Jurnal-1

Artikel review ini memberi pengetahuan tentang metode pengembangan dan parameter analisis berbasis HPTLC berdasarkan evaluasi praktis. Ini memenuhi standar dan meminimalkan kesalahan dan penyelidikan. Artikel tinjauan ini membantu memilih fase gerak terbaik dan memberikan panduan untuk praktik validasi yang baik dan memahami langkah-langkah prosedur analitik. Kata kunci: metode pengembangan, validasi, HPTLC

PENDAHULUAN Kromatografi Lapis Tipis Tingkat Tinggi (HPTLC) adalah bentuk lanjutan Kromatografi Lapis Tipis (TLC) yang paling kuat dan terdiri dari lapisan kromatografi dengan efisiensi pemisahan terbaik dan penerapan instrumentasi yang canggih untuk semua langkah dalam prosedur ini mencakup aplikasi sampel yang akurat, standar pengembangan kromatogram yang dapat direproduksi dan evaluasi yang dikendalikan perangkat lunak [1]. HPTLC adalah konsep yang mencakup metodologi yang terstandarisasi berdasarkan fakta ilmiah dan juga penggunaan metode yang divalidasi untuk analisis kualitatif dan kuantitatif [2]. HPTLC memenuhi semua persyaratan kualitas untuk laboratorium analisis hari ini, untuk meningkatkan resolusi dan memungkinkan pengukuran kuantitatif yang lebih akurat [3]. Metode HPTLC: Fase Stationary: HPTLC adalah bentuk TLC modern yang paling maju. Menggunakan pelat HPTLC yang menampilkan partikel kecil dengan distribusi ukuran sempit yang menghasilkan lapisan homogen dengan permukaan halus yang bisa diperoleh. HPTLC menggunakan piring yang lebih kecil (10 × 10 atau 10 x 20 cm). Pelat HPTLC memberikan resolusi yang lebih baik, sensitivitas pendeteksian yang lebih tinggi, dan peningkatan kuantifikasi situ dan digunakan untuk analisis kuantitatif densitometrik industri farmasi. TLC adsorpsi fase normal pada silika gel dengan fasa gerak yang kurang polar, seperti kloroform-metanol, telah digunakan untuk lebih dari 90% analisis obat-obatan dan obat-obatan yang dilaporkan [4]. 1. Metode HPTLC yang sederhana dan tepat dikembangkan untuk estimasi simultan dua obat anti-inflamasi (curcuminand galangin). Metode ini disesuaikan untuk menganalisis kedua obat tersebut dalam bentuk dosis komersialnya (kapsul) tanpa gangguan dari pasien. Pemisahan kromatografi dilakukan pada pelat KLT precoated (60 F254, 20 cm × 10 cm,

ketebalan 250μm, Merck, Darmstadt, Jerman) melalui teknik ascending linier menggunakan nhexane, etil asetat, asam asetat, dan metanol sebagai mobilephase. Deteksi dan kuantifikasi dicapai pada 404 nm melalui spektrofensitometricanalysis [5].

2. Laporan metode densitometrik TLC, yang telah dikembangkan dan divalidasi untuk kuantifikasi stigmasterol dari ekstrak petroleum eter daun dan batang Bryophyllumpinnatum. Pemisahan dilakukan pada pelat aluminium KLT yang didahului dengan silika gel 60 F254. Pemisahan yang baik dicapai pada fase gerak menggunakan Kloroform: Etanol (9.8: 0.2 v / v). Penentuan dan kuantisasi dilakukan dengan pemindaian densitometri pada 490 nm dalam mode refleksi / absorbansi [6]. 3. Ini menggambarkan metode HPTLC sederhana, tepat dan akurat untuk estimasi sebagai bulk dan dalam bentuk dosis tablet. Pemisahan kromatografi dilakukan pada pelat aluminium silika gel 60 F254 precoated menggunakan campuran metanol dan toluena (4: 3% v / v) karena fase gerak dan evaluasi densitometrik pada titik dilakukan pada 235nm [7]. Lipophilic C-18, C-8, C-2; fase silika gel diubah secara fenil; dan pelat gel silika yang diresapi hidrokarbon yang dikembangkan dengan fasa gerak berair yang lebih polar, seperti air metanol atau dioksan, digunakan untuk fase terbalik TLC. 1. Metode kromatografi lapis tipis berkinerja tinggi baru (HPTLC) telah ditetapkan untuk penentuan minosiklin dalam plasma manusia. Kromatografi dilakukan pada pelat aluminium yang dilapisi dengan silika gel 60F254; fase gerak adalah metanol: asetonitril: isopropanol: air 5: 4: 0.5: 0.5 (v / v). Analisis densitometri dilakukan pada 345 nm [8]. 2. Metode kromatografi lapis tipis yang sederhana, tepat, akurat dan berkinerja tinggi telah dikembangkan dan divalidasi untuk estimasi Olmesartanmedoxomil dan hydrochlorthiazide bersamaan dengan kombinasi bentuk sediaan. Fasa diam menggunakan gel silika 60F254 yang dilekatkan. fase gerak adalah campuran asetonitril: kloroform: asam asetat glasial (7: 2: 0.5, v / v / v). Deteksi bintik-bintik dilakukan pada 254nm [9]. 3. Metode kromatografi lapis tipis tipis yang sederhana, tepat, akurat dan cepat telah dikembangkan dan divalidasi untuk estimasi tenoxicam d gel microemulsion. Tenoxicam dikromatografi pada lempeng plat silika gel 60 F254, sebagai fase diam. Fase gerak adalah toluena: etil asetat: asam format (6: 4: 0,3 v / v / v) yang digunakan [4]. Metode kromatografi lapis tipis sederhana, tepat, spesifik dan

akurat telah dikembangkan untuk penentuan simultan. dari Cinitapride dan Omeprazole dalam bentuk sediaan farmasi. Pemisahan dilakukan pada pelat aluminium MerckTCC dari silika gel G60 F254, (20 × 10 cm) dengan ketebalan 250μm menggunakan kloroform: etil asetat: metanol (7,3: 2: 0,7, v / v / v) sebagai fase gerak. Pemisahan HPTLC dari kedua obat yang diikuti dengan pengukuran densitometrik dilakukan pada mode absorbansi pada 277 nm [11]. 5. Ini menjelaskan metode kromatografi cair lapisan tipis yang dikembangkan dan divalidasi untuk perkiraan simultan telmisartan dan ramipril dalam bentuk dosis gabungan. Prosedur tidak memerlukan pemisahan komponen sebelumnya dari sampel. Telmisartan dan Ramipril ditentukan dengan metode kromatografi Lapis Tipis Kinerja Tinggi (HPTLC) dalam bentuk sediaan tablet. Metode ini dilakukan dalam silika gel preklamasi TLC pada pelat aluminium 60 F 254, (10 cm x 10 cm, dicuci dengan metanol dan diaktifkan pada suhu 60 ° C selama 5 menit sebelum kromatografi). Sistem pelarut adalah Acetone: Benzene: Ethyl acetate: Asam asetat glasial dalam proporsi 5: 3: 2: 0,03, (v / v / v / v) [12] Lapisan precoated lainnya yang digunakan meliputi aluminium oksida, magnesium silikat , magnesium oksida, poliamida, selulosa, kieselguhr, penukar ion, dan lapisan gel silika termodifikasi polar yang mengandung gugus amino, siano, diol, dan tiol terikat. Pemisahan isomer isomer yang dilakukan pada lapisan kiral yang dihasilkan dari C-18 MobilePhase: Pemilihan fasa gerak didasarkan pada bahan adsorben yang digunakan sebagai fase diam dan sifat fisik dan kimia analit. Sistem fase gerak yang digunakan berdasarkan sifat selektivitasnya beragam adalah dietil eter, metilena klorida, dan kloroform yang digabungkan secara terpisah atau bersama heksana sebagai pelarut strengthadjusting untuk KLT fase normal dan metanol, asetonitril, dan tetrahidrofuran yang dicampur dengan air untuk penyesuaian kekuatan. dalam KLT fase terbalik. Pemisahan dengan pasangan ion pada lapisan C-18 dilakukan dengan fase gerak seperti buffer asetat metanol 0,1 M (pH 3,5) yang mengandung 25 mM natrium pentanesulfonat (15,5: 4.5). 1. Metode HPTLC yang sederhana dan tepat dikembangkan untuk estimasi simultan dua obat anti-inflamasi (curcuminandgalangin). Metode ini disesuaikan untuk menganalisis kedua obat tersebut dalam bentuk dosis komersialnya (kapsul) tanpa gangguan dari pasien. Pemisahan kromatografi dilakukan pada pelat KLT precoated (60 F254, 20 cm x 10 cm, ketebalan 250 mm, Merck,

Darmstadt, Jerman) melalui teknik ascending linier menggunakan n-heksana, etil asetat, asam asetat, dan metanol sebagai mobilephase [ 5]. 2. Kuantifikasi kuantitatif Lamivudine dan Zidovudine pada tablet dengan metode HPTLC dikembangkan dan divalidasi. Kromatogram dikembangkan menggunakan fase gerak toluena: etilasetat: metanol (4: 4: 2, v / v / v) pada lempeng berlapis aluminium pelat GF silika gel GF dan dihitung dengan mode absorbansi densitometri pada 276 nm [13 ]. 3. Metode kromatografi lapis tipis berkinerja tinggi (HPTLC) baru telah ditetapkan untuk penentuan minosiklin dalam plasma manusia. Kromatografi dilakukan pada pelat aluminium yang dilapisi dengan silika gel 60F254; fase gerak adalah metanol: asetonitril: isopropanol: air 5: 4: 0.5: 0.5 (v / v) [8]. 4. Metode HPTLC baru dan sederhana dikembangkan dan divalidasi untuk estimasi kuantitatif Eugenol pada otot dan obat pelemas nyeri sendi. Pelat aluminium KLL yang didahului dengan silika gel 60F-254 (ketebalan 0,2 mm) digunakan. Perkembangan ascending linier dilakukan di ruang gelas kembar dengan rasio fase gerak Tolune: Ethyl acetate (9.3: 0.7) yang diikuti oleh penentuan densitometrik dilakukan oleh pemindai TLC (CAMLC) pada 560 nm dalam mode reflektansi / absorbansi [14] . 5. Metode kromatografi lapis tipis kinerja tinggi yang sensitif, cepat, dan dapat direproduksi telah dikembangkan untuk analisis diosgenin dan kuersetin secara simultan dari biji fenugreek, dengan menggunakan pelat aluminium KLT yang didahului dengan silika gel G60F254. Diantara kombinasi fase gerak yang berbeda yang digunakan, pemisahan terbaik dicapai pada asam format Toluena-etil asetat (5: 4: 1, v / v / v). Pemindaian densitometrik pelat secara langsung pada 275nm digunakan untuk analisis kuersetin [15]. 6. Metode kromatografi lapis tipis baru, sederhana, dan cepat berkinerja tinggi dikembangkan dan divalidasi untuk penentuan kadar karbamazepin secara kuantitatif. Carbamazepin dikromatografi pada plat silika gel 60 F254 dengan etil asetat: toluena: metanol (5.0: 4.0: 1.0 v / v / v) sebagai fase gerak. Carbamazepine diukur dengan analisis densitometrik pada 285 nm [16]. 7. Metoda kromatografi lapis tipis sederhana, tepat, akurat, spesifik, dan selektif dengan kinerja tinggi (HPTLC) telah dikembangkan untuk estimasi terus menerus dari Terbinafine hydrochloride (TH) dan Mometasonefuroate (MF) dalam bentuk dosis krim. Pemisahan kromatografi dicapai pada pelat aluminium silika gel Merck precoated 60 F254 menggunakan Toluene: Ethyl acetate: asam asetat glasial (8: 4: 0,1 v / v) sebagai

fase gerak [17]. 8 Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) untuk analisis kualitatif dan kuantitatif tablet natrium diklofenak dikembangkan dan divalidasi menurut pedoman ICH dan USP. Metode ini dikembangkan dengan menggunakan fasa gerak yang dibuat dengan pelarut yang ramah lingkungan: toluena, aseton dan asam asetat glasial (10: 15: 0.2 v / v / v), pada pelat gelas silika gel 60 F254 berlapis pra dengan dilapisi dengan waktu jenuh dari 25 menit dan panjang gelombang pendeteksian densitometer 284 nm dalam mode absorbansi absorbansi [18]. 9. Metode yang akurat, sensitif, tepat, andal, dan cepat untuk penentuan kadar kolesterol dengan kromatografi lapis tipis berkinerja tinggi dikembangkan.

Dalam metode ini, gel silika terdegradasi yang didukung aluminium 60 Pelat F254 digunakan sebagai fase diam dan Sampel disemprot dengan bantuan contoh CAMAG aplikator Linomat 5. Kromatogram dikembangkan dengan fasa gerak yang terdiri dari kloroform: metanol (9.5: 0.5, v / v) [19]. 10. Lapisan tipis baru yang sederhana dan berkinerja tinggi metode kromatografi untuk penentuan mycophenolate mofetil dalam bentuk sediaan bulk dan tablet. Itu Obat dipisahkan pada piring aluminium yang didahului dengan silika gel 60 F254 dengan toluena, aseton, dan metanol di rasio 6: 2: 2 (v / v / v) sebagai fase gerak. Kuantitatif Analisis dilakukan dengan pemindaian densitometrik pada 254 nm [20]. 11. Metode HPTLC yang sederhana, tepat dan akurat Duloxetine Hydrochloride untuk estimasi sebagai bulk dan in bentuk sediaan tablet. Pemisahan kromatografi itu dilakukan pada pelat aluminium silika 60F254 precoated gel menggunakan campuran Chloroform: metanol (8: 1 v / v) sebagai ponsel tahap dan evaluasi densitometrik titik dilakukan di 235nm [21].

Prewashing: Pelat ditangani di tepi atas untuk menghindari kontaminasi. Pelat digunakan tanpa pretreatment kecuali kromatografi menghasilkan impurity front karena kontaminasi dari piring Untuk reproduktifitas dan Analisis kuantitatif, lapisan sering dicuci dengan menggunakan 20 ml metanol Metanol digunakan sebagai prikething pelarut, campuran metanol dan etil asetat atau bahkan Fasa gerak digunakan, per palung dalam celah 20 × 10 cm ruang (TTC). Dua 20 × 10 cm atau empat 10 × Pelat 10 cm bisa dikembangkan back-to-back di setiap palung dari TTC. Lepaskan piring dan keringkan selama 20 menit di a oven pengeringan bersih pada suhu 120 ° C. Equilibrate plate dengan atmosfer laboratorium (suhu, kelembaban relatif) a wadah yang sesuai memberikan perlindungan dari debu dan uap. 3 Persiapan piring: Pelat KLT dapat dibuat dengan peralatan yang sesuai. seperti itu lapisan tidak menempel baik ke kaca dukungan. Precoated piring menggunakan jumlah kecil dengan berat molekul sangat tinggi Polimer sebagai pengikat mengatasi sebagian besar keterbatasan buatan sendiri layer.Precoated layers cukup abrasi tahan, sangat seragam di ketebalan lapisan, bisa diulang, preactivated, dan siap pakai. Mereka tersedia dengan kaca atau aluminium atau poliester. Alumunium foil Pelat yang lebih murah untuk dibeli, lebih murah, bisa dipotong, dan Oleh karena itu mudah dibawa kemana-mana atau transportasi atau surat. Kaca piring adalah yang terbaik untuk kualitas hasil tertinggi. Paling sering, lapisan yang berisi indikator fluorescent F 254 digunakan. Hal ini memungkinkan visualisasi sampel dalam kabinet UV sangat sederhana, seketika, dan nondestruktif cara. Biasa digunakan ukuran pelat di TLC adalah 20 × 20 cm dan di HPTLC 20 × 10 cm atau 10x10 cm tersebar luas. Langkah-langkah yang terlibat dalam prosedur HPTLC  Contoh Aplikasi  Pengembangan Chromatogram Derivatisasi  Evaluasi: Deteksi Evaluasi: Dokumentasi Contoh Aplikasi: Aplikasi sampel memainkan peran penting dan perannya

Teknik adalah aplikasi spot dan penyemprotan - on Contoh. Contoh aplikasi adalah langkah pertama masuk kromatografi dan mempengaruhi kualitas hasilnya di akhir proses.Pilihan teknik aplikasi dan perangkat tergantung pada persyaratan. Spot bijaksana Aplikasi sampel menggunakan kapiler volume tetap adalah cara termudah. Volume sampel 0,5 sampai 5 μL bisa jadi Diaplikasikan sebagai bintik-bintik ke lapisan konvensional tanpa pengeringan, pada lapisan HPTLC sampai 1 μL per spot. Penyemprotan sampel sebagai pita sempit dengan volume lebih besar resolusi terbaik yang bisa diraih dengan sistem kromatografi dipilih. Volume sampel besar atau Sampel dengan kandungan matriks tinggi bisa disemprotkan pada bentuk persegi panjang dan fokus ke pita sempit. Pengembangan Chromatogram Dalam teknik ini selain stasioner dan mobile fase, fasa gas ada. Fase gas ini bisa secara signifikan mempengaruhi hasil pemisahan. Gambar 1. proses dalam mengembangkan ruang1

3. Tidak seperti (1) proses ini tidak diatur oleh uap tekanan seperti kekuatan adsorpsi. 4. Selama migrasi, komponen fase gerak dapat dipisahkan oleh fase diam di bawah tertentu kondisi, menyebabkan terbentuknya front sekunder. Aspek berikut harus diikuti: Pelarut dan fase gerak yang berkembang sama saja. Komposisi mereka berubah dengan kromatografi. Syarat Mengembangkan pelarut, fase gerak sering digunakan sama, cairan dalam ruangan harus disebut berkembang pelarut, sedangkan cairan bergerak melalui lapisan merupakan fase gerak. Hanya komposisi dari mengembangkan pelarut pada saat ditempatkan ke dalam ruang positif diketahui. Proses (1) dan (2) bisa secara eksperimental dipengaruhi oleh:  Memasangkan baterainya kurang lebih sama sekali dengan kertas saring direndam dengan pelarut

yang sedang berkembang.  Menunggu waktu antara pengenalan mengembangkan pelarut ke dalam ruang dan awal kromatografi - kejenuhan ruang.  Mengizinkan piring berinteraksi dengan fasa gas sebelum pengembangan kromatografi, yaitu tanpa kontak dengan pelarut - prasyarat pelarut. Langkah 2 dan 3 dapat dicegah dengan menempatkan sebuah counter piring pada jarak satu atau beberapa milimeter ke arah lapisan kromatografi Ini disebut sandwich konfigurasi. Equilibriumexists untuk langkah 1 dan 2 dan kurang berbeda komponen fase mobile yang masuk Sehubungan dengan perilaku adsorpsi mereka, untuk langkah 4 itu kurang Diucapkan dalam formasi front sekunder. Di sumur jenuh ruang dan pada lapisan preconditioned sekunder Bagian depan sering tidak diamati. Selama kromatografi, komponen pelarut yang sedang berkembang, yang telah dimuat ke lapisan kering melalui fasa gas sesuai dengan (2), didorong maju dari depan pelarut yang benar namun tak terlihat. Pengecualian adalah komponen yang sangat polar seperti air, metanol, asam, atau basa. Ini menghasilkan nilai RF lebih rendah di kamar jenuh dan terutama pada kondisi preconditioned lapisan, dari pada ruang tak jenuh dan Konfigurasi sandwich Karena kemungkinan dimusnahkannya pelarut dan kemungkinan front beta, pengembangan di sandwich konfigurasi atau dalam pengembangan horizontal tak jenuh ruang bekerja paling baik dengan pelarut komponen tunggal atau pelarut multi komponen berperilaku seperti komponen tunggal pelarut

Konsekuensi: Kromatografi lapisan tipis dalam banyak kasus berlangsung dalam a nonekuilibrium antara fase stasioner, mobile, dan gas. Untuk alasan ini sangat sulit untuk menggambarkan dengan benar kondisi di ruang berkembang. Direproducible Hasil kromatografi diharapkan bila semua parameternya dijaga setepat mungkin. Bentuk kamar dan saturasi memainkan peran utama dalam hal ini. Sayangnya Ini berarti hasil kromatografi berbeda setiap kamar