Anexo 7

Anexo 7 ACTIVIDAD DE LABORATORIO

MITOSIS Y EXTRACCIÓN DE ADN EN CEBOLLA La mitosis (M) es normalmente el período más corto del ciclo celular, con una duración aproximada del 5 al 10% del mismo. El evento principal consiste en la duplicación de los núcleos celulares con todos sus cromosomas y su ADN. La célula que se divide se llama célula madre o parental y las resultantes células hijas. Cada célula hija no sólo contiene un núcleo con el número cromosómico completo, sino que contiene también aproximadamente la mitad del citosol y organelos de la célula progenitora. Por lo tanto la mitosis es el proceso de formación de células nuevas y el núcleo es la principal estructura participante. Durante la mitosis se pueden observar cambios progresivos en la estructura y apariencia de los cromosomas; los biólogos han dividido convencionalmente este proceso para su estudio en cuatro fases: profase, metafase, anafase y telofase. Profase: Es el primer estado de la mitosis. Los cromosomas sufren un proceso de condensación hasta formar una serie de espirales; al adquirir esta estructura pueden desplazarse con más facilidad. Cuando los cromosomas se hacen visibles, cada uno aparece como un doble filamento compuesto por dos mitades longitudinales, las cromátidas hermanas. Cada cromátida contiene una de las moléculas replicadas de DNA, ambas son idénticas desde el punto de vista químico y se encuentran unidas en la región del centrómero. En la profase el centrómero se divide en un par de centrómeros hermanos, desaparecen los nucleolos (estructuras esféricas intranucleares que contienen componentes ribosómicos) y la membrana nuclear. El citoplasma y el nucleoplasma se hacen un sólo.

Metafase: Se hace visible el huso acromático cuyas fibras apuntan hacia cada uno de los polos celulares. Los cromosomas se acomodan en el planto ecuatorial de la célula y cada centrómero hermano se une a las fibras del uso provenientes de polos opuestos. Anafase: Es la fase mitótica más corta, ocurre cuando se separan los pares de cromátidas hermanas y cada miembro de este par, se mueven hacia los polos opuestos del huso. Cuando las cromátidas de mueven, parecen seguir a su respectivo centrómero por lo que los cromosomas adquieren la forma de una V con las puntas dirigidas hacia los polos. Telofase: En esta

fase

se

forma una nueva membrana nuclear alrededor de cada núcleo hijo, los cromosomas se desenrollan y reaparecen los nucleolos; es decir, se regeneran

los

núcleos

interfásicos. Al final el huso se ha

dispersado

y

el

citoplasma se ha dividido en dos por la formación de una nueva membrana celular. OBJETIVO  Identificar las formas de organización del material genético en células (eucariotas) interfásicas y en división.

MATERIAL  Bulbos de cebolla  Portaobjetos  Cubreobjetos  Vidrio de reloj  Navaja de rasurar nueva  Pincel delgado  Servilletas desechables  Lienzo de franela  Lápiz con goma  Barniz transparente para uñas  Microscopio campo claro  Ácido clorhídrico 5N  Ácido acético al 45%  Acetorceína PROCEDIMIENTO 1. Con una navaja se corta a la cebolla las raíces muertas. 2. Se coloca la cebolla en un recipiente sumergiendo en agua la parte de la raíz rasurada. Se coloca en un sitio oscuro. 3. Se cambia el agua cada 24 horas para evitar la formación de hongos y se limpia el bulbo con frecuencia para evitar que se pudra. 4. Una vez que las raíces alcancen una longitud de 3 cm, se selecciona aquellas que se observen traslúcidas y al tacto sean las más suaves. Se hace un corte a 1 cm de la punta. 5. Con la navaja de rasurar nueva y sobre un portaobjetos, se efectúa un corte longitudinal al fragmento de raíz, después se hacen cortes transversales de aproximadamente 2 mm de longitud. 6. Con el pincel se colocan los cortes en un portaobjetos excavado y rápidamente se agregan unas gotas de HCI 5N hasta cubrirlos.

7. Después de 3 min. Se absorbe el ácido con una servilleta evitando tocar los cortes. 8. Se cubren los cortes con unas gotas de acetorceína durante 12 minutos. 9. Con el pincel delgado se pasan dos cortes a un portaobjetos plano procurando que queden centrados, (procurando no secar el colorante). Se pueden hacer varias preparaciones con una sola raíz. 10. Se agregan dos o tres gotas de ácido acético al 45% para quitar el exceso de colorante. 11. Se coloca el cubreobjetos de canto y se deja caer suavemente sobre los tejidos para evitar la formación de burbujas. 12. Se presiona con la goma de un lápiz firmemente sobre el cubreobjetos hasta extender el tejido (squash), con cuidado para que no se deslice. Este paso se puede realizar sobre una servilleta en una superficie plana para presionar sin dificultad y evitar romper la preparación. 13. Se absorben con una servilleta los obrantes de la tinción cuidando de no secar en exceso para no deshidratar los tejidos. 14. Se hace la observación en el microscopio a 10X y si las células se observan claramente aún sin identificar las fases, se pasa al siguiente aumento. 15. Se sellan los borden del cubreobjetos con esmalte de uñas transparente y así obtenemos una preparación temporal. 16. Se realiza la observación a través del microscopio con diferentes aumentos, se enfoca el área en que a simple vista se ven los tejidos teñidos.

Actividades  Con apoyo de las descripciones e imágenes que se incluyen en esta práctica, identifica las fases de la mitosis.  Dibuja tus observaciones y escribe el nombre de las etapas de la mitosis y del ciclo celular según va el ciclo.  Indica en tus dibujos las estructuras cromosómicas que logres identifica.  Describe tus observaciones con relación a la organización del material genético en la interfase y en cada fase de la mitosis.