Cromatografia En Capa Fina (1).docx

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS IPN LABORATORIO DE BIOQUÍMICA.

juegan papeles cruciales como cofactores enzimáticos, transportadores electrónicos, pigmentos que absorben la luz, anclas hidrofóbicas para proteínas, hormonas y mensajeros intracelulares.

PROFESORA: Verónica Alcántara Farfán

Objetivos: PRÁCTICA: SEPARACIÒN DE FOSFOLÍPIDOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Y DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN LA YEMA DE HUEVO.

Introducción: Huevo de Gallina YODO MOLIBDATO NINHIDRINA BISMUTO LN 5.85 FE 3.8 3.8 FS 2.35 2.3 2.2 FB 3.55 FC 2.9 2.8 2.8 EM 1.7 1.7 1.8 LFC 1.2 1.2 1.2 FRENTE DEL SOLV. 6.5 6.5 6.4 6.5 Huevo de guajolote YODO MOLIBDATO NINHIDRINA BISMUTO LN 5.5 FE 4.2 4.2 FS 2.15 2.1 1.95 FB 3.9 FC 2.8 2.8 2.7 EM 1.65 1.65 1.65 LFC 1.25 1.25 1.2 FRENTE DEL SOLV. 6.5 6.5 6.4 6.5 Los lípidos biológicos constituyen un grupo químicamente diverso de compuestos cuya característica común es su insolubilidad en agua. Las funciones de los lípidos son igualmente diversas. En muchos organismos, las grasas y los aceites son las formas principales de almacenamiento energético, mientras que los fosfolípidos y los esteroles constituyen los principales elementos estructurales de las membranas biológicas. Otros lípidos, aun estando presentes en cantidades relativamente pequeñas,

-Aplicar la técnica de cromatografía en capa fina para la separación de fosfolípidos de la yema de huevo -Determinar la concentración de colesterol en la yema de huevo, por el método de LiebermanBurchard.

Resultados: . Rf Rf Rf Rf YODO MOLIBDATO NINHIDRINA BISMUTO 0.84 0.64 0.64 0.33 0.32 0.3 0.61 0.43 0.43 0.41 0.25 0.25 0.25 0.19 0.19 0.18

Rf Rf Rf Rf YODO MOLIBDATO NINHIDRINA BISMUTO 0.9 0.58 0.58 0.36 0.35 0.34 0.55 0.45 0.43 0.43 0.26 0.26 0.28 0.18 0.18 0.18

*Se anexa Curva Tipo Conclusiones: TUBO

ABSORBENCIA

B 1 2 3 4 5 Aceite Manteca Huevo blanco Huevo rojo

0.044 0.070 0.183 0.307 0.182 0.475 0.293 0.050 0.137

[COLESTEROL ] 0 20 40 60 80 100 78.55 13.40 36.73

0.202

54.15

Discusión: Utilizamos cloroformo-metanol, un solvente muy polar y muy no polar para obtener la mayor cantidad de fosfolípidos posibles. Se obtuvo un Rf similar en aquellas placas con identificadores diferentes, pero que teníamos los mismos fosfolípidos en las placas. Dependiendo del identificador, son los fosfolípidos que se revelaran en la placa. A Rf mayor, fosfolípido más no polar; a Rf menor, fosfolípido más polar Los lípidos neutros son los más NO polares. La lisofosfatidilcolina es el más polar de los fosfolípidos estudiados. Para el caso de colesterol: Los primeros tubos (1 a 5) se utilizaron para realizar la curva tipo que se utilizaría para el cálculo de colesterol en nuestros tubos problemas. De acuerdo con los resultados, existe una diferencia de 0.65 de contenido de colesterol entre los huevos problema, dando que el huevo rojo contiene una cantidad mayor a la del huevo blanco, sin embargo, los estudios sugieren que eso no es verdad dado que ambos son huevos de gallina y deberían tener lo mismo. De la misma forma, la manteca de cerdo en bibliografías consultadas contiene 95mg en 100g de colesterol en su composición, una gran diferencia a lo que obtuvimos experimentalmente. Esto arroja que la manteca estudiada podría no ser pura de cerdo (manteca diluida) ya que tiene una composición muy diferente a la real. En el caso del aceite, dependiendo del tipo de aceite se tiene una cantidad diferente de colesterol por lo que no podría decir si es correcto el dato, pero aproximadamente se obtuvo la cantidad correcta de colesterol.

●

Utilizamos cloroformo-metanol, un solvente muy polar y muy no polar para obtener la mayor cantidad de fosfolípidos posibles. ● Se obtuvo un Rf similar en aquellas placas con identificadores diferentes, pero que teníamos los mismos fosfolípidos en las placas. ● Dependiendo del identificador, son los fosfolípidos que se revelaran en la placa. ● A Rf mayor, fosfolípido más no polar; a Rf menor, fosfolípido más polar ● Los lípidos neutros son los más NO polares. La lisofosfatidilcolina es el más polar de los fosfolípidos estudiados. Para Colesterol: ● El solvente utilizado fue cloroformo, un solvente no polar debido al tipo de enlace en los lípidos utilizados. ● La reacción que se lleva a cabo al adicionar el Ácido Sulfúrico concentrado es muy inestable, por lo que se tuvo que leer la absorbencia en los tubos antes de los 20 min para que el producto leído fuera el correcto. ● Algunos resultados obtenidos no concordaron con bibliografías.

Bibliografía: H. Sengel, biochemical Calculation. Nueva york, 1968. Conn, E., Stumpf P.K., Bruening G. “Bioquimica IMAGEN 1 “CROMATOGRAFÍA Fundamental”. Ed. Limusa. México. DE FOSFOLÍPIDOS”