Ensayo De Toxicidad

ENSAYO DE TOXICIDAD PARA LA DETERMINACIÓN DE LA DL50 “MÉTODO IN VITRO”

EMERSON BEZERRA FONTES SALUD AMBIENTAL

1. INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS EVALUACIÓN CUANTITATIVA: Determinación de la Relación Dosis-Efecto. El principal objetivo de este ensayo es evaluar el nivel de estimulo que es necesario para obtener una respuesta en un grupo de individuos de una población, bajo el estudio de la DL50 (Dosis Letal Media), importante parámetro con el fin de obtener respuesta en el 50% de los individuos utilizado, en este caso utilizaremos como individuos 10 lombrices. Consiste en introducir las10 lombrices en un cristalizador con 500 gramos de tierra contaminada, con un volumen conocido del plaguicida, con el fin de obtener la DL50. La ruta de exposición (vías de ingreso) es por ingestión, ya que las lombrices se alimentan de la tierra, y por absorción cutánea, al está en contacto directo con la tierra contaminada. El periodo de tiempo durante el cual se expone el estimulo estará especificado entre 2 y 3 días para cada ensayo, mediante una evaluación cuantitativa con el fin de comparar y estimar la potencia relativa del plaguicida según su toxicidad aguda, clasificado como Muy Tóxicos, Tóxicos o Nocivos.

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2. FUNDAMENTOS TEÓRICOS Toxicología es el estudio científico de estos elementos, su comportamiento, su metabolismo, sus mecanismos de acción, las lesiones que ellos ocasionan, su forma de acumulación, excreción y el tratamiento adecuado para proteger el organismo afectado. Plaguicidas son todas aquellas sustancias que intencionadamente se introducen en el ambiente para controlar o eliminar determinados organismos vivos considerados perjudiciales para los intereses del ser humano. Biocida es un producto químico que es tóxico para los organismos biológicos. Muy Tóxicos son aquellos que por inhalación, ingestión o penetración cutánea pueden entrañar riesgo graves, agudos o crónicos o incluso la muerte. Tóxicos son aquellos que por inhalación, ingestión o penetración cutánea pueden entrañar riesgo graves, agudos o crónicos o incluso la muerte. Nocivos son aquellos que por inhalación, ingestión o penetración cutánea pueden entrañar riesgos. Dosis Letal Media (DL50) es la cantidad de producto que hace falta para eliminar a la mitad de los componentes de una muestra. CLASIFICACIÓN DE TOXICIDAD MUY TÓXICO TÓXICO NOCIVO

VÍA DÉRMICA SÓLIDO (mg/Kg) < = 10 10 a 100 100 a1000

LÍQUIDO (ml) < = 50 50 a 400 400 a 4000

3. DESARROLLO DE LOS ENSAYOS Los ensayos serán realizados “in vitro”, en el laboratorio, y utilizaremos los siguientes materiales para cada ensayo: 500g de tierra, agua destilada, un cristalizador, una balanza, un vidrio de reloj, un vaso de precipitado, un agitador magnético, un imán, una espátula, una pipeta Pasteur, un matraz aforado (50ml) y un embudo. - Producto comercial utilizado:

⇒ ANTIPULGAS AMBIENTAL BIO – ALER (Insecticida – Acaricida)

Composición: 100% de PILOBORATO SÓDICO + info.: La DL50 oral en ratas es de 3.479 mg/Kg. ⇒ Es un polvo empleado en el ambiente doméstico que interrumpe el ciclo vital de la pulga. PROCEDIMIENTOS:

1. Hacemos un estudio previo de la efectividad del antipulgas leyendo las 2

recomendaciones de uso y establecemos una dosis inicial para nuestro Ensayo, que estipulamos 4 gramos de Antipulgas;

2. Pesamos los 4 gramos, vertemos en un vaso de precipitado y diluyamos con una

pequeña cantidad de agua destilada (tener en cuenta, para no cometer error, que en lo paso posterior enrasaremos hasta los 50 ml, así que ponemos poca agua para diluir);

3. Utilizamos un agitador magnético con un imán para diluir bien la disolución; 4. Una vez diluida, cojemos un matraz aforado de 50 ml, y con la ayuda de un

embudo vertemos la disolución, aforando con agua destilada hasta los 50 ml;

5. Pesamos en la balanza 500g de tierra utilizando un cristalizador; 6. 7. Vertemos 20 ml de la disolución en la tierra y mezclamos bien.

8. Cojemos las 10 lombrices para nuestro ensayo, pesamos en la balanza

(apuntamos este dato del su peso inicial en la ficha), y las introducimos en la tierra contaminada con el antipulgas.

⇒ Para el estudio toxicológico, en cada día que durar nuestro ensayo (2 a 3 días),

sacamos las lombrices de la tierra, hacemos el conteo, y utilizando un vidrio de reloj, pesamos en la balanza, para comprobar la variación del peso y se ha muerto alguna. ⇒ Apuntamos todos los datos en una ficha de registro.

⇒ Repetiremos estos procedimientos en todos los ensayos del estudio.

4. TABLA DE RESULTADOS

1º ENSAYO PESO INICIAL: 3,5 gr. DOSIS 457,1 g/Kg. PESO DE LOS VIVOS CANT. DE VIVOS CANT. DE MUERTOS

1º DÍA

2º DÍA

2,7 gramos

1,9 gramos

10 individuos

10 individuos

0 individuo

0 individuo

2º ENSAYO PESO INICIAL: 2,5 gr. DOSIS 880 g/Kg. PESO DE LOS VIVOS

1º DÍA

2º DÍA

2,0 gramos

1,0 gramos

3

CANT. DE VIVOS CANT. DE MUERTOS

10 individuos

6 individuos

0 individuo

4 individuos

3º ENSAYO PESO INICIAL: 3 gr. DOSIS 786,6 g/Kg. PESO DE LOS VIVOS CANT. DE VIVOS CANT. DE MUERTOS

1º DÍA

2º DÍA

1,6 gramos

0,3 gramos

10 individuos

2 individuos

0 individuo

8 individuos

4º ENSAYO PESO INICIAL: 3,4 gr. DOSIS 705,88 g/Kg. PESO DE LOS VIVOS CANT. DE VIVOS CANT. DE MUERTOS

1º DÍA

2º DÍA

2,0 gramos

0 gramos

10 individuos

0 individuo

0 individuo

10 individuos

5. CALCULOS PARA CONOCER LAS DOSIS

APLICADA EN CADA ENSAYO

➊ 4 g ----------- 50 ml  ----------- 20 ml  = 1,6 g

Peso inicial: 3,5 g ---- 3,5.10-3 Kg 1,6 g / 3,5.10-3 Kg ---- 457,1 g/Kg

➋ 5,5 g ----------- 50 ml ✘ ----------- 20 ml

✘  2,2 g 4

Peso inicial: 2,5 g ---- 2,5.10-3 Kg

2,2 g / 2,5.10-3 Kg ---- 880 g/Kg

➌ 5,9 g ----------- 50 ml ✘ ----------- 20 ml   2,36 g

Peso inicial: 3 g ---- 3.10-3 Kg 2,36 g / 3.10-3 Kg ---- 786,6 g/Kg

➍ 4 g ------------ 50 ml  ----------- 20 ml  = 2,4 g

Peso inicial: 3,4 g ---- 3,4.10-3 Kg 2,4 g / 3,4.10-3 Kg ---- 705,88 g/Kg

6. METODO DE ENSAYO DE ERROR DOSIS

MUERTOS

VIVOS

457,1 g/Kg 880 g/Kg 786,6 g/Kg 705,88 g/Kg

0 4 8 10

10 6 2 0

ACUMULADOS MUERTOS 0 4 12 22

ACUMULADOS VIVOS 18 8 2 0

A  DIFERENCIA ENTRE DOSIS.

B = MEDIA DE LOS MUERTOS ENTRE DOSIS. A B A-B Σ (A . B)

422,9 2 845,8

- 93,4 6 - 560,4 - 441,08

- 80,72 9 - 726,48

(A – B)

DL50 = D final – (--------------------) Nº de Individuos

5

- 441,08

DL50 = 705,88 – (------------) 10

DL50 = 749,98 g/Kg.

7. MÉTODO GRÁFICO

DL50 = [ 705,88 – 786,6 g/Kg.

8. CONCLUSIONES 6

Después de analizar los cuatros ensayos válidos, concluimos que la DL50 está en aproximadamente 749,98 g/Kg. Destacamos la pierda de peso que experimentaba las lombrices con el pasar de los días. Pero hay que destacar también que tuvimos una variación un tanto curiosa en los datos, lo mas normal es que cuanto mayor la ↑dosis, mayor es su efecto, pero no fue lo que ocurrió en algunos ensayos, en que hemos aumentado la dosis, y los resultados que tuvimos fue menos individuos muertos que la dosis anterior. Esto se debe por la variación de la biomasa de las lombrices, que nunca era la misma, como también podría ser otra razón la calidad y la longevidad de las lombrices que no teníamos conocimientos.

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