Antibakteri Tbc

Studi Sinergis pada Ekstrak n-Hexane Daun Anredera cordifolia (Ten.) V Steenis (binahong) yang Dikombinasikan dengan Obat Antituberkulosis terhadap Obat-Sensitif dan Tahan Obat dari Mycobacterium tuberculosis. Abstrak Tujuan: Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi aktivitas antimycobacterial ekstrak daun Anredera cordifolia (Sepuluh) Steenis (binahong) ketika dikombinasikan dengan obat antituberkulosis terhadap obat yang sensitif dan kebal obat Mycobacterium tuberculosis (MTB). Bahan dan Metode: Strain peka H37Rv, strain resisten streptomycinrifampicin (SR), dan strain resisten isoniazid-etambutol (HE) dievaluasi dengan uji kepekaan dengan menggunakan nomor seri tiga ekstrak binahong yang berbeda dengan kisaran konsentrasi 50 μg / mL-1000 μg / mL. Minimum Inhibition Concentration (MIC) dibaca sebagai konsentrasi minimum ekstrak yang benar-benar menghambat pertumbuhan organisme yang terlihat. Studi sinergis ekstrak dengan obat anti-tuberkulosis (TB) ditentukan dengan uji kepekaan di media Lowenstein Jensen (LJ) dengan menghitung Fractional Inhibitory Concentration Index (FICI). Hasil: Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak nheksana daun binahong memiliki aktivitas antimikobakteri yang lebih baik dibandingkan dengan ekstrak lain dengan MIC adalah 500 μg / mL terhadap galur H37Rv atau galur SR dari MTB dan 250 μg / mL terhadap galur HE. Kombinasi ekstrak n-heksana dan obat anti-TB juga menunjukkan interaksi sinergis dan tidak ada hasil antagonisme dari kombinasi yang diamati. Kesimpulan: Hasil ini menunjukkan bahwa ekstrak n-heksana daun binahong dapat berfungsi sebagai template untuk pengembangan senyawa antimikobakteri baru. PENDAHULUAN TB adalah penyebab kematian paling umum kedua di dunia oleh penyakit menular (Ducati et al., 2006). Diperkirakan sepertiga populasi dunia terinfeksi oleh MTB dan 10% dari orang-orang ini akan menjadi pasien aktif selama masa hidup mereka (Bishai et al., 2010). Situasi semakin buruk dari hari ke hari karena munculnya jenis TB MultidrugResistant (MDR) dan hubungannya dengan Human Immunodeficiency Virus (HIV) atau Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) menjadikan pengendaliannya lebih sulit. Pada tahun 2016, 4800.000 orang yang memiliki TB-MDR meningkat di dunia dan 1,9% dari kasus TB dengan TB-MDR di Indonesia (WHO, 2016). Jadi, ada kebutuhan mendesak untuk ditemukan agen anti-TB baru yang efektif dalam pengobatan TB, tidak hanya sebagai obat sintetis baru tetapi juga produk alami dari tanaman obat sumber potensial agen antimycobacterial baru. Anredera cordifolia (Ten.) V Steenis adalah tanaman obat yang berasal dari Cina yang dikenal sebagai Dhen San Chi atau anggur Madeira di Afrika Selatan. Di Indonesia, tanaman ini dikenal sebagai binahong. Ini secara tradisional digunakan untuk mengobati berbagai penyakit, seperti hipertensi, asam urat, dan penyakit kulit. Binahong terbukti memiliki sifat anti-inflamasi sebagai hematoma (Sumartiningsih, 2011) hepatoprotektif (Lin et al., 1994), pelemas pada mukosa lambung, anti-obesitas, dan hipolipidemia (Lin et al., 1997). Jus daun Binahong juga dilaporkan memiliki aktivitas antimikroba pada Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan kontrol positif oxytetracycline (Darsana et al., 2012).

Dilaporkan bahwa kandungan kimiawi daun binahong adalah Asam Ursolat (UA), Asam Oleanolik (OA), dan Apigenin. UA dan OA memiliki struktur triterpenoid pentasiklik yang dimiliki kelarutan rendah dalam air dan lipofilisitas tinggi (Codruta et al., 2014). Penelitian yang dilakukan oleh Gracia et al. (2015) menunjukkan bahwa OA menyebabkan penurunan pertumbuhan dan perkembangan MTB dalam makrofag, merangsang produksi oksida nitrat pada fase awal, dan menekan TGF-α dan TGF-β. Selain itu, ekstrak diklorometana daun Duroia macrophylla yang mengandung UA dan OA menunjukkan pengurangan aktivitas yang signifikan pada tikus yang diinduksi oleh strain sensitif MTB H37Rv dan strain MDR (Daiane et al., 2013; Gayatri et al. 2010). Sebuah studi pendahuluan yang dilakukan dalam tiga ekstrak daun binahong yang berbeda (ekstrak n-heksana, ekstrak etil asetat, dan ekstrak etanol) menunjukkan bahwa ekstrak n-heksana memiliki aktivitas antiTB yang lebih baik dibandingkan ekstrak lain dari daun binahong. Sementara itu, interaksi sinergis obat anti-TB kombinasi ekstrak n-heksana masih belum jelas. Penelitian ini menyelidiki aktivitas antimikobakteri in vitro dari tiga ekstrak daun binahong yang berbeda terhadap tiga galur MTB (galur sensitif H37Rv, galur tahan SR, dan galur tahan HE) ketika digunakan sebagai individu dan kombinasi dengan obat antituberkulosis lini pertama. Nilai MIC dan FICI digunakan untuk menilai aktivitas sinergis ekstrak n-heksana daun binahong. MATERIAL DAN METODE Bahan tanaman Sampel daun Binahong dikumpulkan dari Manoko, Lembang, Jawa Barat. Pengambilan sampel dilakukan dari Februari hingga Maret 2016. Itu dianalisis di Herbarium Bandungense, Sekolah Ilmu dan Teknologi Kehidupan, Institut Teknologi Bandung. Sampel dikeringkan di tempat teduh selama 10 hari. Daun Binahong kering diekstraksi menggunakan n-heksana, etil asetat, dan etanol (1: 7) tiga kali berulang kali menggunakan metode refluks. Pelarut diuapkan menggunakan rotary evaporator. Baik bahan mentah dan ekstrak menjadi sasaran investigasi fitokimia. Skrining kualitatif termasuk alkaloid, flavonoid, saponin, kuinon, tanin, steroid / triterpenoid, dan monoterpenoid / seskuiterpenoid. Mikroorganisme Aktivitas antimikobakteri dievaluasi menggunakan strain sensitif MTB H37Rv, strain resisten SR, dan strain resisten HE. Semua strain bakteri disediakan dari Laboratorium Pembangunan Kesehatan, Provinsi Jawa Barat. Strain bakteri dipertahankan oleh subkultur pada Ogawa 3% selama 3 minggu pada suhu 37oC untuk pertumbuhan yang menguntungkan. Reagen dan antibiotik Antibiotik Rifampicin (RMP), Isoniazid (INH), Streptomycin (STR), dan Ethambutol (EMB) dibeli dari Sigma Aldrich untuk studi kombinasi dan kontrol obat. INH, STR, dan EMB disiapkan dalam air deionisasi dan RMP disiapkan dalam Dimethylformamide (Merck). Dimethyl sulfoxide (DMSO) (Merck) digunakan sebagai pelarut untuk ekstrak dengan konsentrasi 0,5% v / v (De Logu et al., 2000). Aktivitas antimikobakterial in vitro Aktivitas antimikobakteri ekstrak n-heksana, ekstrak etil asetat, dan ekstrak etanol daun binahong terhadap tiga jenis MTB diuji dengan uji kerentanan menggunakan metode proporsi dalam media LJ. Inokulum disesuaikan menjadi 3 × 106 CFU / mL dibandingkan dengan Mc. Farland no.1 standar kekeruhan dan 100 μl suspensi bakteri yang mengandung sekitar 3 × 105 CFU / mL terlihat ke media LJ dalam tabung Mc Cartney. Kultivasi dilakukan pada suhu

37oC selama 8 minggu dan MIC dibaca sebagai konsentrasi minimum ekstrak yang benarbenar menghambat pertumbuhan organisme yang terlihat. Kombinasi obat-obatan Ekstrak dengan aktivitas terbaik untuk menghambat pertumbuhan MTB dikombinasikan dengan obat anti-TB (STR, RMP, INH, atau EMB) dan ditentukan seperti yang dijelaskan dalam penentuan MIC. Jelas, 0,125, 0,25, dan 0,5 ekstrak MIC dan obat anti-TB digabungkan dan diuji dalam media Lowenstein-Jensen (LJ) dengan menggunakan uji kepekaan. Interpretasi data dicapai dengan menghitung FICI seperti yang dijelaskan oleh De Logu et al. (2000): FICI = (kombinasi MICA) / (MICA saja) + (kombinasi MICB) / (MICB saja) Hasil interpretasi data FICI adalah sebagai berikut: FICI <0,5, sinergi; FICI 0,5-4, tidak ada interaksi; FICI> 4.0; antagonisme. HASIL DAN DISKUSI Banyak sumber daya alam digunakan secara empiris dan telah diteliti untuk menganalisis agen alternatif untuk mengobati banyak penyakit. Mereka mungkin mengandung senyawa aktif yang dapat menyelidiki pengembangan obat lebih lanjut (Gangwar et al., 2010). Daun binahong dikumpulkan dari satu daerah untuk meminimalkan variasi metabolit karena lokasinya. Ada beberapa faktor yang mempengaruhi metabolit yang terkandung dalam tanaman seperti lokasi, ketinggian, perubahan iklim, dan suhu. Konsentrasi metabolit, khususnya metabolit sekunder, tampaknya berkontribusi terhadap efek farmakologis (Gairola et al., 2010). Penapisan fitokimia Tujuan skrining fitokimia adalah untuk mengidentifikasi metabolit sekunder atau senyawa fitokimia yang ditemukan pada tanaman. Beberapa metabolit sekunder yang dapat diturunkan dari tumbuhan adalah alkaloid, flavonoid, saponin, polifenol, tanin, dan terpenoid. Penapisan fitokimia menunjukkan daun kering binahong mengandung alkaloid, terpenoid, kuinolon, saponin, dan polifenol. Hasil skrining fitokimia pada daun mentah dan ekstrak daun binahong disajikan pada Tabel 1. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa triterpenoid pentasiklik bertanggung jawab atas aktivitas antimikobakteri. Lipofilisitas tinggi dari triterpenoid pentasiklik mungkin merupakan faktor utama yang memungkinkan penetrasi mereka melalui dinding sel mikobakteri (Ge et al., 2010; Joseph et al., 2010). Tiga ekstrak daun binahong yang berbeda disaring untuk aktivitas antimikobakteri dengan menggunakan uji kepekaan pada MTB yang peka terhadap obat dan kebal obat. Penghambatan pertumbuhan dan nilai-nilai MIC dari semua ekstrak dalam berbagai jenis MTB ditunjukkan pada Gambar 1. Menurut data itu, dapat ditunjukkan bahwa ekstrak nheksana daun binahong dapat sepenuhnya menghambat pertumbuhan MTB pada konsentrasi 250 -500 ug / mL. Ekstrak N-heksana

Pengujian kombinasi Hingga kini, pengobatan untuk TB membutuhkan tiga hingga lima obat yang berbeda secara bersamaan, tergantung pada kategori pasien. Formulasi kombinasi dosis tetap (FDC) saat ini

direkomendasikan untuk pengobatan TB aktif, Total periode pengobatan adalah 6 bulan. Pasien pertama menerima obat anti-TB primer termasuk kombinasi 3 atau 4 obat (INH, RMP, EMB, atau pirazinamid (PZA)) selama fase awal 2 bulan, diikuti oleh fase lanjutan 4 bulan yang terdiri dari INH dan RMP (Gulbay et al., 2006). Setiap obat anti-TB memiliki peran utama dalam pembunuhan MTB. INH dan RMP adalah dua obat utama yang digunakan dalam pengobatan TB. INH adalah prodrug dan harus diaktifkan oleh enzim katalase-peroksidase KatG. Aktivasi INH akan menghambat pembentukan asam mikolik dari dinding sel bakteri yang menyebabkan kematian bacillus (Zhang, 2005). RMP mengganggu transkripsi oleh RNA polimerase yang tergantung-DNA. RMP akan mengikat transkripsi penghambat subunit-β dan membunuh organisme (Herrera et al., 2003). EMB adalah obat lini pertama yang digunakan kombinasi INH dan RMP. EMB adalah bakteriostatik yang mengganggu biosintesis dinding sel arabinogalactan (Takayama et al., 1989). STR adalah aminoglikosida yang membunuh basil tuberkulum yang aktif tumbuh. STR menghambat sintesis protein dengan mengikat subunit 30S dari ribosom bakteri, menyebabkan salah membaca protein ribosom (Davies et al., 1965). MICs untuk obat anti-TB yang digunakan dalam studi kombinasi ini adalah STR 4 μg / mL, INH 0,2 μg / mL, RMP 40 μg / mL, dan EMB 2 μg / mL. Kombinasi ekstrak dan obat lini pertama mayoritas anti-TB menunjukkan penghambatan pertumbuhan MTB baik strain sensitif maupun resisten MTB. Tidak ada interaksi yang ditemukan ketika ekstrak dikombinasikan dengan RMP dibandingkan dengan strain RS tetapi efek sinergis ditunjukkan ketika ekstrak dikombinasikan dengan STR, INH, EMB, atau semua obat lini pertama dibandingkan dengan strain RS. Tidak ada interaksi Hasilnya ditemukan ketika ekstrak dikombinasikan dengan EMB dibandingkan dengan strain HE, tetapi interaksi sinergis juga ditunjukkan sebagai hasil dari ekstrak gabungan dengan STR, INH, RMP, dan semua obat lini pertama. Semua kombinasi menunjukkan efek sinergis ketika mereka digunakan dalam strain sensitif H37Rv. MICs dari ekstrak n-hexane menurun secara signifikan dibandingkan dengan ekstrak nhexane ketika strain menurun secara signifikan, berkisar antara 62,5-250 μg / mL, dan juga MICs dari obat anti-TB masing-masing. Nilai-nilai FICI ditunjukkan mulai dari 0,25-0,5 dan beberapa kombinasi ditemukan memiliki nilai-nilai FICI sebagai 1. Secara nyata, tidak ada antagonisme yang dihasilkan dari kombinasi ekstrak dengan obat anti-TB yang diamati untuk semua strain yang diuji. Hasil kombinasi yang diuji ditunjukkan pada Tabel 2. Table 2 Aktivitas tertinggi ekstrak n-heksana dari daun binahong dalam penelitian ini dapat dikaitkan dengan adanya UA dan OA sebagai triterpen pentasiklik. Kedua senyawa ini tersebar luas di dunia tumbuhan dan diketahui memiliki spektrum aktivitas yang luas. Lipofilisitas tinggi dari triterpen mungkin merupakan faktor utama yang memungkinkan penetrasi mereka melalui dinding sel mikobakteri (Wachter et al., 1999). Hal ini menunjukkan bahwa triterpen UA dan OA relatif tidak beracun. Mekanisme aksi antimikroba dari UA dan OA telah diselidiki dan digunakan sebagai dasar pada penghambatan DNA polimerase (Joseph dan Priya, 2010). Asam dari UA mempengaruhi morfologi sel dan meningkatkan autolisis sel bakteri. UA juga dapat menghambat pergantian peptidoglikan dan dapat mempengaruhi profil muropeptida setelah pencernaan peptidoglikan dengan mutanolysin (Kurek et al., 2010). Data literatur juga

melaporkan bahwa OA memiliki efek sinergis ketika dikombinasikan dengan INH, RMP, atau EMB (Deng et al., 2008). KESIMPULAN Mengenai hasil aktivitas antimikobakteri, ekstrak n-heksana daun binahong memiliki aktivitas terbaik dibandingkan dengan ekstrak binahong lainnya. Padahal, telah dilaporkan bahwa UA dan OA yang ditemukan dalam ekstrak dan dikonfirmasi dengan skrining fitokimia bahwa ekstrak tersebut mengandung triterpenoid pentasiklik. Oleh karena itu, kami menyimpulkan bahwa senyawa ini dapat memainkan peran penting dalam aktivitas antimikobakteri ekstrak n-heksana daun binahong. Ini adalah hasil awal tetapi cukup menarik untuk studi lebih lanjut dari ekstrak n-heksana daun binahong sebagai templat pengembangan antituberkuler.