Fagos.docx

CEPA

NÚMERO DE PLACAS 100 10-1 10-2 3

6

2 0

UFP / mL 5x102

TG1 E. coli LT2

20 21

10 19 2 1

1.45x103

11 12 0 0

1.04x103 2.05x102

DESCRIPCIÓN Colonias de 5 mm de diámetro, con microcolonias en el centro Colonias turbias, bien definidas de 3 mm de diámetro. Colonias turbias, bien definidas de 4 mm de diámetro. Colonias turbias, bien definidas de 2mm de diámetro.

DISCUSIÓN:

Se realizó un filtrado de una muestra de aguas negras, del cual se pretende aislar bacteriófagos, también utilizamos 7 cepas tipo, para poder conocer a cuál de ellas podría infectar el fago. Las cepas utilizadas tienen una importancia específica, primero se utilizaron tres tipos diferentes de Escherichia coli (W3110, TG1 Y B837) , la importancia de su utilización radica en que existee dos linajes de este tipo de bacteria, el linaje K para las cepas W3110 Y TG1 y el linaje B para la B837, la diferencia entre linajes radica en los patrones de metilación del DNA para cada bacteria, esta diferencia sirve como protección para la infección por bacteriófago porque hace que las endonucleasas de la bacteria reconozcan a su propio DNA y así puedan eliminar a un exógeno; la diferencia entre la cepa W3110 y la B837 es que una es una donadora F+ (posee el phili sexual) y la receptora F- (no posee el phili sexual), por consiguiente una infección por fagos daría pauta para decir que es específico para las proteínas de phili sexual de la bacteria. Se utilizó también la cepa de Staphylococcus aureus debido a que, al extraer la muestra de fuentes naturales como los canales de aguas negras, la presencia de fagos en esta cepa indicaría que se tiene una gran cantidad de desagües en el canal pues esta bacteria es propia de la microbiota de la piel humana y las vías respiratorias. Para el caso de Bacillus subtilis SB19 la presencia de fagos en esta cepa indicaría que existe una gran cantidad de lodo, pues la bacteria es muy específica para los suelos, también indica una toma de muestra inadecuada pues se tendría una gran cantidad de barro en ella, sin embargo, la maestra nos comentó que por razones desconocidas nunca hay presencia de placas de bacteriófagos en esta cepa. En Salmonella typhimurium LT2 , esta bacteria se encuentra a menudo en aves, como son los pollos y sus huevos y en reptiles como las tortugas; la salmonela es un bacilo gram negativo que pertenece a la familia Enterobacteriaceae; la causa más común del envenenamiento de comida por salmonelosis es Salmonella Typhimurium, en humanos, Salmonella Typhimurium no causa una enfermedad tan severa como la Salmonella Typhi (otra variación de Salmonella que causa la fiebre tifoidea) y normalmente no es fatal, la presencia de dicha cepa indicaría una contaminación por desechos de materia orgánica, de granjas o corrales así como la infección por fagos a bacterias Gram - . Y finalmente se utilizó a Klebsiella pneumoniae que es la especie de mayor

relevancia clínica dentro del género bacteriano Klebsiella, compuesto por bacterias Gram negativas de la familia Enterobacteriaceae, que desempeñan un importante papel como causa de las enfermedades infecciosas oportunistas. La presencia de un fago en esta cepa indicaría una contaminación por desagües de clínicas y hospitales y la infección por fagos a bacterias Gram -. En la primera prueba realiza que fue la prueba de gota los resultados obtenidos primeramente de manera individual arrojan presencia de bacteriófagos a partir de muestras de aguas negras, para la cepa de Salmonella typhimurium LT2, Escherichia coli (cepa silvestre) y Escherichia coli TG1, datos que nos hablan acerca del mal estado del lugar donde fue tomada la muestra. Al presentar fagos para esta cepa, nos hace pensar que por ende deben existir estos microorganismos en el río de los remedios, lugar de recolección de la muestra. La presencia de estos fagos también nos habla que en el agua de este canal existe una contaminación de materia fecal. Con respecto a los resultados grupales ……………………….

Con respecto al título de fagos de la muestra de agua, se debe tener en cuenta que por el hecho de haber sido aislados de una fuente natural el número de fagos no será directamente proporcional a la cantidad de microrganismos capaces de hospedar al virus. La cuantificación solo nos proporciona la cifra de estos microrganismos, y una muy ligera idea de la cantidad relativa de las células que pueden infectar en el sitio de recolección de la muestra. Y es importante mencionar que en los equipos donde no se obtuvieron todos los tipos de fagos, no quiere decir que no hay fagos, sino que también puede ser debido a que en los canales de recolección de la muestra existieran detergentes o metales pesados que inhiban la proliferación de los fagos o en todo caso que la concentración de fagos sea demasiado pequeña y no logre formar UFP. Para la diferenciación de fagos temperados, virulentos y virulentos no citocidas por morfología de placa, se tiene que debido al ciclo de multiplicación de cada fago se puede diferenciar en su morfología colonial, los resultados arrojan que para el fago M13 tiene a la cepa Escherichia coli TG1 por ser una donadora (F+) y presentar el phili sexual con el cual tiene receptores específicos y teniendo una morfología de placas no líticas turbias en el medio de cultivo 2YT, debido a que la liberación de estos se da por vesículas, lo cual confiere turbidez a la placa, pues parte de la bacteria se encuentra presente, para el fago T4 experimentalmente se tienen placas claras, circulares, con bordes bien definidos, pues el ciclo de multiplicación del fago implica la lisis total de la bacteria, y cuya cepa receptora es Escherichia coli W3110 , finalmente para el bacteriófago λ resultó en una morfología con placas de un diámetro más pequeño, centro claro y periferia turbia, debido a que su ciclo de replicación es lítico y lisogénico (fago temperado), en el caso de seguir un ciclo lisogénico, el DNA fágico se integra al cromosoma bacteriano aprovechando las enzimas de la recombinación de la bacteria, lo cual general las

colonias más pequeñas en las placas, pues en este ciclo al tener un profago este no induce infección y no destruye a la célula hospedadora, y la bacteria adquiere resistencia a infección solo a este tipo de fago, para el ciclo lítico el fago no se integra al genoma bacteriano (es más habitual que se comporte como un virus de ciclo lítico) provocando la lisis total de la bacteria dando las zonas claras en las placas. Otro aspecto a recalcar es la utilización de los medios, el 2YT específico para M13 es debido al ciclo de multiplicación del fago, pues en este se elimina la actividad de reproducción de la bacteria y debido a que necesita que esta conserve aspectos metabólicos para que así se pueda dar la liberación de los fagos, el medio proporciona los nutrientes necesarios para que la célula conserve un estado metabólico normal para ella y para que desarrolle la multiplicación del fago. Para el bacteriófago T4 se utilizó un medio rico, esto es debido a que por el ciclo de multiplicación utilizado por este fago elimina completamente a la bacteria, tanto a nivel metabólico como de reproducción. Finalmente, para el bacteriófago lambda se utilizó el medio lambda, el cual contiene biotina que es esencial para el crecimiento del fago. Para la determinación de la amplitud de huésped de los bacteriófagos T4, λ y M13, donde se pretende ver la infección de los fagos en cepas tipos, se obtuvieron los resultados reflejados en: ……………………………….