Esterilización.docx

“AÑO DE LA LUCHA CONTRA LA CORRUPCIÓN Y LA IMPUNIDAD”

INSTITUTO SUPERIOR TECNOLOGICO EUGENIO PACCELLY

CARRERA PROFESIONAL TECNICA EN FARMACIA TEMA:

ESTIRILIZACIÓN

PRESENTADO POR: WONG HUAMANCAJA, Kimi

DOCENTE: LIC, TULA VILLOGAS

CICLO: I HUANCAYO – PERU

PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DEL MATERIAL DE LABORATORIO MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN INTRODUCCIÓN Al trabajar con microorganismos se sabe que el número de variables y factores que pueden afectar los resultados de las prácticas son mayores que cuando se realizan experimentos con elementos sin vida. Es por esto que se deben llevar a cabo ciertos protocolos de limpieza, esterilización y desinfección tanto en los materiales, como en el área de trabajo. La esterilización se define como el proceso validado, en el cual se obtiene un producto final libre de microorganismos viables. Es necesario tener en cuenta que no existe la esterilidad absoluta, y que el nivel de esterilidad se puede medir por la cantidad de microorganismos que se encuentren en el material. Los diferentes tipos de esterilización son: físicos y químicos. Los métodos físicos no utilizan sustancias químicas para eliminar a los microorganismos; el principal agente utilizado es el calor. Hay distintas maneras de transmitirlo, como: calor húmedo, calor seco, incineración, pasteurización, ebullición, tindalización y radiación. La pasteurización es un proceso físico peculiar, ya que, después de que el líquido es sometido al calentamiento, se enfría rápidamente y se sella de manera hermética. Este proceso no elimina las esporas, ni a los microorganismos termofílicos en su totalidad.

Para la esterilización química se utilizan distintos compuestos tales como el etanol, formol, formol, peróxido de hidrógeno, entre otras sustancias letales para los microorganismos. También existen sustancias bacteriostáticas que no matan al organismo, pero impiden su reproducción. La efectividad de los diferentes métodos se puede ver afectada por las características microbianas, el tiempo de exposición, el ambiente y la cantidad de microbios Objetivos Generales  

Aprender a limpiar y preparar el material empleado en el laboratorio de microbiología. Conocer los diferentes tipos de esterilización de material del laboratorio.

Específicos 

Identificar el material de laboratorio, su función y su método de desinfección, al igual que el del área de trabajo.

 

Aprender a preparar el material para su esterilización por medio de calor húmedo. Aprender a preparar el material para su esterilización por medio de calor seco.

Metodología Identificar material de vidrio

Preparar solución de extrán al 20%

Lavar el material de vidrio y enjuagar con agua destilada

Desinfectar la mesa con papel y alcohol etílico al 70%

Marcar los tubos, acomodarlos en los botes y tapar con papel craft

Vertir 6 mL de medio en cada tubo con pipeta de 10 mL

Preparar caldo de soya tripticaseina para 3 tubos de ensayo

Hacer tapones de algodón para tubos de ensayo con pinzas

Anotar fecha, equipo y # de tubos

Colocar tapones de algodón a matraces, tapar con craft y etiquetar

Envolver cajas petri en papel craft boca abajo y marcar

Colocar tapon de algodón en la boquilla superior de las pipetas

Preparar las pinzas igual que las pipetas

Sellar los extremos con cinta y etiquetar

Envolver individualmente 2 pipetas con craft

Flamear con mechero la boca de las pipetas

Colocar el resto de las pipetas en un pipetero y etiquetar

Colocar membrana de 45 micrometros en swinnex

Envolver en papel craft

Programar el autoclave (temperatura, presión y tiempo)

Para CALOR SECO:

Verificar cinta testigo

Al terminar, sacar y dejar enfriar

Colocar material en la canastilla del autoclave, previo precalentamiento a 90°C

Tapar tubos con papel aluminio y poner en latas

Preparar pipetas y poner en pipetero metálico

Colocar tapón de aluminio en matraces y marcar

Envolver pinzas en aluminio, sellar extremos y etiquetar

FIN

Al terminar, sacar y guardar

Meter al horno de calor seco y esperar

Resultados y Discusión En esta práctica no se obtuvieron resultados tangibles, ya que no hubo una verificación de la esterilización. Sin embargo, se espera que el material haya quedado totalmente libre de todas las formas de vida (incluyendo esporas bacterianas), tanto por el método de calor húmedo como por el de calor seco. Por consiguiente, se espera que, de realizarse una prueba para la comprobación de la esterilidad del equipo, ésta revelara la ausencia de microorganismos. Si tal prueba mostrara crecimiento de cualquier tipo de microorganismo, esto indicaría una falla en la programación o el funcionamiento del aparato o una contaminación posterior a la esterilización como consecuencia de una mala preparación del material o un mal manejo de este una vez terminado el proceso. En ausencia de una verificación de la esterilización, sólo podemos mencionar, en relación a los objetivos, que se preparó completa y correctamente el material para esterilizarlo por ambos métodos, es decir, con tapones de algodón y papel craft para el material de calor húmedo y con papel aluminio para el de calor seco y se metió a esterilizar por los métodos correspondientes.

Figura 1. Material preparado para esterilización por calor húmedo

Figura 2. Material preparado para esterilización por calor húmedo dentro del autoclave

Figura 3. Material preparado para esterilización por calor seco

Conclusiones Pese a la ausencia de resultados tangibles, se desarrollaron habilidades para esterilizar el material de laboratorio por los métodos de calor seco y calor húmedo, tomando en cuenta que el método escogido corresponde a las necesidades de esterilización que se desean cubrir, teniendo como variantes: el tipo de material, tiempo disponible para esterilizar, naturaleza de los microorganismos que se desea erradicar, etc. La práctica se desarrolló sin inconveniente, a excepción del tiempo con el que se contaba para utilizar la estufa de esterilización, la cual tarda más del doble en esterilizar a comparación del autoclave. Cabe mencionar que la variedad en el material de laboratorio con el que se llevó a cabo la práctica no representó reto alguno al momento de esterilizar. Resaltamos, además, la importancia de la limpieza que se le tiene que dar al espacio de trabajo en donde se preparan los materiales para la esterilización, así como el manejo de éste después de pasar por el autoclave o estufa de esterilización. Materiales como el papel craft, los tapones de algodón y el aluminio son una parte fundamental para que no exista oportunidad de contaminación, es decir, que sirven como barreras contra la contaminación.

Cuestionario 1. Defina brevemente los siguientes conceptos: a. Esterilización: Eliminación o remoción de todas las formas de vida, incluyendo las esporas bacterianas. b. Pasteurización: Proceso de calentamiento que destruye bacterias patógenas en un fluido como la leche y disminuye el número total de células bacterianas en el fluido. c. Antiséptico: Sustancia química utilizada para reducir o eliminar los microorganismos patógenos en un objeto vivo, por ejemplo, la superficie del cuerpo humano. d. Contaminación: Entrada de microorganismos indeseables en algún objeto o material. e. Desinfección: Proceso de matar o inhibir el crecimiento de patógenos. f. Sanitización: Remover los microbios o reducir su población a un nivel seguro, según lo determinado por las normas de salud pública.

g. Bacteriostático: Referente a cualquier sustancia que previene el crecimiento de las bacterias. 2. ¿Qué es un bioindicador y cómo se emplea? ¿Qué otros indicadores existen y cuál sería el más adecuado a emplear en calor seco, calor húmedo y filtración? Es una preparación caracterizada de un microorganismo específico cuya concentración y resistencia ante un agente esterilizante es conocida y que se puede esperar que muera al ser expuesto a ciertos parámetros. El bioindicador se somete al proceso de esterilización y se examina después, se espera que el resultado sea negativo. Si el resultado es positivo, es decir, que se observa crecimiento, esto indica una falla en el equipo, la preparación o el proceso. También existen indicadores químicos, los cuales confirman que se han cumplido ciertas condiciones químicas necesarias para el proceso de esterilización, y los físicos mecánicos, los cuales aseguran condiciones internas de la cámara y otros parámetros físicos. Método de esterilización Calor seco Calor húmedo

Bioindicador B. Subtilus B. Stearothermophilus

3. ¿Qué función tienen los tapones de algodón y el papel craft? Los tapones de algodón funcionan como filtros, es decir, el algodón evita que penetren microorganismos contaminantes al material ya estéril. Envolver el material en papel facilita su manejo dentro del autoclave o el horno, además de que permite su almacenaje cuando ya está estéril, de manera que el papel funciona como barrera para la contaminación por nuevos microrganismos que pueden estar en el ambiente y generar la contaminación del material al manipularlo después de su esterilización.

4. ¿Cómo limpiarías, desinfectarías y esterilizarías el siguiente material de laboratorio? Material

Limpieza

Mesa de trabajo

Trapo con agua y solución de extrán al 20%

Desinfección Papel humedecido con solución desinfectante (alcohol etílico al 70%, desinfectante fenólico diluido, etc.)

Esterilización Lámpara germicida, luz UV

Antibiótico para medio de cultivo

Material de vidrio

Bata de laboratorio

Agar bacteriológico Campana de flujo laminar Solución isotónica Cultivo hongos para deshecho

X Lavar con agua y solución de extrán al 20%. Posteriormente, enjuagar con agua destilada. Dejarla remojar en 25 gramos de detergente en polvo (por cada 5L de agua) menos un día, luego enjuagar con bastante agua. X Se puede lavar con agua y solución de extrán al 20% antes de desinfectar. X

X

Rayos gamma o filtración con una membrana

Enjuagar con solución de alcohol etílico al 70%

Envolver y esterilizar con calor húmedo o seco.

Remojar en 25 ml de CLOROX comercial al 5.65%

X

X

En autoclave a 121°C, 15 lbs de presión, 10-20 min.

Empapar gasa estéril en abundante alcohol etílico al 70% X

Encender lámpara germicida, luz UV Filtración con membrana

5. ¿Por qué es importante conocer los métodos de esterilización? ¿Qué impacto tendría: en su formación como IBT? Los métodos de esterilización son esenciales para evitar la contaminación de los cultivos y así tener experimentos exitosos y resultados certeros. Es fundamental saber acerca de los diferentes métodos de esterilización para aplicar el método más eficaz y seguro según el material o sustancia.