Cromatografia En Capa Fina

La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica muy potente no requiere de ningún tipo de equipamiento. La fase estacionaria esta constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la solución y evaporando el solvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace ascender por capilaridad. Se coloca la tira de papel verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene fase móvil en el fondo.

El uso del papel como medio de cromatografía se suele considerar como una típica partición de sistema, donde la fase estacionaria es el agua, en poder de adsorción de las moléculas de celulosa, que a su vez se mantienen en una posición fija por la estructura fibrosa del papel. Ahora es realidad, sin embargo, que la adsorción de los componentes de la fase móvil y de solutos, y los efectos de intercambio de iones, también desempeñan una parte, y que el rol del papel no de es simplemente decual, un soporte inerte. Técnica separación enlala los componentes de la muestra, se distribuyen entre dos fases de diferente naturaleza, como consecuencia de la variación de velocidad que se establece al ser arrastrados por una fase móvil, líquida o gaseosa, a través de una fase estacionaria, sólida o líquida.

La mayoría de la cromatografía de papel se ha llevado a cabo sobre papel de filtro estándar de material, sin embargo todavía hay disponibles una serie de papeles de cromatografía. • Pura celulosa. • Carga de gel de sílice. • De intercambio iónico la celulosa. • Cargados de resina. Estos se fabrican de papel a una alta especificación con porosidad controlada, espesor y característica esteras y son bajos en contenido de metal.

Diferenciación de clorofilas

Amplitud de ondas

La máxima altura (h) alcanzada por el disolvente en su avance, se denomina frente del disolvente, y sea dA la distancia recorrida por la sustancia A. Se define Rf como el cociente entre la distancia recorrida por una sustancia desde el origen (d) y la distancia del origen al frente del disolvente (h). Para la sustancia A:

RfA = dA/h

Clínicos y bioquímicos. separación de los aminoácidos y péptidos se llevó a cabo con regularidad para ayudar en la investigación de las estructuras de las proteínas. examen rutinario de orina y otros líquidos corporales de los aminoácidos y azúcares (esto es más importante, ya que pueden ser utilizados para el diagnóstico de una serie de patologías con el mapa de la técnica estándar). separación de las bases de purina y de los nucleótidos en el examen de los ácidos nucleicos. separación de los esteroides. Analítica general. Aplicaciones generales analíticamente incluye análisis de polímeros, detección y estimación de metales en sólidos y especímenes geológicos, investigación de materiales fenolicos en plantas extraídas, separación de alcaloides y separación de componentes radio isotópicos.

FUNDAMENTO: La separación de mezclas de moléculas mediante la cromatografía de capa fina se basa en el principio del reparto entre dos fases.  En general, una cromatografía se realiza permitiendo que la mezcla de moléculas que se desea separar (muestra) interaccione con un medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria. Un segundo medio  (la fase móvil) que es inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a través de ésta para "lavar"  (eluír) a las moléculas en la muestra. Debido a que las distintas moléculas en la muestra presentan diferente coeficiente de reparto, la fase móvil "lavará" a los distintos componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos que "prefieren disolverse" en la fase móvil serán eluídos más rápido que los que sean preferencialmente solubles en la fase estacionaria. PRINCIPIO DE REPARTO ENTRE DOS FASES:

Es especialmente útil cuando se quiere determinar el número de componentes de una mezcla o identificar los compuestos existentes en una mezcla. En la cromatografía de capa fina, un adsorbente está depositado formando una delgada capa sobre una placa de vidrio, papel de aluminio u otros materiales, por la que ascienden, arrastradas por un disolvente (eluyente), una o más sustancias que se pretenden separar o identificar. El disolvente asciende entonces por capilaridad a lo largo de la placa, arrastrando a los compuestos a diferentes velocidades, según el grado de adsorción de éstos produciéndose así su separación.

Eluyentes más comunes para ADSORBENTES MÁS COMUNES cromatografía en capa fina. PARA CROMATOGRAFÍA EN CAPA -éter de petróleo FINA. -tolueno a) Silica gel (se utiliza en el 80% de -dietil-éter, t-butil-éter las separaciones) -diclorometano b) Óxido de Aluminio ó Alúmina -acetato de etilo (ácida, neutra ó básica) -n-pentano, n-hexano c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina) -ciclohexano d) Poliamidas -tetracloruro de carbono -éter dietílico Para la selección del adsorbentes -cloroformo deber tomar las siguientes -acetona consideraciones: -iso-propanol a) Polaridad -etanol b) Tamaño de partícula -metanol a. Diámetro -ácido acético b. Área Superficial c) Homogeneidad d) Pureza

FACTORES QUE INFLUYEN EN UNA SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA. a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase estacionaria. b) La cromatografía debe llevarse a cabo en un área sin corrientes de aire. c) Limpieza de las placas. Muchas placas están contaminadas con grasa o agentes plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequeña escala, éstas deben limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y después dejar secar completamente antes de aplicar la muestra. d) Pureza de los disolventes.

La cromatografía en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros métodos cromatografíca (en columna, en papel, en fase gaseosa, ...) ya que el utillaje que precisa es más simple. El tiempo que se necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la separación es generalmente mejor. Pueden usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruirían el cromatograma. El método es simple y los resultados son fácilmente reproducibles, lo que hace que sea un método adecuado para fines analíticos.

La técnica cromatografíca con un enfoque al área clínica nos sirve para identificar bacterias mediante la comparación obtenida del Cromato grama obtenido con un patrón predispuesto, para identificar distintos tipos de: aminoácidos, proteínas, nucleótidos, hemoglobina, esteroides etc.

Identificación de Nucleótidos

Identificación de proteínas