Informe De Laboratorio 4 Bioquimica

Informe de Laboratorio Nº 4 BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL FACULTAD DE INGENIERÍA INDUSTRIAL Y DE SISTEMAS ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

INFORME DE LABORATORIO Nº 4 BIOQUÍMICA 1 TEMA: Proteínas INTEGRANTES: CÓDIGO 2008236305 2008014178 2008030743 2007007562 2008012754

APELLIDOS Y NOMBRES Portillo Ávila, Marcia Quispe Inga, Marlene Rios Gomez, Harry Jean Munive Salas, David Vives Torres, Marcela

CORREO ELECTRÓNICO [email protected] [email protected] [email protected] [email protected] [email protected]

DOCENTE: Ing. Guillermo Chumbe Gutiérrez

Semestre 2009 – I

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL Página 1 de 10

Informe de Laboratorio Nº 4 BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I

I.

INTRODUCCIÓN

Las proteínas son principios inmediatos orgánicos constituidos por largas cadenas de aminoácidos, los cuales se unen entre sí mediante enlaces peptídico. La existencia del enlace peptídico, de aminoácidos azufrados, puede ponerse de manifiesto en el laboratorio mediante una serie de reacciones coloreadas específicas, que sirve para la identificación de proteínas.

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL Página 2 de 10

Informe de Laboratorio Nº 4 BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I

II.

MARCO TEÓRICO

Las proteínas son macromoléculas compuestas por unidades de alfa –aminoácidos que se unen entre sí mediante enlaces petídicos y que alcanzan un peso molecular igual o superior a 5000 D. El enlace peptídico, característico de estos compuestos, resulta de la reacción del grupo carboxilo de un aminoácido con el grupo amino del otro aminoácido, lo cual da lugar a un enlace covalente de tipo carbamida .

REACION XANTOPROTEICA: La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la cantidad de proteína soluble en una solución, empleando nítrico concentrado pero en nuestro caso en el laboratorio utilizamos H2SO4 . La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro. El REACCION DE BIURET: Es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. Está hecho de KOH y sulfato cúprico (CuSO4).El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. Objetivos:  Reconocer la presencia de algunos aminoácidos en las proteínas.  Conocer algunas propiedades de las proteínas.  Conocer reacción xantoproteica y de biuret.  Aprender cómo reacciona la albumina ante las sustancias respectivas.

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL Página 3 de 10

Informe de Laboratorio Nº 4 BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I

III.

MATERIALES Y MÉTODOS

III.1. Materiales  Muestra •

Clara de huevo

 Materiales de vidrio •

Tubos de ensayo

•

Gradilla

•

Varillas de vidrio

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL Página 4 de 10

Informe de Laboratorio Nº 4 BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I

•

Mechero

•

Vasos de precipitados

•

Pipetas

 Reactivos

•

Acido nítrico concentrado

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL Página 5 de 10

Informe de Laboratorio Nº 4 BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I

•

Hidróxido de

sodio

III.2. Métodos

Usamos el método experimental en el cual implica la observación, manipulación, registro de las variables (dependiente, independiente e intervinientes) que afectan un objeto de estudio. A continuación con este método es indispensable usar el método analítico en el cual se fundamenta en la aplicación del método científico, sus características son la exactitud, precisión, sensibilidad, limite de detección, intervalo dinámico, selectividad, seguridad

IV.

DESCRIPCIÓN DE LA PRÁCTICA

REACCIÓN XANTOPROTEICA

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL Página 6 de 10

Informe de Laboratorio Nº 4 BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I

1. Colocar en el tubo de ensayo de 2 a 3 ml de solución problema en este 2. 3. 4. 5. 6.

caso clara de huevo Añadir 1 ml de HNO3 concentrado. Calentar al baño maría a 100 ºc Enfriarlo Añadir gota a gota una disolución de sosa al 40%. se torna color amarillo oscuro esto debido a la presencia de una sustancia alcalina ( existe grupos aromáticos)

Según las guías químicas es una reacción cualitativa, más no cuantitativa. Por ende determina la presencia o no de proteínas. Para cuantificar se usa otra reacción, como la de Biuret, y se hace un análisis espectro fotométrico. REACCIÓN DE BIURET

1. Coger un tubo de ensayo y poner unos 3 ml de albúmina de huevo. 2. Añadir 2ml de solución de hidróxido sódico al 20%. 3. A continuación 4 ó 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida al 1%. 4. Aparecerá una coloración violeta-rosácea característica esto debido a la presencia de enlaces peptídico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminoácidos.

El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar. Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico que permite determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopía ultravioleta-visible a una longitud de onda de 560 nm (para detectar el ión Cu2+). REACCIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS AZUFRADOS (CISTEÍNA Y METIONINA)

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL Página 7 de 10

Informe de Laboratorio Nº 4 BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I

1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 ml de albúmina de huevo (clara de huevo). 2. se añade 2 ml de solución de hidróxido sódico al 20%. 3. luego se añade 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%. 4. Calentar el tubo hasta ebullición. 5. se forma un precipitado de color negruzco lo cual nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que nos sirve para identificar proteínas que tienen en su composición. Cálculos: Para todas las reacciones se ha preparado Hidróxido de sodio a 20 % esto a partir de Hidróxido de sodio a 40 %, en una disolución: • Numero de moles (inicio) = numero de moles ( final ) • Por lo tanto molaridad x volumen ( inicio) = molaridad x volumen ( final) La preparación de sulfato cúprico al 1 % fue de la siguiente manera;  Se toma 9.9 g de sulfato cúprico con 0.1g de agua destilada  Se combina y agita ambas sustancias y luego se forma la disolución deseada La preparación del acetato de plomo al 5 % fue:  Se toma 0.5 ml de acetato concentrado con 9.5 ml de agua destilada  Se agita las sustancias y se obtiene la disolución

V.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

Resultados y Discusiones 1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo?

En forma rápida ya que cambia sus propiedades por efecto de un agente externo, se coagula como una ácido, una base o una sal como en este caso el acido HNO₃.

2. ¿Cuál de los 3 desnaturalización?

agentes

utilizados

tiene

mayor

poder

de

Con el acido sulfúrico se tiene mayor poder de desnaturalización ya que tiene mayor pérdida de estructura nativa por ser éste un acido fuerte.

3.

¿Cómo podríamos saber si una sustancia desconocida es una proteína? UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL Página 8 de 10

Informe de Laboratorio Nº 4 BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I

Si es un líquido, primero se agregan ácidos (como el ácido acético) para desnaturalizar la proteína (de ser así, se formarán grumos que pueden o no precipitarse al fondo). Después, a ese precipitado se le agrega el reactivo de biuret, que cambia a violeta en presencia de proteínas, y a rosa cuando se combina con poli péptidos de cadena corta.

4. ¿Qué coloración da la reacción del biuret?

Provoca una coloración rosa - violácea.

5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del biuret?

Claro que si, el reactivo reacciona con cualquier proteína liquida o solida. Por ejemplo cuando haces una cuantificación de proteínas en suero o cuando haces una prueba cualitativa en huevos, carnes, papas, etc. El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida.

6. ¿Si se realiza la reacción del biuret sobre un aminoácido como la glicina?¿ Es positiva o negativa?

Si analizamos sólo UN AMINOÁCIDO, la reacción debería dar negativa, ya que no hay ningún enlace peptídico (es sólo 1 aminoácido! El enlace peptídico se da entre 2 aminoácidos).

VI.

CONCLUSIONES

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL Página 9 de 10

Informe de Laboratorio Nº 4 BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I

 Las proteínas están constituidas por aminoácidos, por los cuales los métodos se basan en el reconocimiento de aminoácidos.  Este proceso nos sirve para reconocer si existe proteínas o no en ciertos tipos de sustancias en una solución.  Según los resultados, ninguna sustancia composición que la solución original.

muestra

la

misma

 Las proteínas son sensibles con las sales metálicas pesadas, formando precipitados.

VII.

BIBLIOGRAFÍA

http://html.rincondelvago.com/biologia_41.html http://www.joseacortes.com/practicas/protidos.htm http://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna - Química General – Oswaldo Jauregui Machicao

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL Página 10 de 10