 estándares, 2 tubos para nuestra muestra problema y 2 para nuestra propia muestra de suero. Cada columna corresponde a una experiencia distinta y se utilizará la misma distribución de los tubos. También debemos rotular los tubos previamente. Ponemos a cada tubo de las 2 primeras dos filas, 1 mL de reactivo enzimático de colesterol y a la tercera 1mL de reactivo enzimático para triglicéridos. Con esto ya tenemos la base para cada una de las experiencias. La distribución de los tubos, es la siguiente:
Gradilla vista desde arriba
Determinación de colesterol total Determinación de colesterol HDL Determinación de triglicéridos totales
Blanco
Estándar
Muestra problema 5
Muestra alumno
Determinación de colesterol total Preparar los tubos según la siguiente tabla:
Suero o plasma Estándar de colesterol 200mg/dL Reactivo enzimático para colesterol
Blanco
Muestra problema 5 (x2)
Muestra alumno (x2)
Estándar (x2)
***
10μL
10μL
***
***
***
***
10μL
1mL
1mL
1mL
1mL
Vorterear cada tubo luego de agregar los reactivos. Incubar durante 5 mins en baño termorregulado Determinación de colesterol HDL Preparar los tubos según la siguiente tabla Muestra Blanco problema 5 (x2) Estándar HDL *** *** (20mg/dL) Sobrenadante *** 100μL Reactivo enzimático de 1mL 1mL colesterol Agua destilada 100μL ***
Muestra alumno (x2)
Estándar (x2)
***
100μL
100μL
***
1mL
1mL
***
***
Vorterear luego de agregar los reactivos e incubar 10 min a 37ºC Determinación de triglicéridos totales:
Preparar los tubos según la siguiente tabla:
Suero o plasma Estándar de glicerol 200mg/dL Reactivo enzimático para colesterol
Blanco
Muestra problema 5 (x2)
Muestra alumno (x2)
Estándar (x2)
***
10μL
10μL
***
***
***
***
10μL
1mL
1mL
1mL
1mL
Vorterear luego de agregar los reactivos e incubar 5 min a 37ºC Una vez mezclados todos los tubos, se ponen en un baño termorregulado a 37ºC durante 5 min, excepto la fila de determinación de colesterol total que debe estar durante 10 min. Una vez terminado el proceso de incubación, vaciar el contenido de cada tubo en una cubeta para su posterior lectura en el espectrofotómetro a las siguientes longitudes de onda. Determinación de colesterol total Determinación de colesterol HDL Determinación de triglicéridos totales
500nm 500nm 505nm
Anotar los resultados obtenidos para luego realizar los cálculos necesarios.
Resultados
Absorbancia Concentración (mg/dL) Ejemplo de cálculo: 0.350 200 0.294 X
Absorbancia Concentración (mg/dL) Ejemplo de cálculo: 0.896 200 0.173 X
Absorbancia Concentración (mg/dL)
Colesterol total Muestra Estándar alumno 0.350 0.294 200
Muestra problema N° 5 0.690
168
0.294 x 200 X 0.350
X = 168
Triglicéridos Muestra Estándar alumno 0.896 0.173 200
394
Muestra problema N° 5 0.574
39
0.173 x 200 X 0.896
128
X = 39
Colesterol - HDL Muestra Estándar alumno 0.290 0.503 20
Muestra problema N° 5 0.240
69
33
HDL = (Absorbancia de la prueba/Absorbancia estándar) x 40 Ejemplo de cálculo: HDL = (0.503/0.290) x 40 69 Colesterol - LDL Muestra alumno Muestra problema N° 5 Concentración (mg/dL)
91
335
Colesterol LDL = Colesterol total – (Triglicéridos/5) – Colesterol HDL Ejemplo de cálculo: Colesterol LDL = 168 – (39/5) – 69 91
Discusión
La idea de este práctico es analizar el perfil lipídico tanto de nuestra compañera como de una muestra problema. El análisis lo realizaremos evaluando los distintos resultados obtenidos: Colesterol total: El valor normal de colesterol total debe ser menor a 200 mg/dl, valor de riesgo leve entre 200-250 mg/dl, mayor a esto hay riesgo severo. Nuestra compañera tiene 168 mg/dl de colesterol total, por lo que está normal. A diferencia de la muestra problema número 5 que tiene de colesterol total 394 mg/dl, por lo tanto se encuentra con el colesterol muy elevada en riesgo severo, hipercolesterolemia. Esto es preocupante ya que induce a un mayor riesgo de enfermedades cardiovasculares, debido a que el colesterol aumenta el riesgo de ateromas. Triglicéridos: Los valores normales son inferiores a 150 mg/dl, mayor a 150 mg /dl hay sopecha de riesgo a hipertrigliceridemia, y valores mayores a 200 mg/dl riesgo elevado, ya hipertrigliceridemia. Nuestra compañera tiene 39 mg/dl de triglicéridos por lo tanto está normal. La muestra problema tiene 128 mg/dl por lo tanto también está dentro de los rangos normales, sin riesgo de hipertrigliceridemia. Colesterol HDL: Este colesterol HDL tiene como valores normales: • En mujeres: >65 favorable; entre 45-65 riesgo normal y <45 indicador de riesgo. • En hombres: > 55pronostico favorable; riesgo normal entre 35-55; <35 indicador de riesgo. Nuestra compañera tiene 69 mg/dl por lo tanto se encuentra dentro del rango favorable. Por lo tanto, no conlleva alto riesgo de enfermedad cardiovascular. En cambio nuestra muestra problema tiene 33 mg/dl de Colesterol HDL, lo cual es muy bajo en ambos sexos, y asociado a esto tiene niveles anormales en los otros parámetros, por lo tanto desde ahora podemos inferir en un alto riesgo d sufrir enfermedades cardiovasculares.. Colesterol LDL: Los valores normales de colesterol LDL es menor a 155 mg/dl. Nuestra compañero tiene 91 mg/dl por lo tanto es normal, en cambio la muestra problema tiene una alto nivel de colesterol LDL (335 mg/dl) lo cual se debe también a la alta proporción de colesterol total y la baja proporción de colesterol HDL. Las partículas LDL cogen la grasa del hígado y la depositan en las paredes de los vasos sanguíneos en depósitos denominados placas. Las placas que contienen gran cantidad de grasa, pueden volverse inestables y, entonces, romperse provocando una obstrucción sanguínea distal (trombosis) que según
donde se localice puede dar lugar a infarto de miocardio o infartos cerebrales, he ahí su relación con enfermedades cardiovasculares.
Conclusión Como conclusión analizaremos de manera cardiovascular de ambos perfiles lipídicos obtenidos.
integrada
el
riesgo
Compañera: Todos los valores son normales, por lo que tiene solo un bajo riesgo cardiovascular. Esto puede indicar que la dieta que consume se encuentra bien balanceada con respecto a los lípidos, pero no debe confiarse en ello pues de todas formas se encuentra cerca de los límites en el colesterol total y en el colesterol HDL. A pesar de esto, se considera que los niveles elevados de lipoproteínas de alta densidad (HDL) influyen sobre el riesgo coronario independientemente de cuán altas o bajas sean las lipoproteínas de baja densidad (LDL). Un aumento del 1% en el tipo HDL se ha relacionado con una reducción del 2 al 3% en la incidencia de ataques cardíacos. Muestra problema: La muestra problema presenta casi todos los valores anormales, excepto los triglicéridos que están cercanos al límite. Pero el colesterol total y LDL están elevados y el colesterol HDL está disminuido. Todo conlleva a un alto riesgo cardiovascular, asociado especialmente a aterosclerosis dado por los altos niveles de Colesterol LDL por la generación de placas de colesterol. Por otro lado lo niveles bajos de HDL se asocian especialmente a ataques cardiacos aumentando las probabilidades de riesgo a enfermedades cardiovasculares. Sin duda este práctico tiene relevancia fundamental para un estudiante de medicina, ya que conlleva al diagnóstico de patologías de gran estudio a nivel nacional que son las enfermedades cardiovasculares.
Bibliografía •
Lehninger, Albert, “Principios de Bioquímica”, 1995, Ediciones Omega, S. A., Barcelona
•
Guía de trabajos prácticos, Carrera Medicina 2007.
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http://www.alemana.cl/reader/alemana/pub/v03/S9701Articulos/news9148.ht ml
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http://www.labtestsonline.es/tests/LipidProfile.html
