Ccm
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- Words: 718
- Pages: 22
Chromatographie sur couche mince (CCM)
Chromatographie planaire.
Couche de phase stationnaire Plaque rigide (en verre, plastique ou aluminium)
φstationnaire
: solide ou liquide
φmobile : liquide
Principe • Migration de la φmobile à travers φstationnaire par capillarité → elle entraîne les molécules. • V migration d’une molécule dépend : - des forces la retenant à φstationnaire - de sa solubilité dans φmobile
1.Mode opératoire.
• L’échantillon : - Molécules dans un solvant. - [composés] faibles (2 à 5 %). - Solvant très peu polaire et très volatil → évite l’étalement des tâches lors du dépôt. • Activation de la plaque : 110 °C pendant 30 min → séchage
Dépôt de l’échantillon :
Couche de phase stationnaire
Capillaire contenant l’échantillon Ligne tracée au crayon à 1 cm du bord inférieur
Il faut faire plusieurs petits dépôts entrecoupés de séchages
Migration :
(- De 1 cm)
• Repérage du front de solvant, séchage, exploitation des résultats après révélation Front de solvant
A B Rf = B/A C Rf = C/A
Révélation des taches si nécessaire. Calculs des Rf.
Rf = distance de la tâche/ distance du front d solvant
• Révélation des plaques. - Vaporisation d’un réactif chimique → molécules transformées en substances colorées. Exemple : Ninhydrine pour acides aminés, Vapeur d’iode. Acide concentré suivi d’un chauffage Solution oxydante. - Observation sous UV si molécules fluorescentes. - φstationnaire avec sels de zinc fluorescents. → Observation avec lampe à vapeur de mercure => molécules = tâches sombres sur fond brillant
2. Les phases.
2.1 Stationnaire. • Petits grains fixés à la plaque à l’aide d’un liant comme : - Sulfate de calcium hydraté, - Amidon - Polymère organique. • Epaisseur : dépend de l’application souhaitée. • Choix de φstationnaire : dépend de la polarité des composés à séparer.
• Gel de silice : très polaire et hydrophile → séparation de substance acides ou neutres. OH
O HO Si O
Si
O
O
Si O
O Si
Si
OH O Si
O
O
HO O
Principes physique responsable de la séparation = adsorption.
Greffage de groupements sur les fonctions silanols → grande variété de polarité Si chaînes porteuses de fonctions polaires comme NH2 ou CN, diminution de la polarité. Si chaîne alkyls → phase apolaire CH3
NH2
H3C H3C H3C H3C
Si
H3C
Si
CH3
Si
H3C
Si
CH3
O
O Si
O
O
NH2
O
Si
O
O Si
OH
Si
O Si
O
H3C
Si
CH3
CH3
O
Si
O
Si O
O Si
Si
OH O Si
O
HO O
O Si
O
Si O
O
O
O
O
HO O
H3C
Si
CH3
H3C H2N
Le principe physique responsable de la séparation est le partage.
• Alumine Al2O3 pour composés basiques.
• Kieselguhr : très polaire. Séparation des sucres et des aa.
2.2 Mobile. •
Solvant pur.
• Mélange de solvants totalement miscibles. Proportions très précises => reproductibilité. • Souvent de nature organique peu hydraté. Sauf pour CCM en phase inverse où l’eau est très abondante. • Doit solubiliser les composés à séparer → entraînement lors de sa migration sur la plaque.
• Polarité : dépend de celles des molécules à séparer → Affinité avec elles.
Classement de quelques solvants et familles de molécules par polarité Cyclohexane Tétrachlorure de carbone Benzène Dichlorométhane Chloroforme Acétate d'éthyle Acétone Ethanol Eau Acide acétique
Alcanes Apolaire Dérivés halogénés Moyennement polaire Polaire
Cétones, aldéhydes, éthers et esters Amines Alcools Phénols Acides carboxyliques
• Le mélange de solvant permet d’affiner la polarité de la phase mobile et la faire correspondre au plus près à celle des composés à séparer.
Evolution des Rf suivant la phase stationnaire et l’éluant utilisé
4. Applications.
4.1 Préparative. • Pour extraire des quantités importantes d’une molécule contenue dans un mélange. • Dépôt en ligne, sur une plaque épaisse (de 1 à 2,5 mm). • Récupération : grattage ou découpage des bandes, puis dissolution dans un solvant adapté.
4.2 Mise en évidence de la présence d’un composé.
Présence de deux autres composés Présence du composé B
Standar ds
Mélange à analyser A
B
4.3 Suivi de réaction en chimie organique. Standard correspond ant au produit de la réaction
Réacti fs
Les réactifs disparaissen t progressive ment
Le produit apparaît Analyse à t = 0
En cours de réaction
Impureté
Produit de la réaction En fin de réaction
Chromatographie planaire.
Couche de phase stationnaire Plaque rigide (en verre, plastique ou aluminium)
φstationnaire
: solide ou liquide
φmobile : liquide
Principe • Migration de la φmobile à travers φstationnaire par capillarité → elle entraîne les molécules. • V migration d’une molécule dépend : - des forces la retenant à φstationnaire - de sa solubilité dans φmobile
1.Mode opératoire.
• L’échantillon : - Molécules dans un solvant. - [composés] faibles (2 à 5 %). - Solvant très peu polaire et très volatil → évite l’étalement des tâches lors du dépôt. • Activation de la plaque : 110 °C pendant 30 min → séchage
Dépôt de l’échantillon :
Couche de phase stationnaire
Capillaire contenant l’échantillon Ligne tracée au crayon à 1 cm du bord inférieur
Il faut faire plusieurs petits dépôts entrecoupés de séchages
Migration :
(- De 1 cm)
• Repérage du front de solvant, séchage, exploitation des résultats après révélation Front de solvant
A B Rf = B/A C Rf = C/A
Révélation des taches si nécessaire. Calculs des Rf.
Rf = distance de la tâche/ distance du front d solvant
• Révélation des plaques. - Vaporisation d’un réactif chimique → molécules transformées en substances colorées. Exemple : Ninhydrine pour acides aminés, Vapeur d’iode. Acide concentré suivi d’un chauffage Solution oxydante. - Observation sous UV si molécules fluorescentes. - φstationnaire avec sels de zinc fluorescents. → Observation avec lampe à vapeur de mercure => molécules = tâches sombres sur fond brillant
2. Les phases.
2.1 Stationnaire. • Petits grains fixés à la plaque à l’aide d’un liant comme : - Sulfate de calcium hydraté, - Amidon - Polymère organique. • Epaisseur : dépend de l’application souhaitée. • Choix de φstationnaire : dépend de la polarité des composés à séparer.
• Gel de silice : très polaire et hydrophile → séparation de substance acides ou neutres. OH
O HO Si O
Si
O
O
Si O
O Si
Si
OH O Si
O
O
HO O
Principes physique responsable de la séparation = adsorption.
Greffage de groupements sur les fonctions silanols → grande variété de polarité Si chaînes porteuses de fonctions polaires comme NH2 ou CN, diminution de la polarité. Si chaîne alkyls → phase apolaire CH3
NH2
H3C H3C H3C H3C
Si
H3C
Si
CH3
Si
H3C
Si
CH3
O
O Si
O
O
NH2
O
Si
O
O Si
OH
Si
O Si
O
H3C
Si
CH3
CH3
O
Si
O
Si O
O Si
Si
OH O Si
O
HO O
O Si
O
Si O
O
O
O
O
HO O
H3C
Si
CH3
H3C H2N
Le principe physique responsable de la séparation est le partage.
• Alumine Al2O3 pour composés basiques.
• Kieselguhr : très polaire. Séparation des sucres et des aa.
2.2 Mobile. •
Solvant pur.
• Mélange de solvants totalement miscibles. Proportions très précises => reproductibilité. • Souvent de nature organique peu hydraté. Sauf pour CCM en phase inverse où l’eau est très abondante. • Doit solubiliser les composés à séparer → entraînement lors de sa migration sur la plaque.
• Polarité : dépend de celles des molécules à séparer → Affinité avec elles.
Classement de quelques solvants et familles de molécules par polarité Cyclohexane Tétrachlorure de carbone Benzène Dichlorométhane Chloroforme Acétate d'éthyle Acétone Ethanol Eau Acide acétique
Alcanes Apolaire Dérivés halogénés Moyennement polaire Polaire
Cétones, aldéhydes, éthers et esters Amines Alcools Phénols Acides carboxyliques
• Le mélange de solvant permet d’affiner la polarité de la phase mobile et la faire correspondre au plus près à celle des composés à séparer.
Evolution des Rf suivant la phase stationnaire et l’éluant utilisé
4. Applications.
4.1 Préparative. • Pour extraire des quantités importantes d’une molécule contenue dans un mélange. • Dépôt en ligne, sur une plaque épaisse (de 1 à 2,5 mm). • Récupération : grattage ou découpage des bandes, puis dissolution dans un solvant adapté.
4.2 Mise en évidence de la présence d’un composé.
Présence de deux autres composés Présence du composé B
Standar ds
Mélange à analyser A
B
4.3 Suivi de réaction en chimie organique. Standard correspond ant au produit de la réaction
Réacti fs
Les réactifs disparaissen t progressive ment
Le produit apparaît Analyse à t = 0
En cours de réaction
Impureté
Produit de la réaction En fin de réaction
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