Jurnal Reading Kalani, Kamel Dinata, Yos .docx

Jurnal Reading

The Importance of Distinguishing Menstrual and Peripheral Blood in Forensic Casework

Oleh : Lany Arza

1740312248

Amelinda Syafrawi Dinata

1840312307

Yoseph De Nachs

1840312438

Preseptor : dr. Citra Manela, Sp.F

BAGIAN ILMU KEDOKTERAN FORENSIK DAN MEDIKOLEGAL FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS ANDALAS RSUP DR. M. DJAMIL PADANG 2019

Pentingnya Perbedaan Darah Menstruasi dan Darah Tepi pada Kasus Forensik

Abstrak Laporan ini menyajikan kasus seorang wanita berusia 18 tahun yang ditemukan tidak sadarkan diri oleh petugas polisi di luar sebuah klub yang diduga menjadi korban kekerasan seksual. Dia tidak dapat memberikan informasi tentang dinamika kejadian itu, karena dia berada di bawah pengaruh alkohol dalam jumlah besar. Dia menegaskan bahwa masih perawan. Analisis genetik forensik dilakukan pada swab vagina dan rektal serta jejak seperti bercak darah yang ada pada alas kaki. Analisis DNA dan RNA dilakukan dengan menggunakan multiplex untuk marker berulang 15 autosom pendek yang saling beriringan dan dari 19 primer spesifik untuk jaringan yang berbeda, secara berurutan. Tidak ada DNA laki-laki yang diidentifikasi pada swab vagina dan rektal dan pada bercak darah pada pakaian dalam. Penanda darah, vagina, dan kulit dinilai diamati dalam sampel yang diperoleh dari jejak alas kaki dan swab vagina. Analisis genetik forensik mendukung proposisi bahwa korban melakukan hubungan seksual, dengan tidak adanya sampel biologis pria, dalam kasus ini korban dipengaruhi oleh kadar alkohol yang tinggi dalam darah, sehingga tidak dapat memberikan informasi. Kata-kata kunci: pengetikan mRNA, profil genetik, serangan seksual, genetika forensik, laporan kasus. (Am J Forensik Med Pathol 2018; 39: 337–340)

Analisis mengidentifikasi

DNA

banyak

pelaku.

Namun,

digunakan

di

penemuan

bidang

profil

forensik

DNA

pelaku

untuk tidak

mengungkapkan waktu dan keadaan di mana kejahatan dilakukan. Bercak cairan tubuh yang ditemukan di TKP atau di dalam tubuh korban adalah jenis bukti penting bagi penyelidik forensik: khususnya, identifikasi cairan tubuh sangat penting, karena sifat cairan ini sangat berperan untuk memastikan penanganan sampel yang benar dan itu bisa menjadi alat yang sangat penting untuk merekonstruksi dinamika kejadian. Setiap cairan tubuh memiliki komposisi yang unik, dan keberadaan komponen-komponen tertentu dalam satu cairan dengan cairan lain merupakan dasar identifikasi.1 Namun, ketidakmampuan untuk menentukan sumber jaringan cairan biologis forensik yang relevan dalam kasus kekerasan seksual dapat mengakibatkan kegagalan untuk memberikan informasi penting yang diperlukan untuk penyelidikan, terutama dalam kasus-kasus di mana korban tidak dapat memberikan informasi tentang dinamika kejadian.2 Dalam beberapa tahun terakhir, analisis RNA (mRNA) dan mikroRNA telah diidentifikasi sebagai metode yang menjanjikan untuk identifikasi cairan tubuh,3 yang menghasilkan metode lain selain pendekatan konvensional.Bahkan, RNA dapat diisolasi secara bersamaan dengan DNA, sehingga dapat menghindari kehilangan sampel dan waktu. Spesifisitas penanda mRNA untuk cairan tubuh forensik yang paling relevan telah diidentifikasi berdasarkan perbedaan fungsional sel dan jaringan yang terlibat, serta dengan tujuan untuk menghindari reaktivitas silang di antaranya. Dalam kasus-kasus kekerasan seksual, identifikasi darah menstruasi penting dalam membedakan menstruasi dari trauma vagina yang menghasilkan cedera dengan akibat pemulihan pada korban dengan jejak darah tepi. Sekresimenstruasi terdiri dari campuran kompleks dari berbagai jenis jaringan: darah, jaringan endometrium yang terdegradasi dan sel epitel. Dalam berbagai

penelitian

identifikasi

cairan

tubuh

berbasis

mRNA,

matrix

metalloproteinase (MMP)7dan MMP11 dilaporkan sebagai penanda spesifik untuk darah menstruasi,4,6,7 sehingga memungkinkan untuk membedakan darah perifer dari yang menstruasi.

Penggunaan marker mRNA untuk identifikasi darah menstruasi pertama kali dipublikasikan oleh Bauer dan Patzelt7 pada tahun 2002, yang mengevaluasi untuk tujuan ini menggunakan mareker matrix metallo-proteinase mRNA (MMP). Mereka mampu mendeteksi MMP dalam endometrium tetapi tidak dalam darah dan epitel lainnya.7 Haas et al4 pada tahun 2009 menunjukkan bahwa sampel darah menstruasi menunjukkan kadar MMP7 dan MMP11 yang tinggi. Dalam sekresi vagina, sampel menunjukkan kadar MMP7 dan MMP11 yang lemah, tetapi tetap ada. Semua penanda darah agak lemah dalam sampel darah menstruasi.4 Efisiensi MMP11 dikonfirmasi oleh Ferri et al6 dalam aplikasi kasus forensik yang nyata dan oleh Fleming dan Harbison3 termasuk penanda ini dalam mRNA multiplex reverse transcription transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) uji untuk identifikasi 5 cairan tubuh. Deteksi mRNA spesifik jaringan menawarkan keuntungan penting dalam kerja forensik: sensitivitas tinggi karena kemungkinan amplifikasi PCR, spesifisitas tinggi karena pola ekspresi gen, unik untuk status fungsional sel dan organ, isolasi DNA simultan tanpa kehilangan sampel, menggunakan metode ekstraksi yang secara bersamaan mengisolasi RNA dan DNA dari ekstrak pewarnaan yang sama, dan yang tak kalah pentingnya, stabilitas mRNA dalam pewarnaan forensik. Keuntungan menerapkan analisis ini adalah bahwa mRNA pro-filing kini telah berevolusi menjadi platform PCR multipleks, sehingga memberikan informasi tentang ekspresi gen multipel. Selain itu, profil mRNA dapat dengan mudah digabungkan dengan profil DNA dari sampel yang sama persis, menggunakan metode coextraction.8,9 Dengan cara ini, analisis pada ekstrak mRNA akan menghasilkan informasi mengenai asal-usul bercak cairan, dan analisis DNA akan mengungkapkan identitas pelaku. Ada alat koekstraksi yang tersedia secara komersial yang memungkinkan isolasi DNA dan RNA secara bersamaan dan meminimalkan konsumsi sampel, mengurangi jumlah waktu yang diperlukan untuk melakukan analisis.

KASUS Pasien adalah seorang wanita sehat berusia 18 tahun. Dia ditemukan tidak sadarkan diri oleh petugas polisi di luar sebuah klub tempat konser diadakan yang diselamatkan dan diangkut dengan ambulans ke departemen darurat ginekologi terdekat, di mana dia diterima pada jam 5 pagi. Seorang dokter kandungan kebidanan menyelesaikan riwayat medis dan pemeriksaan fisik. Setelah korban sadar kembali, ia tidak dapat memberikan informasi tentang dinamika kejadian itu, karena ia berada di bawah pengaruh alkohol dalam konsentrasi tinggi (2,4 g / L). Dia melaporkan telah menghabiskan malam dengan seorang teman di klub dan bahwa selama konser dia bertemu seorang pria muda yang menawarkan minuman; dia ingat pernah melihat pendarahan dari vaginanya setelah menghabiskan beberapa menit di kamar mandi dengan pemuda itu, tetapi dia tidak dapat mengungkapkan apa yang terjadi di dalam kamar mandi. Dia tidak ingat adanya penetrasi penis-vaginal atau anal-penis secara paksa, atau seks oral-penis yang dipaksakan. Dia menegaskan bahwa dia masih perawan. Pasien diperiksa, dan ada jejak darah pada alas kaki yang dikenakan oleh korban. Dua swab rektal dan dua swab vagina diambil untuk analisis DNA dan dikirim ke Laboratorium Forensik Genetika, bersamaan dengan semua pakaian yang dikenakan korban. Apusan vagina juga dikumpulkan untuk menguji gonore, klamidia, dan trikomonas, dan serum dikumpulkan untuk mendeteksi HIV, hepatitis (B dan C), dan sifilis. Seperti dilaporkan dalam rekam medis dari IGD, inspeksi genital daerah eksternal dan perianal menunjukkan adanya abrasi pada fourchette posterior, dan tampak sisa robek himen selaput dara. Pemeriksaan vagina dengan spekulum menunjukkan dinding vagina yang rata, portio yang kurang divisualisasikan, dan adanya residu berwarna coklat gelap di vagina. Analisis Laboratorium Genetika Forensik bertujuan mengidentifikasi bahan biologis, pertama-tama untuk mendeteksi keberadaan semen dan kemudian mengidentifikasi sumber cairan lain dengan multiplex mRNA, memverifikasi keberadaan sampel biologis pria dan kemudian menetapkan sifat dari jejak seperti darah yang terdapat pada alas kaki dan pada swab vagina.

MATERIAL DAN METODE Kumpulan Sampel Dua swab vagina dan dua rektal dikumpulkan dan dibawa ke Laboratorium Genetika Forensik, kemudian sampel disimpan pada suhu -20 ° C. Pakaian, yang dikenakan oleh korban selama kejadian, juga dikirim ke Laboratorium Genetika Forensik. Secara khusus, kami menemukan bercak darah kecil di alas kaki.

Ekstraksi RNA Analisis genetik dilakukan pada 1 swab vagina dan 1 rektal dan bercak pada alas kaki. Ekstraksi RNA dilakukan menggunakan ekstraksi berbasis kolom QiagenAllPrep DNA / RNA Micro kit, sesuai dengan instruksi percetakan. Sampel didenaturasi dengan beberapa adaptasi: 366,9 μL buffer lisis termasuk 345 μL Quiagen RLT plus buffer,6,9 μL 1,4-dithiothreitol(2 M), 10 μL dari Qiagen proteinase K, dan 5 μL dari Carrier-RNA (310 ng / μL) dalam tabung Eppendorf, dimasukkan pada 56°C hingga 3 jam untuk meningkatkan ekstraksi. Sampel dielusi dengan 15 μL air bebas RNAase.

Terapi DNase Penghapusan kontaminan DNA dilakukan dengan Ambion Turbo DNAfree. Sepuluh mikroliter RNA dipanaskan dengan0,1 volume penyangga turbo DNase 10 dan 1 μL turbo DNase pada 37 ° C selama 30 menit. Inaktivasi DNase diperoleh dengan menambahkan 0,1 volume resin inaktivasi selama 5 menit pada suhu kamar. Setelah sentrifugasi 10.000 g selama 1,5 menit, supernatan dikumpulkan dan siap untuk kuantifikasi melalui NanoDrop One dan kemudian untuk reverse transcription (RT).

Reverse Transcription Sampel RNA (10 μL) digunakan untuk RT menggunakan alat Transkripsi Skrip RETRO Ambion. Pembawa RNA digunakan untuk ekstraksi, protokol RT dilakukan sesuai dengan instruksi pabrik, menggunakan decamers acak, dan DNA komplementer (cDNA) diperoleh dalam volume akhir 20 μL.

Reaksi Rantai Polimerase Multipleks Multipleks dengan primer untuk ALAS2, CD93, HBB, HTN3, STATH, BPIFA1, KLK3, CYP2B7P1, SEMG1, PRM1, MUC4, MMP7, MYOZ1, MMP10, MMP11, CDSN, LCE1C, ACTB, dan18S-rRNA diambil mengikuti apa yang dilaporkan dalam literatur untuk urutan primer dan konsentrasi,10,11 serta untuk gen housekeeping ACTB dan 18SrRNA sebagai kontrol endogen. Dalam reaksi multipleks, hingga 3,75 μL cDNA diamplifikasi dengan adanya 6,25 μL dari 2 campuran master QIAGEN Multiplex dan2,5 μL 5 campuran primer, menghasilkan total volume 12,5 μL. GeneAmp9700 PCR System (Applied Biosystems) digunakan dengan kondisi siklus berikut: 95 ° C selama 15 menit, 33 siklus 94 ° C selama 20 detik, 60 ° C selama 30 detik, 72 ° C selama 40 detik, dan final langkah pada 60 ° C selama 45 menit. Dua jenis kontrol negatif dan kontrol positif (disertakan dengan alat RT) disertakan dengan semua pemeriksaan. Kontrol negatif minus-RT diperoleh dengan menambahkan RNA residual yang tidak ditranskripsikan dalam PCR multiplex, sedangkan kontrol negatif minus-template terdiri dari semua reagen PCR multipleks kecuali cDNA. Menurut apa yang dijelaskan oleh Lindenbergh et al,12 4Replikasi PCR dari sampel RNA dilakukan.

Elektroforesis Kapiler Fragmen yang diamplifikasi dideteksi dengan sistem elektroforesis kapiler ABI Prism 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems oleh Life Technologies). Untuk setiap reaksi, 1 μL produk PCR ditambahkan ke 15 μL master mix (14,5 μL

HiDiformamide dan 0,5 μL standar ukuran GeneScan 500 LIZ [Applied Biosystems by Life Technologies]). Kontrol negatif yang hanya terdiri dari campuran master dimasukkan. Sampel diproses menggunakan pewarna-set G5 dan dianalisis dengan GeneMapper Analysis Software versi 3.2 (Applied Biosystems oleh Life Technologies). Ambang deteksi puncak 50 unit fluoresensi relatif diterapkan.

Profil DNA STR Ekstraksi, Kuantifikasi, Amplifikasi, dan Deteksi DNA Pemeriksaan mikroskopis pada swab vagina dan rektal dilakukan dan tidak ditemukan sel sperma setelah diamati; Namun demikian, dalam hipotesis bahwa hanya sedikit sel sperma yang ada dan pemeriksa belum melihatnya melalui pemeriksaan mikroskopis, DNA disatukan dengan buffer kit Mini DNA / RNA QiagenAllPrep, mengikuti instruksi pabrik dan termasuk 6,9 μL dari 1,4dithiothreitol (2). M) dan kemudian dielusi dalam 20 μL buffer elusi qiagen. Ekstrak DNA dikuantifikasi menggunakan NanoDrop One (Applied Biosystems), sesuai dengan instruksi pabrik. Spektrofotometer ini memungkinkan untuk kuantifikasi DNA secara umum, tanpa membedakan antara DNA pria dan wanita. Dua nanogram total DNA diamplifikasi dengan IdentifilerPlus multiplex Kit (Applied Biosystems) dalam volume reaksi total 25 μL pada GeneAmp PCR System 9700 (Applied Biosystems) sesuai dengan protokol pabrikan. Produk reaksi rantai polimerase terdeteksi menggunakan prosedur yang sama pada bagian Elektroforesis Kapiler.

HASIL Profil DNA Untuk mengidentifikasi profil pelaku kejahatan seksual, dilakukan analisis short tandem repeat pada DNA yang diekstraksi dari swab vagina dan swab rektal

serta dari bercak darah pada pakaian dalam. Tidak ada campuran DNA yang diidentifikasi, memang electropherograms sesuai dengan profil korban.

Profil RNA Analisis mRNA dilakukan untuk mengungkapkan sifat dari dugaan jejak darah pada pakaian dalam yang dikenakan oleh korban dan pada swab vagina dan untuk menyingkirkan atau mengkonfirmasi keberadaan sperma. Swab anal tidak diselidiki lebih lanjut karena jejak seperti darah tidak diamati dan bahan biologis laki-laki tidak diidentifikasi (tidak ada profil short tandem repeat yang terdeteksi atau bukti sel sperma pada pemeriksaan mikroskopis). Interpretasi data RNA dilakukan dengan menggunakan 4 PCR ulangan sesuai dengan aturan x = n / 2 seperti yang dijelaskan oleh Lindenbergh et al, 12 yang membandingkan jumlah puncak yang diamati ( x ) dengan jumlah puncak yang dimungkinkan secara teoritis ( n ) di semua ulangan. Tipe cairan tubuh diberi skor teramati ketika setidaknya setengah dari puncak yang mungkin terdeteksi ( x ≥ n / 2), dilambangkan secara sporadis teramati ketika kurang dari setengah dari puncak yang mungkin ditemukan (0 < x < n / 2), dan diberi skor tidak teramati ketika tidak ada puncak yang terdeteksi ( x = 0). Penanda sperma (PRM1 dan SEMG1) tidak ditemukan pada semua ulangan. Marker darah (HBB dan ALAS2), vaginal (MYOZ1), dan kulit (CDSN dan LCE1C) diberi skor teramati didalam sampel yang diperoleh dari jejak pakaian dalam dan

swab vagina. Gambar 1 mewakili salah satu dari

electropherograms. Penanda housekeeping (ACTB dan 18S-rRNA) muncul, sehingga menunjukkan efisiensi analisis yang baik. Puncak ketidakseimbangan dari marker yang berbeda adalah karena kekokohan utama dari HBB, CYP2B7P1, dan 2 penanda housekeeping berhubungan dengan yang lain. 11

Tidak adanya penanda metaloprotease MMP7, 10, dan 11 mengkonfirmasi sifat darah perifer, tidak termasuk asal menstruasi dari cairan biologis yang pulih pada celana dalam korban dan swab vagina.

GAMBAR 1 : Electropherogram diperoleh dari jejak pada pakaian dalam yang dikenakan oleh korban selama serangan

DISKUSI Kasus ini berhubungan dengan seorang wanita muda yang ditemukan tidak sadarkan diri dan diyakini menjadi korban kekerasan seksual. Setelah korban sadar kembali di rumah sakit, ia tidak dapat memberikan informasi mengenai dinamika kejadian, karena ia berada di bawah pengaruh alkohol dalam jumlah besar. Identifikasi cairan tubuh tertentu dapat berguna untuk merekonstruksi peristiwa yang terjadi, khususnya dalam kasus kekerasan seksual. Untuk tujuan ini,

kami

telah

menganalisis

jejak

dengan

multiplex

mRNA

untuk

mengidentifikasi bahan biologis, pertama-tama untuk mendeteksi keberadaan cairan

mani

(semen)

dan

kemudian

mengidentifikasi

sumber

cairan

lainnya. Electropherogram menunjukkan tidak adanya penanda spesifik semen (PRM1 dan SEMG1). Selain itu, analisis profil DNA mengkonfirmasi tidak adanya bahan biologis pria, hanya menunjukkan profil genetik korban. Akibatnya, menjadi penting untuk mengidentifikasi sifat darah yang ditemukan pada pakaian dalam dan swab vagina. Tujuannya adalah untuk membedakan antara kemungkinan bahwa serangannya telah menghasilkan cedera vagina dan dengan demikian perdarahan vagina berdasarkan hipotesis jaksa, atau bahwa adanya perdarahan vagina disebabkan oleh siklus menstruasi dan tidak terkait dengan penetrasi vagina yang keras di bawah hipotesis pertahanan. Berkat penggunaan analisis mRNA, dimungkinkan untuk menyingkirkan hipotesis bahwa darah yang ditemukan pada sampel korban adalah darah menstruasi. Identifikasi

penanda

darah

tepi

telah

memungkinkan

untuk

menentukan temuan ini sesuai dengan adanya lesi pada selaput dara dan pada fourchette posterior; dengan demikian, asal darah perifer konsisten dengan temuan anatomi dan dengan hipotesis cedera traumatis (karena penyisipan benda asing atau hubungan seksual) di daerah perineum. Hal ini penting untuk menyingkirkan hipotesis pertahanan bahwa lesi anatomi yang diamati terjadi sebelum kejadian dan bahwa perdarahan disebabkan

oleh siklus menstruasi dan bukan karena serangan itu, didukung juga oleh fakta bahwa tidak ada cedera lain yang terdeteksi pada tubuh korban. Langkah kedua ini juga dapat dicapai melalui penggunaan uji PMB SERATEC, yang telah terbukti menjadi alat yang bermanfaat dalam menafsirkan sampel yang mengandung menstruasi manusia dan atau darah tepi. 13 Namun demikian, pendekatan kami pada kasus nyata ini adalah untuk pertama-tama mengidentifikasi semua cairan biologis yang mungkin didalam noda dan hasil swab, tidak hanya perbedaan antara darah menstruasi dan darah perifer. Kegunaan dari pendekatan multiplex mRNA untuk kasus ini adalah bahwa hal itu dapat mengarah pada deteksi tidak hanya darah tetapi juga jejak air mani atau air liur, sehingga membantu merekonstruksi bagaimana peristiwa itu terjadi. Analisis genetik forensik yang dilakukan mendukung hipotesis bahwa korban melakukan hubungan seksual, kekerasan atau tidak, dengan tidak adanya bahan biologis pria, dalam kasus dimana korban, yang dipengaruhi oleh kadar alkohol tinggi di dalam darah, tidak dapat memberikan informasi. Sebagai kesimpulan, peningkatan besar yang diberikan oleh teknologi RNA ke laboratorium genetika forensik adalah kemampuan dalam kasus forensik, untuk mendeteksi asal cairan tubuh dan mewakili tes konfirmasi yang dapat diterapkan di bidang ini pada noda yang tidak diketahui, karena itu mampu mengidentifikasi cairan tubuh yang mungkin ada. Lebih lanjut, seperti terlihat dalam kasus ini, kemungkinan koekstraksi DNA dan RNA dari sampel yang sama dan kemampuan untuk penanda multiplex mRNA untuk satu atau lebih identifikasi cairan tubuh dapat mengatasi metode identifikasi konvensional, sehingga menghindari kehilangan sampel.

Telaah Kritis (Critical Appraisal) Jurnal Tabel Check List Umum Struktur dan Isi Masalah Ya

Tidak

Judul Makalah 1. 2. 3. 4.

Tidak terlalu panjang atau terlalu pendek Menggambarkan isi utama penelitian Cukup menarik Tanpa singkatan, selain yang baku

V V V V

Pengarang & Institusi 5. Nama-nama dituliskan sesuai dengan aturan jurnal Abstrak 6. Abstrak satu paragraf atau terstruktur 7. Mencakup komponen IMRAD 8. Secara keseluruhan informatif 9. Tanpa singkatan, selain yang baku 10. Kurang dari 250 kata Pendahuluan 11. Ringkas, terdiri 2-3 paragraf 12. Paragraf pertama mengemukakan alasan dilakukan penelitian 13. Paragraf berikut menyatakan hipotesis atau tujuan penelitian 14. Didukung oleh pustaka yang relevan 15. Kurang dari 1 halaman Metode 16. Disebutkan desain, tempat, dan waktu penelitian 17. Disebutkan populasi sumber (populasi terjangkau) 18. Dijelaskan kriteria inklusi dan eksklusi 19. Disebutkan cara pemilihan subjek (teknik sampling) 20. Disebutkan perkiraan besar sampel dan alasannya 21. Besar sampel dihitung dengan rumus yang sesuai 22. Komponen-komponen rumus besar sampel masuk akal 23. Observasi, pengukuran, serta intervensi dirinci sehingga orang lain dapat mengulanginya 24. Ditulis rujukan bila teknik pengukuran tidak dirinci 25. Pengukuran dilakukan secara tersamar 26. Dilakukan uji keandalan pengukuran (kappa) 27. Definisi istilah dan variabel penting dikemukakan 28. Ethical clearance diperoleh 29. Persetujuan subjek diperoleh 30. Disebutkan rencana analisis, batas kemaknaan, dan power penelitian 31. Disebutkan program komputer yang dipakai

V V V V V V V V V V V

V V V V V V V V V V V V V V V V

TR

Hasil 32. Disertakan tabel karakteristik subjek penelitian 33. Karakteristik subjek sebelum intervensi dideskripsi 34. Tidak dilakukan uji hipotesis untuk kesetaraan pra-intervensi 35. Disebutkan jumlah subjek yang diteliti 36. Dijelaskan subjek yang dropout dengan alasannya 37. Ketepatan numerik dijelaskan dengan benar 38. Penulisan tabel dilakukan dengan tepat 39. Tabel dan ilustrasi informatif dan memang diperlukan 40. Tidak semua hasil didalam tabel disebutkan pada naskah 41. Semua outcome yang penting disebutkan dalam hasil 42. Subjek yang dropout diikutkan dalam analisis 43. Analisis dilakukan dengan uji yang sesuai 44. Ditulis hasil uji statistika, degree of freedom, dan nilai P 45. Tidak dilakukan analisis yang semula tidak direncanakan 46. Disertakan interval kepercayaan 47. Dalam hasil tidak disertakan komentar atau pendapat Diskusi 48. Semua hal yang relevan dibahas 49. Tidak sering diulang hal yang dikemukakan pada hasil 50. Dibahas keterbatasan penelitian dan dampaknya terhadap hasil 51. Disebut penyimpangan protokol dan dampaknya terhadap hasil 52. Diskusi dihubungkan dengan pertanyaan penelitian 53. Dibahas hubungan hasil dengan teori/penelitian terdahulu 54. Dibahas hubungan hasil dengan praktik klinis 55. Efek samping dikemukakan dan dibahas 56. Disebutkan hasil tambahan selama observasi 57. Hasil tambahan tersebut tidak dianalisis secara statistika 58. Disertakan simpulan utama penelitian 59. Simpulan didasarkan pada data penelitian 60. Simpulan tersebut sahih 61. Disebutkan generalisasi hasil penelitian 62. Disertakan saran penelitian selanjutnya Ucapan Terima Kasih 63. Ucapan terima kasih ditujukan pada orang yang tepat 64. Ucapan terima kasih dinyatakan secara wajar Daftar Pustaka 65. Daftar pustaka disusun sesuai dengan aturan jurnal 66. Kesesuaian sitasi pada nas dan daftar pustaka

V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V