Ant Eras
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Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria
Estación Experimental Agropecuaria Bordenave
CULTIVO DE ANTERAS EN VARIEDADES DE CEBADA CERVECERA Giménez, F J 1; Salaberry, M T 2 ; Babinec, F 3; Franzone, P 4; Rodríguez, R H 5 y Tomaso, J C 1. 1EEA INTA Bordenave. 2Facultad Ciencias Agrarias, UNMdP. 3EEA INTA Anguil . 4Instituto de Genética EA Favret, INTA Castelar. 5EEA INTA Balcarce. [email protected]
INTRODUCCIÓN El mejoramiento genético del cultivo de cebada cervecera se basa en el cruzamiento, generalmente, entre líneas puras. Luego se realizan varias generaciones de autofecundación, para estabilizar los genotipos, y obtener así nuevas líneas puras. La disponibilidad de una técnica que reduzca el número de generaciones para obtener líneas puras permitiría lograr una mayor eficiencia en un programa de mejoramiento genético. La técnica del cultivo in vitro de las anteras para obtener haploides duplicados cumple con este requisito, dado que se logra producir una planta homocigótica en una generación con el consiguiente ahorro de tiempo en el ciclo del desarrollo de cultivares. La misma consiste en cultivar las anteras en un medio que induce la formación de callos a partir de los granos de polen en desarrollo y luego, a partir de éstos, regenerar plantas haploides. Esta técnica esta influenciada con el genotipo (Powell, 1988). OBJETIVOS - Evaluar la respuesta a la androgénesis mediante el cultivo de anteras de seis cultivares de cebada cervecera que se siembran en la Argentina. - Evaluar el efecto de dos tratamientos de las anteras, previos al cultivo in vitro, sobre la expresión de la habilidad androgenética. MATERIALES Y METODOS Se evaluaron los cultivares argentinos: Quilmes Alfa, Quilmes Painé, Quilmes Palomar y Carla INTA–MP y las introducciones B1215 y Scarlett por la producción de callos, plantas verdes y plantas albinas. Las plantas fueron cultivadas con temperatura, luz y fotoperiodo controlados y las anteras fueron extraidas cuando la mayor parte de las microsporas se encontraba en la mitad de la etapa uninucleada. Se evaluaron dos pretratamientos de las anteras en todos los genotipos analizados, el denominado ¨de frío¨ y el ¨de manitol¨. Cada una de las espigas destinadas al pretratamiento ¨de frío¨, se colocaron a 4°C durante 28 días (Huang y Sunderland, 1982). A las espigas destinadas al pretratamiento ¨de manitol¨, se les extrajo las anteras y se colocaron en un medio de cultivo con manitol 0,7 M, solidificado con Gelrite al 0,2%, durante 4 días a 25°C (Cistué et al., 1994). Finalizados los períodos de los pretratamientos de las anteras, éstas se cultivaron en cajas de Petri, con el fin de inducir callos. Como medio de inducción, se utilizó el propuesto por Murashige y Skoog (1962), con modificaciones. Las cajas de Petri con las anteras fueron incubadas a 25ºC, y en oscuridad, en una cámara de germinación durante 30 días. Una vez obtenidos los callos, se repicaron aquéllos que tenían un diámetro mayor a 2 mm en cajas de Petri de 9 cm de diámetro sobre un medio de diferenciación de tejidos. |Intranet|
© Copyright 2005. - INTA EEA. Bordenave CC Nro. 44 - 8187 Bordenave . Buenos Aires, Argentina
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria
Estación Experimental Agropecuaria Bordenave
Se empleó un diseño completamente aleatorizado con arreglo factorial, el cual se hicieron entre 10 y 14 repeticiones, utilizándose las 8 mejores. RESULTADOS Y DISCUSION La eficiencia promedio de la producción de plantas verdes fue de 1,6 cada 100 anteras cultivadas. El pretratamiento “de frío” es más eficiente que el “de manitol” para obtener plantas por el cultivo de anteras. Los cultivares que tuvieron las mayores eficiencias fueron Quilmes Palomar (3,1), Scarlett (2,7) y Carla INTA (2,1). La mayor respuesta en la regeneración de plantas verdes, 5%, se alcanzó al cultivar las anteras de Quilmes Palomar con el pretratamiento “de frío”. Quilmes Painé fue el único cultivar que no regeneró plantas verdes (Tabla 1). El pretratamiento ¨de frío¨ produjo aproximadamente cuatro veces más plantas verdes (37) que el ¨de manitol¨ (9). Además de producir un mayor número de callos, el pretratamiento ¨de frío¨ produjo callos de mejor comportamiento en la regeneración de plantas . Esto se vio reflejado en el número de plantas verdes obtenidas cada 100 callos. Se obtuvo 8,96% con el pretratamiento ¨de frío¨ y 4,21% con el ¨de manitol¨. Se determinó que existe variabilidad genética en la habilidad androgenética de los seis cultivares que se evaluaron, mediante esta técnica, ya que se detectaron diferencias genéticas en la eficiencia de regeneración de plantas verdes. Además, se encontraron diferencias genéticas en la eficiencia de producción de callos y de plantas totales. En los cultivares que se evaluaron, el número de plantas totales y el de plantas verdes regeneradas están relacionados de una forma estrecha con el número de callos producidos. Tabla 1: Número de callos, plantas totales, plantas verdes y plantas albinas producidos cada 100 anteras cultivadas
PRETRATAMIENTOS GENOTIPOS FRIO CA% PT% PV% PA% QUILMES PALOMAR 54,2 25,4 5,0 20,4 SCARLETT 37,9 17,1 4,2 12,9 CARLA INTA 40,4 19,2 3,8 15,4 B1215 21,3 8,8 1,3 7,5 QUILMES ALFA 18,3 6,3 1,3 5,0 QUILMES PAINE 5,0 2,1 0 2,1 PROMEDIO 29,5 13,2 2,6 10,6
MANITOL CA% PT% 21,7 7,5 22,1 11,7 20,0 8,8 14,6 4,6 10,8 3,3 12,5 1,7 17,0 6,3
PROMEDIO PV% 1,3 1,3 0,4 0,4 0,4 0 0,6
PA% 6,3 10,4 8,3 4,2 2,9 1,7 5,6
CA% 37,9 30,0 30,2 17,9 14,6 8,8 23,2
PT% 16,5 14,4 14,0 6,7 4,8 1,9 9,7
PV% 3,1 2,7 2,1 0,8 0,8 0 1,6
PA% 13,3 11,7 11,9 5,8 4,0 1,9 8,1
CA: Callos; PT: Plantas; PV: Plantas verdes; PA: Plantas albinas
|Intranet|
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CULTIVO DE ANTERAS EN VARIEDADES DE CEBADA CERVECERA Giménez, F J 1; Salaberry, M T 2 ; Babinec, F 3; Franzone, P 4; Rodríguez, R H 5 y Tomaso, J C 1. 1EEA INTA Bordenave. 2Facultad Ciencias Agrarias, UNMdP. 3EEA INTA Anguil . 4Instituto de Genética EA Favret, INTA Castelar. 5EEA INTA Balcarce. [email protected]
INTRODUCCIÓN El mejoramiento genético del cultivo de cebada cervecera se basa en el cruzamiento, generalmente, entre líneas puras. Luego se realizan varias generaciones de autofecundación, para estabilizar los genotipos, y obtener así nuevas líneas puras. La disponibilidad de una técnica que reduzca el número de generaciones para obtener líneas puras permitiría lograr una mayor eficiencia en un programa de mejoramiento genético. La técnica del cultivo in vitro de las anteras para obtener haploides duplicados cumple con este requisito, dado que se logra producir una planta homocigótica en una generación con el consiguiente ahorro de tiempo en el ciclo del desarrollo de cultivares. La misma consiste en cultivar las anteras en un medio que induce la formación de callos a partir de los granos de polen en desarrollo y luego, a partir de éstos, regenerar plantas haploides. Esta técnica esta influenciada con el genotipo (Powell, 1988). OBJETIVOS - Evaluar la respuesta a la androgénesis mediante el cultivo de anteras de seis cultivares de cebada cervecera que se siembran en la Argentina. - Evaluar el efecto de dos tratamientos de las anteras, previos al cultivo in vitro, sobre la expresión de la habilidad androgenética. MATERIALES Y METODOS Se evaluaron los cultivares argentinos: Quilmes Alfa, Quilmes Painé, Quilmes Palomar y Carla INTA–MP y las introducciones B1215 y Scarlett por la producción de callos, plantas verdes y plantas albinas. Las plantas fueron cultivadas con temperatura, luz y fotoperiodo controlados y las anteras fueron extraidas cuando la mayor parte de las microsporas se encontraba en la mitad de la etapa uninucleada. Se evaluaron dos pretratamientos de las anteras en todos los genotipos analizados, el denominado ¨de frío¨ y el ¨de manitol¨. Cada una de las espigas destinadas al pretratamiento ¨de frío¨, se colocaron a 4°C durante 28 días (Huang y Sunderland, 1982). A las espigas destinadas al pretratamiento ¨de manitol¨, se les extrajo las anteras y se colocaron en un medio de cultivo con manitol 0,7 M, solidificado con Gelrite al 0,2%, durante 4 días a 25°C (Cistué et al., 1994). Finalizados los períodos de los pretratamientos de las anteras, éstas se cultivaron en cajas de Petri, con el fin de inducir callos. Como medio de inducción, se utilizó el propuesto por Murashige y Skoog (1962), con modificaciones. Las cajas de Petri con las anteras fueron incubadas a 25ºC, y en oscuridad, en una cámara de germinación durante 30 días. Una vez obtenidos los callos, se repicaron aquéllos que tenían un diámetro mayor a 2 mm en cajas de Petri de 9 cm de diámetro sobre un medio de diferenciación de tejidos. |Intranet|
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Se empleó un diseño completamente aleatorizado con arreglo factorial, el cual se hicieron entre 10 y 14 repeticiones, utilizándose las 8 mejores. RESULTADOS Y DISCUSION La eficiencia promedio de la producción de plantas verdes fue de 1,6 cada 100 anteras cultivadas. El pretratamiento “de frío” es más eficiente que el “de manitol” para obtener plantas por el cultivo de anteras. Los cultivares que tuvieron las mayores eficiencias fueron Quilmes Palomar (3,1), Scarlett (2,7) y Carla INTA (2,1). La mayor respuesta en la regeneración de plantas verdes, 5%, se alcanzó al cultivar las anteras de Quilmes Palomar con el pretratamiento “de frío”. Quilmes Painé fue el único cultivar que no regeneró plantas verdes (Tabla 1). El pretratamiento ¨de frío¨ produjo aproximadamente cuatro veces más plantas verdes (37) que el ¨de manitol¨ (9). Además de producir un mayor número de callos, el pretratamiento ¨de frío¨ produjo callos de mejor comportamiento en la regeneración de plantas . Esto se vio reflejado en el número de plantas verdes obtenidas cada 100 callos. Se obtuvo 8,96% con el pretratamiento ¨de frío¨ y 4,21% con el ¨de manitol¨. Se determinó que existe variabilidad genética en la habilidad androgenética de los seis cultivares que se evaluaron, mediante esta técnica, ya que se detectaron diferencias genéticas en la eficiencia de regeneración de plantas verdes. Además, se encontraron diferencias genéticas en la eficiencia de producción de callos y de plantas totales. En los cultivares que se evaluaron, el número de plantas totales y el de plantas verdes regeneradas están relacionados de una forma estrecha con el número de callos producidos. Tabla 1: Número de callos, plantas totales, plantas verdes y plantas albinas producidos cada 100 anteras cultivadas
PRETRATAMIENTOS GENOTIPOS FRIO CA% PT% PV% PA% QUILMES PALOMAR 54,2 25,4 5,0 20,4 SCARLETT 37,9 17,1 4,2 12,9 CARLA INTA 40,4 19,2 3,8 15,4 B1215 21,3 8,8 1,3 7,5 QUILMES ALFA 18,3 6,3 1,3 5,0 QUILMES PAINE 5,0 2,1 0 2,1 PROMEDIO 29,5 13,2 2,6 10,6
MANITOL CA% PT% 21,7 7,5 22,1 11,7 20,0 8,8 14,6 4,6 10,8 3,3 12,5 1,7 17,0 6,3
PROMEDIO PV% 1,3 1,3 0,4 0,4 0,4 0 0,6
PA% 6,3 10,4 8,3 4,2 2,9 1,7 5,6
CA% 37,9 30,0 30,2 17,9 14,6 8,8 23,2
PT% 16,5 14,4 14,0 6,7 4,8 1,9 9,7
PV% 3,1 2,7 2,1 0,8 0,8 0 1,6
PA% 13,3 11,7 11,9 5,8 4,0 1,9 8,1
CA: Callos; PT: Plantas; PV: Plantas verdes; PA: Plantas albinas
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